Examen 2 Flashcards
el producto del primer oncogen celular descupierto, es una cinasa Y
Src
Receptores para factores de crecimiento
funcionan como…
cinasas de tirosicna (RTK)
Enlace de ligando induce _____________ y
____________ cruzada de RTKs para iniciar una cascada de señales
dimerizacion y autofosforilacion
Estructuras similares entre RTK
Tyrosine kinase domain, algunas tienen cysteine rich domain o inmunoglobulin like domain
Que regula Src
Regula proliferación, adhesión, invasión y motilidad.
Como se inactiva SRC
Tyr fosforilada y enlazada a SH2
Activación de Ras requiere…
mediadores con dominios de Src y Sos (GEF)
Que hace SOS
Convierte GDP a GTP, esto se puede revertir con GAP
reconocen y enlazan secuencias de aa
localizados hacia el terminal COOH de Y fosforiladas
Dominios SH2
reconocen y enlazan regiones con P y aa
hidrofóbicos
Dominios SH3
Pasos de cascadas dependiente de EGF
- Ras-GTP + MAP3K
- RAF+MAP2K
- MEK + MAPK
- MAPK-P entra a nucleo y activa factores de transcripcion
Otras cinasas que pueden mediar cascadas
activadas por RTKs
JNK y p38, cinasas equivalentes a MAPK en rutas de estres o radiacion que inducen apoptosis
Factores de transcripicion en casacadas activadas por RTK
- AP-1 (fos/jun): crecimiento (ciclina D),
diferenciación y Muerte - Myc (Myc, Max, Mad, Mx1): crecimiento (E2F,
CDK4), diferenciación y muerte (p53).
Otra respuestas celulares que media RAS además de proliferación
Inhibicion de apoptosis y sintesis de moleculas por PI3K y fosforilacion de AKT
Maneras de desregulacion de señales mediadas por RTK en cancer
Mutacion que afecta estructura y sobreexpresion
Fusión de genes puede causar dimerización constitutiva de RTKs
Ros + fig por traslocacion, fusion y dimerizacion
proto-oncogén que codifica para un RTK de función desconocida.
Ros
Ruta de señalización sin RTKs
Jak-STAT
Que significa STAT
Signal Transducer Activator of Transcription
Droga para inhibir la funcion de cinasas con anticuerpos monoclonales
Trastuzumab
Cetuximab
Panitumumab
NSCLC drugs
Gefitinib
Afatinib
Osimertinib
Droga inhibidora de Ras
Sotorasib
Drogas inhibidoras de RAF
Sorafenib
Vemurafenib
Dabrafenib
Drogas para MeK
Trametinib
Drogas para Abl de Bcr Abl
Imatinib
Dasatinib
Ponatinib
Paso antes del proceso de FDA
Drug developed
Animal testing for toxicity
Paso 1 de FDA
IND app (Investigational New Drug)
Paso 2 de FDA
Paso 3
Fase 1 de 20-80 para saber seguridad del medicamento
Paso 4
Fase 2 de 100 para probar efectividad
Paso 5
Fase 3: 1000 para probar seguridad y efectividad, de poblacion y dosis diferentes
Review meeting before submission of NDA
Paso 6
NDA app
Paso 7
App reviewed
Paso 8-9
Drug labeling
Paso 10
Facility inspection
Paso 11
Drug approval
Paso 12
Cancer es recesivo
Si, prueba de ratones con hibridomas de anticuerpos monoclonales
un médico investigador, propuso que la
predisposición a cáncer en individuos con ciertas condiciones
hereditarias
Alfred Knudson
un alelo mutado en gen supresor en gametos
Mutacion germinal
Mutacion en segundo alelo del mismo gen mas adelante en la vida
Mutacion somatica
Genes supresores de tumores actúan de manera directa o
indirecta para…
inhibir proliferación celular descontrolada o para reparar el ADN de la célula.
controlan proliferación celular y apoptosis (por ejemplo, rb)
Genes guardianes
detectan y reparan mutaciones en
el ADN (por ejemplo, brca1)
Genes de mantenimiento
cánceres familiares
causados por mutaciones
germinales en proto-oncogenes
Multiple endocrine neoplasia type 2 –
mutación en gen RET que codifica para
un RTK
Síndrome de Noonan – mutaciones en
la ruta de Ras/MAPK que pueden
producir leucemia.
