Examen Final Bio Biotechnologie Flashcards
But de la biotechnologie
Introduire de l’ADN étranger dans un organisme afin d’étudier/récolter/produire de l’ADN/ARN/protéine
Étapes principales pour arriver au but de la biotechnologie (6)
- Choix de l’organisme selon le but finale
- Choix du vecteur
- Choix de la technique d’insertion du vecteur dans l’organisme
- Sélection du clone contenant le gène
- Étude du système d’expression
- Le but: ADN/ARNm/protéine
Qu’est-ce qu’un système d’expression
Par exemple une bactérie qui a un plasmide avec un ADN recombinant
Qu’est-ce qu’un ADN recombinant
L’ensemble formé par un vecteur et ses fragments insérés d’ADN
Les 6 étapes pour faire de l’ADN recombinant
- Couper l’ADN de l’organisme donneur
- Insertion dans un vecteur
- Insertion du vecteur dans une bactérie
- Sélection du recombinant
- Multiplication du recombinant
- Production de protéine/ recherche fondamentale du gène et/ou de la protéine/ OGM
Qu’est-ce qu’une enzyme de restriction
Enzymes naturellement présentes chez les bactéries qui les protègent contre l’ADN étranger
Spécifique à une séquence précise de nucléotides
Utilité d’une enzyme de restriction
Coupe le génome des bactériophages (ADN)
Particularité des enzymes de restriction
Palindromes
Nommer les 2 types d’extrémité des enzymes de restriction
Franche
Cohésive: coller 2 liaisons hydrogènes entre les 2 ADN
À quoi sert l’ADN ligase
Relier les bouts d’ADN
Les nucléotides des extrémités cohésives s’associent par …
Par liaisons hydrogènes
Par complémentarité des bases
Différence entre extrémités cohésives et franches
Toutes les franches sont compatible entre elle (avantage)
Cohésive doit trouver LA bonne séquence
Franche plus difficile à lier, - efficace
Meilleure choix entre franche et cohésive?
Cohésive
À quoi servent les vecteurs de clonage
Permettent d’insérer un gène étranger dans un organisme pour cloner des banque génomiques ou d’ADN complémentaire ou encore pour cloner gènes spécifiques
3 caractéristiques des vecteurs
Manipulation facile (petite molécule) Réplication efficace dans une cellule vivante Présence de sites de restriction
Caractéristique d’une banque génomique ou d’ADNc
Production de milliers de clones
Ne vise aucun gène en particulier
Caractéristique de gènes spécifiques
Formation d’une banque et criblage (identification de gènes)
Insertion du gène spécifique directement dans le vecteur (produit PCR digéré par enzyme de restriction)
Nommer 3 vecteurs de clonage
Plasmide
Phage
Chromosome bactérien artificiel
Les vecteurs plasmidiques possèdent…
Gènes de résistance (antibiotiques pour éviter que la bactérie se débarrasse du plasmide)
Sites de restriction spécifique
Quantité ADN cloné avec plasmide
10kb
Quantité ADN cloné avec phage
15kb
Avantages de prendre vecteur phagique
Facilement stockées et manipulées
Contient + d’ADN
Étapes vecteur phagique (6)
- Digestion de l’ADN génomique du donneur (couper avec enzyme de restriction)
- Digestion de l’ADN phagique
- Liaison de l’ADN recombinant (ADN ligase)
- Mélange in vitro de l’ADN et des composantes phagiques
- Formation de phages spontanément
- Étalement sur des bactéries sensibles
Qu’est-ce qu’un BAC
Chromosome bactérien artificiel
Gros plasmide dont la majorité des gènes ont été retirés
Seuls les gènes responsables de réplication autonome ont été conservés