décalcification (chapitre 3) Flashcards
À quelle étape se fait la décalcification?
entre la fixation et la circulation
quel est le but de la décalcification?
Permettre la confection de coupes à la paraffine à partir de tissus calcifiés
Quels sont les tissus qui nécessitent une décalcification?
ceux qui contiennent des substances minérales (sels de calcium ou hydroxyapatite de calcium de la moelle osseuse):
- os
- dents
- kystes avec dépôts de calcium
- lésions pathologiques calcifiées (ex: tumeur)
Quelles sont les conditions d’une bonne décalcification?
1- L’enlèvement complet du calcium
2- Absence de dommages pour les cellules et le fibres
Dans le cas des acides, il faut bien prendre garde :
- Temps d’action
- Concentration
- -> ajout d’un peu de formaldéhyde permet une meilleure préservation de la structure tissulaire
3- Préservation des affinités tinctoriales
4- Vitesse appropriée
Si l’étape de la décalcification est incomplète, que ce passe-t-il?
1- Bloc excessivement dur
2- Bloc de consistance inégale
Il y aura donc des difficultés lors de la coupe au microtome. Les coupes déchireront perpenticulairement au couteau.
Quels sont les décalcifiants les plus susceptibles d’altérer les propriétés tinctoriales des tissus?
Les acides
pH très bas –> change les charges (affecte affinité des structures pour le colorant)
Quels sont les mécanismes de la décalcification?
1- Solubilisation du calcium par un agent acide
2- Enlèvement du calcium par un agent chélateur
3- Électrolyse
4- Utilisation de résines échangeuses d’ions
Solubilisation du calcium par un agent acide?
Sels de calcium tissulaires: insolubles
Au contact d’un acide, ils se dissocient
Acides les plus couramment utilisés: 1. Acide nitrique 2. Acide formique 3. Acide trichloroacétique 4. Acide picrique 5. Acide sulfosalicylique 6, Recettes secrètes commerciales (on peut y laisser les tissus plus longtemps --> formol)
Enlèvement du calcium par un agent chélateur?
Le plus connu: EDTA
Nom commercial: Versene ou Sequestrene
Forme avec le calcium des complexes solubles mais non ionisés (contrairement aux acides)
L’utiliser à pH entre 6,5 et 7,5 –> sinon il hydrolyse les protéines
Électrolyse?
S’utilise avec un agent décalcifiant acide.
Cathode (borne négative) attirerait les ions Ca (+) libérés dans le décalcifiant
Température peut accélérer le processus, mais peut endommager le tissu
Utilisation de résines échangeuses d’ions?
S’utilise avec un décalcifiant (en préserve la pureté)
Quelles sont les étapes de la décalcification?
1- Sélection du spécimen:
On peut devoir couper le spécimen à l’aide d’une scie.
La surface de coupe est alors inutilisable
On peut s’en débarrasser au moment de la vérification de la fin de la décalcification
2- Fixation:
Le tissu doit absolument être fixé AVANT la décalcification (sinon les cellules sont trop endommagées)
3- Décalcification
4- Neutralisation de l’acide
Le pH acide résiduel entrainerait un gonflement des fibres collagènes
Sulfate de Li à 5% dans l’eau pendant 1 nuit (ou éthanol, le même temps)
Ensuite,
- Lavage (si on a neutralisé au sulfate –> une nuit à l’eau courante)
- Coupe:
Paraffine: circuler directement
Congélation: hydrater le tissu pour qu’il congèle bien
Quels sont les agents décalcifiants acides les plis couramment utilisés et quelles sont leurs propriétés?
1- Acide formique (H-COOH):
Formule Gooding et Stewart:
- Acide formique
- Formol
- Eau distillée
Durée:
2 à 4 jours quand la concentration est de 5% (si on augment la concentration, on diminue le temps, mais on diminue la qualité de la conservation des tissus)
2- Acide nitrique (HNO3)
- Excellent résultats en peu de temps
- Concentration recommandée: 5%
- Dégagement d’acide nitreux (HNO2) au cours de la réaction–> peut nuire au coloration ultérieure; on ajoute de l’urée (0,1%) à l’acide nitrique concentré
3- Acide trichloroacétique (C2HCl3O2)
Formule Cal-Ex II : sert à la fixation et à la décalcification:
- Acide trichloroacétique
- Formaldéhyde
- Mordant
- Surfactant
Quels sont les autres agents décalcifiants (exepté les acides)
EDTA:
- pH 7
- agit plus lentement que les acides
- aucune bulle
- ne détruit pas les enzymes
(tolérant, sans distorsion)
Facteurs susceptibles d’influer sur la décalcification?
Chaleur:
accélère la décalcification mais augmente en même temps de façon importante les dommages causés aux tissus:
- Diminution de la coloration nucléaire (surtout)
- On ne devrait pas dépasser 37 C
À quoi servent les vérifications de la fin de décalcification?
minimiser les effets négatifs des agents décalcifiants sur les tissus
Techniques permettant de vérifier la fin de la décalcification?
1- Radiographie (le best)
2- Procédés mécaniques (Test physiques)
3- Test chimique (2e meilleur)
La radiographie des tissus?
Les zones calcifiées apparaissent blanchâtre sur une radiographie
Procédés mécaniques?
1- Torsion
2- Piquage à l’aiguille
- petites pièces
- pire des 3 procédés mécaniques
3- Coupe au bistouri
Meilleure technique sans lésion si on coupe la région du tissu ayant été coupé par la scie au moment du prélèvement, ou un autre endroit peu représentatif
Test chimique?
PRINCIPE:
Rechercher la présence de sels de calcium dans le liquide décalcifiant une fois la décalcification possiblement complétée
TECHNIQUE:
- Quand la déclacification semble complétée, on place le tissu dans un liquide décalcifiant frais pendant 2 à 3h
- On prélève 5 mL du décalcifiant et on le neutralise –> Hydroxyde d’ammonium ou de sodium (homogénéiser
- On ajoute ensuite 1 à 2 mL d’oxolate d’ammonium ou de sodium (homogénéiser)
Liquide turbide:
incomplète (formation d’oxolate de calcium)
Liquide clair (pas de turbidité): complète
Peut-on utiliser le test chimique afin de déterminer la fin de la décalcification lors de l’utilisation de résines échangeuses d’ions comme méthode de décalcification?
Non
Le liquide est toujours sans ions, puisque ceux-ci sont liés à la résine
Le liquide est toujours pur, donc la réaction sort toujours incomplète.
Quels sont les effets secondaires de la décalcification?
- Extraction des acides nucléiques; diminution de la basophilie:
on perd des charges négatives.
Les colorants cationiques (+) auront moins d’affinité pour le tissu
- Extraction du fer tissulaire
ex: hémosidérine - Extraction du glycogène
(par les acides surtout) - Plusieurs enzymes sont inactivées
Amollissement des tissus?
Plusieurs tissus sont difficiles à couper à cause d’une dureté. On peut leur faire subir un traitement pour contrer ce problème:
- Si le tissu n’est pas inclus:
Tremper 1 à 3 jours dans une solution aqueuse de phénol à 4% - Si le tissu est déjà enrobé:
Le déposer face vers le bas dans un mélange d’aniline (9:1) de 1 à 3 jours