Requiere que ambos alelos del gen
rb adquieran una mutación inactivante en la misma célula del ojo
(rb/rb).
Retinoblastoma esporádico
Requiere que la persona nazca siendo heterocigota para el gen rb (rb+/rb).
Retinoblastoma hereditario
RB1, p53, NF1, APC, INK, BRCA1/2, PTEN, MSH2 y MLH1
Genes supresores de tumores
Localizacion del gen de Rb
13q14.1-q14.2
Que regula Rb
el progreso de la
fase G1 de interfase porque modula la expresión de E2F.
mutaciones más frecuentes en Rb
-eliminacion por delecion
-frameshift
-nonsense
-missense
Otros canceres relacionados a Rb
SCLC y Osteosarcoma
Tratamiento para Rb
cirugía, radioterapia,
fotocoagulación y quimioterapia,
Mecanismos para generar perdida de heterocigosidad
- Deleción de un segmento de un cromosoma
- Recombinación durante mitosis
- No-disyunción cromosómica durante mitosis
- Conversión génica
- Replicación inducida por rompimiento de ADN
Técnicas para
detectar pérdida de
heterocigosidad
asociada a tumores
FISH
Fluorescencia por hibridacion in situ
Hipermetilación de regiones
promotoras de genes tiende a…
inhibir su transcripción.
Ejemplos de genes
hipermetilados en
tumores humanos
BRCA1
APC
PTEN
RB
Mutaciones en el gen brca1, un supresor de
tumores, están asociadas a cánceres
familiares de
mama y ovario
Personas con estas mutaciones tienen 50-80% y 30-50% probabilidad de
desarrollar cáncer de mama y de ovario en su vida,
BRCA 1 y BRCA 2
Genes que ayudan a mantener la
integridad del genoma,
BRCA 1 y 2
BRCA1 juega varios roles, incluyendo:
reclutar a RAD51 durante durante
recombinación homóloga
regular transcripción
señalizacion por estrógeno.
un GAP de la cascada de Ras.
NF1
Droga para Mek de NF1 pediatrico
Selumetinib
adenomatous polyposis coli
Gen APC de polipos intestinales
Ejemplos de Algunos supresores de tumores presentan haploinsuficiencia
Smad 4 (polipos, FT)
p27 (tumores, supresor)
PTEN (prostata, PI3K)
Dmp1 (tumores, Arf)
Una proteína polifacética con roles complejos
p53
el primer supresor de tumores identificado.
p53
un factor de transcripción considerado como “el guardián del
genoma’’ ya que mantiene la integridad genómica para que la
célula pueda llevar a cabo proliferación.
p53
Funciones de p53
Detecta cuando hay daño al material genético de la célula y activa un
programa genético para detener el ciclo celular y reparar el ADN.
Funciona como tetrámero y se autorregula.
Trabaja tanto en el núcleo y en el citosol.
Su gen es el más comúnmente mutado en los cánceres conocidos en seres
humanos.
En ausencia de estrés celular se encuentra a niveles bajos en la célula e
induce actividad antioxidante que reduce los niveles de ROS.
