fasicule Technique

Question 1

🧚🏻‍♀️Quelle technique permet de séparer deux feuillets membranaires ?

Answer 1

La cryofracture
But = séparer deux feuillets membranaires (les deux couches de la membrane plasmique)

Question 2

Solution hypotonique

Answer 2

Solution de faible tonicité
Concentration en soluté est faible (concentration en sel < 0,6%
Il va y’a voir une entrée d’eau dans la cellule =la cellule va gonfler

Question 3

Solution isotonique

Answer 3

Concentration en soluté correspond à la concentration retrouvédans la cellule
Si la cellule est placé dans cette solution elle ne change pas de forme

Question 4

Solution hypertonique ? Comment on appelle le phénomène qui en découle ?

Answer 4

Concentration en soluté est élévé
La cellule va se contracté
= hémolyse

Question 5

Def osmolarité

Answer 5

Nombre de particules dissoutes par litre de solution

Question 6

🧚🏻‍♀️C’est quoi l’histologie ?

Answer 6

C’est la science des tissus

Permet de créer des couples histologique qui permet d’observer la cellule

A /L’observation au microscope optique des structures cellulaires d’un tissu se fait sur des coupes histologiques fines que l’on réalise soit à partir d’un échantillon inclus dans de la paraffine soit à partir d’un échantillon congelé selon les étapes des protocoles suivants :

B/L’observation au microscope électronique à transmission (voir Microscropie électronique) des structures cellulaires d’un tissu se fait sur des coupes ultrafines obtenues selon le protocole suivant :

Question 7

Microscopie optique à transmission (fiche)

Answer 7

Question 8

Microscopie à fluorescence (fiche)

Answer 8

Question 9

Microscopie éléctronique à transmission (fiche)

Answer 9

Question 10

Microscopie à balayage (fiche)

Answer 10

Question 11

C’est quoi la limite de séparation ou pouvoir séparateur

Answer 11

Question 12

Tableau comparatif entre microscopie photonique et électronique à transmission (fiche)

Answer 12

Question 13

🧚🏻‍♀️Quelle technique utilie-t-on pour séparer des organites (ex: isoler des mitochondries) ?
Quel est le but et le principe de cette technique ?

Answer 13

On utilise le fractionnement cellulaire. C’est une technique qui permet de séparer les organiques.

Le principe est le suivant: la force de centrifugation va permettre de déplacer certaines particules dép: taille, masse, densité, formes et celle-ci vont donc pouvoir être différencier

Fiche : La force centrifuge appliquée à des particules en suspension dans un milieu liquide augmente leur vitesse de sédimentation. La vitesse de déplacement des particules dépend de leur taille, masse, densité et de leur forme. Dans des conditions données de centrifugation, pour une particule précise, cette vitesse est constante et la particule peut être caractérisées par son coefficient de sédimentation exprimé en unités Svedberg (S = 10-13 sec).
Les différences de coefficients de sédimentation entre les organites ou les macromolécules cellulaires de taille et/ou de densité différentes permettent leur séparation.

Question 14

Centrifugation sur gradient de densité

Answer 14

Question 15

Culture cellulaire

Answer 15

La culture cellulaire est une technique utilisée pour faire croire en dehors de leur organisme d’origine des cellules non organisées en tissus mais capable de se diviser en conservant leur identité spécifiques d’origine (cellules nerveuses, musculaires, hépatique etc…). La culture cellulaire doit se faire dans une pièce de culture cellulaire et dans des conditions stériles. Les cellules se manipulent sous Poste de Sécurité Microbiologique (PSM) pour éviter les contaminations et sont cultivées dans un incubateur à une température de 37 °C et dans une atmosphère très humide à teneur en CO2 contrôlée, souvent 5 %.
On peut cultiver des cellules prélevées fraichement d’un organisme, on parle alors de culture primaire. Ces cellules ont un pouvoir de division limité et ne peuvent pas être maintenues en culture indéfiniment. On peut cultiver des cellules ayant un pouvoir de division illimité, on parle alors de culture de lignées cellulaires immortalisées (cellules cancéreuses, ou cellules saines rendues immortelles artificiellement).
On peut cultiver des cellules non adhérentes, en suspension dans leur milieu nutritif dans un flacon de culture ou des cellules adhérentes, sur des boites de culture en plastique (boite de Pétri) leur offrant des capacité d’adhérence, recouvertes de leur milieu nutritif.

Question 16

C’est quoi un isotope ?

