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Histopathologie > fixation (chapitre 2) > Flashcards

fixation (chapitre 2) Flashcards

1
Q

Quels changements subi un tissu coupé de son environnement métabolique normal?

A
  • modifications morphologiques (forme des cellules)

- modifications métaboliques (chimie à l’intérieure de la cellule)

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2
Q

Quels sont les buts de la fixation?

A
  • Immobiliser les tissus dans un état aussi proche que possible de celui du vivant
  • Permettre au tissu de résister à toutes les manipulations qu’il aura à subir ultérieurement
  • Protéger contre les bactéries
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Q

La fixation est réversible ou irréversible?

A

Irréversible

C’est une des seules qui l’est d’ailleurs

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4
Q

Que va entraîner un délai trop long entre le prélèvement et la fixation?

A

à l’autolyse et/ou à la putréfaction

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5
Q

Quelles sont les caractéristiques de la putréfaction?

A
  • Destruction des tissus par les bactéries
  • Bactéries peuvent être endogènes ou exogènes
  • Les tissus qui possèdent une flore normale très abondante sont les plus affectés
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6
Q

Quelles sont les caractéristiques de l’autolyse?

A
  • Autodigestion des tissus
  • Causée par les lysosomes
  • Favorisée par la température et par l’activité des organes juste avant la mort ou le prélèvement
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7
Q

L’autolyse s’attaque à quoi et dans quel ordre le fait-elle?

A

1- les structures intra-cellulaires
2- la forme de la cellule
3- le rapport cellulaire

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8
Q

Quels sont les mécanismes de la fixation?

A

1- Inactivation (insolubilisation) des molécules qui pourraient changer la morphologie tissulaire
(arrêter les activités enzymatiques)
ex: enzymes

2- Préservation de l.intégrité chimique des tissus (l’architecture des tissus est ainsi conservée)

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9
Q

Pourquoi est-il important de fixer les protéines?

A

Pour refléter la structure

On doit inactiver les enzymes (donc les modifier chimiquement

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10
Q

Quel est l’état des protéines dans les tissus?

A
  • Les protéines sont globulaires ou fibreuses (structure tertiaire)
  • Leur taille les empêche de diffuser à travers la membrane semi-perméable (1 à 100 nm environ)
  • elles peuvent être mises en solution –> les protéines se dispersent dans le solvant mais ne s’y dissolvent pas vraiment. Leur taille les empêche toutefois de se déposer dans le solvant

Ces caractéristiques les classes dans le groupe des colloïdes

  • Système liquide: SOL (solution colloïdale)
  • Système possédant une certaine rigidité (du à la phase dispersée: GEL
  • milieu de dispersion et l’eau: l’ensemble est liquide: HYDROSOL
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11
Q

Fixation des protéines par coagulation?

A
  • Juste sur l’albumine

- Formation d’une caillot = coagulant

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12
Q

Fixateurs additifs?

A
  • Forment des ponts qui unissent les chaînes protéiques les unes aux autres
  • -> Polymérisation (mais n’entraîne pas nécessairement la formation d’une caillot opaque dans une solution d’albumine)
  • Transforment les SOLS en GELS
  • Lorsqu’ils agissent sur des GELS, ils les solidifient
  • Formaldéhyde dans cette catégorie
    (fixateur additif, non coagulant)
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13
Q

Fixateurs non additifs

A
  • sont toujours non coagulant
  • ont peu d’effets sur les protéines cytoplasmiques
  • -> Acide acétique fait partie de cette classe:
  • Il précipite les nucléoprotéines et l’ADN (principale utilité en histologie)
  • Il gonfle les tissus par imbibition d’eau
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14
Q

Dénaturation des protéines?

A
  • Habituellement réversible
  • Implique le bris de liens moléculaires internes ou externes
  • Plusieurs enzymes peuvent être inactivées par dénaturation
  • peut entraîner l’insolubilisation des protéines (bris de liens hydrogène qui lient la protéine à des molécules d’eau)
  • peut augment le nombre de sites accessibles suite au dépliement (augmente donc la réactivité aux techniques de détection)
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15
Q

Comment est considéré un fixateur qui n’agit que par dénaturation?

A

comme non-additif

il ne crée pas de liens proprement dit avec les protéines

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16
Q

Quel est le polysaccharides les plus important en histopathologie?

A

le glycogène

17
Q

sous quelles formes peut se présenter le glycogène dans les tissus?