Answer 16

LES ISOTOPES
Les isotopes sont des éléments atomiques ayant le même nombre atomique (même nombre de protons et d’électrons périphériques donc ayant les mêmes propriétés chimiques mais de masse différente.
L’hydrogène 11H, un proton, un électron : isotope le plus fréquent dit froid (stable).
Le deutérium 21H, un proton, un électron, 1 neutron: isotope lourd et stable.
Le tritium 31H, un proton, un électron, deux neutrons : isotope lourd et instable
Le tritium est dit radioactif. C’est un radioisotope c’est-à-dire qu’il se désintègre spontanément en émettant un rayonnement. Dans le cas du tritium, les neutrons se décomposent en émettant des particules b à basse énergie qui sont en fait des électrons.

Question 17

C’est quoi un précurseur ?

Answer 17

Un précurseur est une molécule qui entre spécifiquement dans la composition d’une macromolécule. Si dans cette molécule un ou plusieurs isotopes froids sont substitués par un ou plusieurs isotopes radioactifs, ces molécules sont appelées des précurseurs radioactifs. Ce sera par exemple l’uridine pour étudier l’ARN, la thymidine pour étudier l’ADN, un acide aminé pour étudier les protéines. Pour étudier la synthèse des acides nucléiques, le précurseur est un nucléoside qui peut entrer dans la cellule, il sera transformé en nucléosides triphosphates dans la cellule pour participer à la synthèse d’ARN ou d’ADN).
Des expériences identiques peuvent être réalisées avec des précurseurs lourds ou avec des précurseurs radioactifs, seule la détection de l’isotope sera différente :
Isotopes lourds : détection par centrifugation de densité ou de flottaison
Isotopes radioactifs : détection par autoradiographie ou avec un compteur à scintillation.

Question 18

C’est quoi le principe du marquage isotopique ?

Answer 18

PRINCIPE DU MARQUAGE ISOTOPIQUE
Le marquage isotopique repose sur le fait que la cellule ne distingue pas le précurseur radioactif du précurseur dit « froid ». Il suffira donc de donner le précurseur radioactif en excès par rapport au précurseur froid pour obtenir la synthèse de macromolécules marquées.
Si le marquage (temps d’incorporation) est court (pulse), cela permettra de connaître le lieu de synthèse d’une macromolécule.
Si le marquage est long, on aura alors le lieu de synthèse mais aussi le lieu de migration éventuel de la macromolécule marquée.
Si à un marquage court on fait succéder une chasse (c’est à dire qu’après le pulse, on fournit en excès du précurseur froid), on pourra suivre en fonction du temps des différents temps de chasse le déplacement de la macromolécule marquée depuis son lieu de synthèse vers son lieu d’activité.

Question 19

Dans un marquage isotopique comment détecte-on la radioactivité ?

Answer 19

Question 20

Histoautoradiographie

Answer 20

Question 21

🧚🏻‍♀️Quel titre donne-t-on à l’observation au microscope d’un organisme unicellulaire/une cellule ?

Answer 21

Question 22

🧚🏻‍♀️Quelle technique utilise-t-on pour étudier l’activité de transport d’électrons (par la chaîne respiratoire mitochondirale) ?

Answer 22

On utilise un spectre-colorimètre

Question 23

🧚🏻‍♀️Quel est le but et le principe d’une electrophorèse ?

Answer 23

Une électrophorèse est la première étape d’un western Blood.
Le but consiste à séparer les protéines, en condition dénaturantes, dans un tamis moléculaire par migration dans un champ électronique. Cela va permettre de séparer les protéines selon leur taille.
Cela va nous permettre d’estimer la masse moléculaire

Tech :
il faut d’abord traiter les protéines pour les dénaturer (ex: beta-mercaptoéthanol, SDS),
dépôt des échantillons et mise en place des gel dans la cuve d’électrophorèse,
Établissement du champ électrique électrique (20min)
Migration des protéines dans le gel
Transfert des protéines sur membranes de nitrocellulose (on ne peut pas faire l’immuno détection sur du gel)
Révélation de toutes les protéines transférées (rouge ponceau qui colore toutes les protéines de manière non spécifique)

On peut ensuite passer à la réaction immuno chimique

Question 24

🧚🏻‍♀️Quelle technique peut-on utiliser pour détecter spécifiquement et localiser une institut dans des cellules ou un tissu une protéine spécifique ?

Answer 24

On utilise l’immunofluorescence
Le principe est d’immobiliser par fixation les protéines dans la cellule (in situ) puis de réaliser sur les coups histologique, une immunodétection

Question 25

🧚🏻‍♀️Comment fonctionne une immunodétection ? décrire les étapes dans les grandes lignes
Dans quelle technique utilise-t-on des réactions immuno chimiques ?

Answer 25

Pour réaliser un western Blood, on fait d’abord une électrophorèse, puis un transfert sur membrane, et enfin une immunodétection

Dans une immunofluorescence, on procède aussi à une réaction immunocytochimie

1° saturation de la membrane / saturation des sites aspécifique de l’échantillon
2° fixation de l’anticorps spécifique
3° révélation du complexe immun