A
  • Desmoglycogène:
    lié à des protéines et très polymérisé
  • Lyoglycogène:
    de masse moléculaire inférieure et sous forme libre (donc soluble)
18
Q

Quels sont les 2 mécanismes suggérés pour expliquer la fixation du lyoglycogène?

A

1- Le lyoglycogène serait présent sous forme hydratée et la déshydratation du tissu entrainerait la dénaturation du glycogène et sons insolubilisation
(cette hypothèse explique bien le succès de l’éthanol à cet égard)

2- la formation de ponts entre les molécules de glycogène (polymérisation) modifierait ses propriétés de solubilité –> formaldéhyde

19
Q

Du point de vu de la fixation, les lipides tissulaires sont classés en quels groupes?

A

1- Les lipides homophasiques (simples)

2- Les lipides hétérophasiques (complexes)

20
Q

Les lipides homophasiques (simples)?

A
  • Retrouvés dans le cytoplasme sous forme de gouttelettes
  • Chimiquement libres
  • Hydrophobe (insolubilisation difficile dans l’eau
    (La plupart des fixateurs étant en solution aqueuse, ils n’ont pas tendance à les extraire)
  • Susceptibles d’être perdus au cours des étapes ultérieures de la technique histopathologique (circulation et montage) puisqu’ils sont solubles dans le toluène (agent éclaircissant)
21
Q

Quel est le principal problème rencontré au cours de la fixation?

A

Le déplacement des gouttelettes lipidiques

Il est donc important de bien fixer les molécules avoisinantes

22
Q

Quels agents peuvent insolubiliser les lipides?

A
  • le tétroxyde d’osmium

- Le formaldéhyde combiné au sel (chlorure de calcium ou de cadmium) –> certains lipides

23
Q

Les lipides hétérophasiques (complexes)?

A

Phospholipides (les plus intéressant du point de vu histologique):

  • tête polaire (lie les protéines et l’eau)
  • peuvent être solubilisé dans l’eau (donc dans le fixateur aqueux)
  • la fixation modifie leur solubilité et leur réactivité chimique
  • sont souvent fixés en présence de sels (chlorure de calcium)
  • chlorure mercurique est utile dans certaines techniques
24
Q

Quels sont les effets de la fixation ?

A
  • immobilisation des cellules et des tissus
  • inhibition de l’autolyse tissulaire
  • inhibition de la putréfaction
  • solidification du matériel colloïdal
  • durcissement des tissus
  • Modification des indices de réfraction des structures tissulaires
  • Modification du volume tissulaire
  • Insolubilisation des constituants cellulaires et tissulaires étudiés
  • Modification des affinités tinctoriales du tissu
  • Mordançage
25
Q

immobilisation des cellules et des tissus?

A
  • souhaitable et essentiel:

Il faut conserver une ressemblance maximale avec le tissu vivant pour établir un diagnostic approprié

  • Aide le tissu à supporter les manipulations jusqu’à la coupe
26
Q

inhibition de l’autolyse tissulaire?

A
  • souhaitable et essentiel
  • Mort cellulaire –> destruction des membranes lysosomiales. Les lysosomes répandent leur enzymes (cathepsine) dans le cytoplame
  • Enzymes:
    protéinases, aminopeptidases, carboxypeptidases
  • Tissu autolysé est caractérisé par un manque de détails microscopiques (impression de mauvaise mise au point au microscope)
27
Q

Quel est l’organe qui s’autolyse le plus rapidement?

A

Le cerveau (particulièrement sensible à tout manque d’oxygène)

28
Q

Inhibition de la putréfaction?

A
  • destruction du tissu par action microbienne
  • Une fois retiré de son environnement normal, un organe n’a plus de défense contre l’action des m/o, y compris ceux de la flore normale. Ceux-ci consommeront les tissus pour survivre.
  • caractérisé par une perte de détails morphologiques et par un vacuolisation (causée par la présence de gaz produit par certaines bactéries)
  • Les organes contenant une roche flore bactérienne sont particulièrement exposés à la putréfaction
29
Q

Solidification du matériel colloïdal?

A

SOL –> GEL

GEL –> GEL STABILISÉ

30
Q

durcissement des tissus?

A
  • souhaitable, mais pas trop
    (permet leur manipulation dans trop de dommages)
  • tolérance/intolérance
31
Q

étapes les plus intolérantes pour les tissus?

A

Les étapes de la circulation

Des tissus trop durcis au cours de la technique à la paraffine se coupent difficilement au micrtome

32
Q

Modification des indices de réfraction des structures tissulaires?

A
  • souhaitable, mais pas suffisant
  • fixation modifie l’indice de réfraction des différents composés tissulaires de façon non homogène
    (permet de les différencier dans un tissu frais, même s’il n’est pas coloré)
  • sans l’étape de la coloration, cette modification ne permet pas de faire l’examen microscopique du spécimen
33
Q

Modification du volume tissulaire?

A
  • En général: rétraction
  • Dans certains cas: gonflement
  • Le plus redoutable: Distorsion

(un changement du rapport des volumes nucléaires et cytoplasmiques peut conduire à des erreurs d’interprétation diagnostique puisque ce changement est un critère de pathologie lorsqu’il est réel)

34
Q

Insolubilisation des constituants cellulaires et tissulaires étudiés?

A
  • Permet de garder sur place ceux qui nous intéressent

- Effet favorable

35
Q

Modification des affinités tinctoriales des tissus?

A

Exemple des acides nucléiques fixés à l’acide acétique

1- L’acide acétique sépare les acides nucléiques des protéines auxquelles ils sont liés

2- Libération des groupes réactifs: les groupements phosphates étant anioniques, la basophilie nucléaire est augmentée

36
Q

Mordançage?

A

dans certains cas, on peut choisir un fixateur qui favorise la réussite d’une coloration particulière

–> fixateur-mordanceur

37
Q

Quels sont les facteurs qui influent sur la qualité de fixation?

A
  • Vitesse de pénétration (mm/h):

chaque fixateur a une vitesse de pénétration
particulière.

Dans les mélanges fixateurs, ce facteur prend de l’importance –> si les vitesses de pénétration des fixateurs composant un mélange sont très différentes, les fixateurs pénétrant rapidement seront les seuls à exercer leur effets sur les tissus

A un lien avec le temps de séjour et les dimensions de la pièce

  • Vitesse de la réaction de fixation:

Ne correspond pas nécessairement à la vitesse de pénétration et est difficile à évaluer

  • Volume de liquide fixateur:

Tissu doit être plongé dans une quantité de liquide fixateur qui équivaut à 15 à 20 fois son volume

  • Épaisseur des pièces:

Plus gros, plus lent (Cube plus long que rectangle plat)

  • Consistance des tissus:

Densité importante nuit à la pénétration du fixateur (plus susceptible de durcir en cours de fixation)

  • Durée de la période de fixation:

Varie en fonction de l’épaisseur du tissu, de la vitesse de pénétration du fixateur, du volume de liquide, etc.

  • Concentration de l’agent fixateur:

Chaque fixateur a une concentration optimale qui est prise en compte dans les recettes

  • Température

Froid: ralentit les réactions chimiques et peut temporairement se substituer à la fixation
Chaleur: peu utilisés

  • pH

Entre 6 et 8
Certains fixateurs voient leur propriétés changer radicalement avec les variations de pH (formaldéhyde et bichromate de potassium)

  • Lavage post-fixation

Peuvent entraîner la perte de composés d’addition utiles que forment certains fixateurs avec les protéines

Nécessaire dans d’autres cas (bichromate de potassium)

  • Présence de sels indifférents:

Certains fixateurs acquièrent des propriétés très utiles lorsqu’ils sont mélangés à des sels comme le chlorure de sodium, le sulfate de sodium et le chlorure de calcium

38
Q

Classification des agents fixateurs simples?

A

Ils peuvent être classés de plusieurs façon dont chacune a sa raison d’être.

1- Effets sur les protéines:
critère important au niveau de la préservation morphologique et biochimique des tissus

2- Caractère additifs`:
Touche les protéines
Facteur important au sujet des propriétés tinctoriales des tissus

3- Propriétés de tolérance:
Important afin de déterminer la durée optimale de fixation qui permettra de minimiser la dureté subséquente des tissus (DURÉE MAX POUR UNE DURETÉ MIN)

4- Nature chimique:
Les aldéhydes comportent assez de propriétés communes pour qu’on puisse utiliser leur nature chimique comme critère de classification

39
Q

Quels sont les autres principes de fixation?

A

1- Fixation secondaire (ou post-mordançage):

FIXATION PRIMAIRE:Avec un fixateur simple (souvent le formaldéhyde)

FIXATION SECONDAIRE: vise à améliorer la coloration subséquente.
Elle peut se faire au début de la circulation ou sur la lame avant la coloration (après le déparaffinage)

2- Post-chromisation:

Étape où on plonge les coupes dans le bichromate de potassium après une fixation primaire.

Améliore la préservation et la coloration des mitochondries et de la myéline.

Histopathologie (4 decks)

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