Homologos a p53
p63 y p73 pero no mutados en cancer
Ubiquitnacion de p53
causa degradacion o exportacion nuclear
Fosforilizacion de p53
bloquea a Mdm2
Acetilacion de p53
aumenta estabilidad de la proteina y activadad transncripcional
Efectos de activacion de p53 upstream
daño al DNA, crecimiento aberrante por señales de activacion de oncogenes y estres celular
Efectos de activacion de p53 downstream
arresto del ciclo celular o sencescencia, reparo del DNA, apoptosis e inhibicion de angiogenesis
mediadores de procesos regulados por p53 para arresto del ciclo celular
P21 + Cyclina-CDK
mediadores de procesos regulados por p53 para reparo DNA
P21 + PCNA y p53 transcribe XPC
mediadores de procesos regulados por p53 para Apoptosis
P53 transcribe a familia pro apoptotica (Noxa, puma, bax, fasr, igf)
mediadores de procesos regulados por p53 para Inhibition of angiogenesis
p53 transcribe a thrombospondin
p53 puede detener el ciclo celular o inducir
apoptosis en respuesta a
radiacion
4 dominios de p53
-Mdm2 binding
-DNA binding
-Tetramerization domain
-Regulatory domain
La mayoria de las mutaciones que afectan la función de p53 es
missense
p53 es haploinsuficiencia porque
Tetramero muta y p53 pierde su funcion
una ligasa de ubiquitina
(Ub)
MDM2
p53 ubiquitinado hace…
degradacion, ubiquitinada por mdm2
P53 regula exportacion nuclear por…
enlazamiento de mdm2 por el terminal de nh2 de p53
Inhibicion de actividad transcripcional de p53 por…
se queda enlazada por MDM2
3 activaciones de p53
- Daño del DNA por radiacion activa a ATM y CHK2
- Activacion de Oncogen activa a ARF e inhibe a MDM2
- Estres celular activa a ART y casein kinase II y activa a P53
P53 regulado por cinasas
- Daño al DNA activa a ATM que directamente puede fosforilar a p53 o con chk puede inactivar a mdm2
- Akt de P3K activa a Mdmw que inactiva a p53
p16 y p14 se producen el mismo gen por
empalme alterno del ARN
p53 Promueve apoptosis de diversas maneras porque
regula varios eventos a nivel mitocondrial
A. transducción de señales, metabolismo, tráfico de vesículas, y
organización del citoesqueleto
B. inhibición de glucólisis y de la ruta de pentosa fosfato, generación
aumentada de ROS
C. inhibición de autofagia
funciones adicionales de p53 en el citoplasma
Es causado por una mutación autosómica dominante de p53 en
la línea germinal.
Síndrome de Li-Fraumeni
Diferentes procesos que podrían inducir carcinogénesis resultan
en mutaciones en p53 que generan perfiles genéticos distintivos.
exposición a aflatoxina, radiación UV, y formación de radicales libres
Estrategias terapéuticas anti-cáncer con p53
como blanco
- Restaurar la habilidad de p53 de funcionar como factor de transcripción
- Eliminar p53 mutado
- Inhibir señales oncogénicas de p53 mutado
- Inducir letalidad sintética para eliminar células con p53 mutado.
- Inhibir/reducir interacción de p53 con MDM2
Es un proceso de muerte celular programada; un tipo de suicidio
celular.
Apoptosis
Procesos de la apoptosis
las células se encogen,
las membranas forman ampollas (“blebs”) y pasan por gemación, la cromatina se condensa y se fragmenta de manera precisa
Funciones de apoptosis
1.controlar el número de células
2.eliminar células que han sufrido algún tipo de daño
3.contribuir al proceso de morfogénesis durante el desarrollo
forman poros en la membrana externa de la
mitocondria.
proteínas pro-apoptóticas
enlazan y secuestran a las pro-apoptóticas
impidiendo su acción.
proteínas anti-apoptóticas
responde al enlace
de ligandos a receptores de muerte en la
superficie celular
ruta extrínseca
responde a señales
internas de daño celular; resulta en la
formación de poros en la membrana
mitocondrial externa por la acción de
proteínas de la familia de Bcl-2
ruta intrínseca
Fasl, apo2L/TRAIL, TNF-a, Apo3L
Ligandos
FAS, DR4, DR5, TNFR1, Dr3
Receptores
DISC
death inducing signaling complex
La expresión de Fas y
FasL es inducida por
luz UV
se expresan
en la mayoría de los
órganos. Enlace del
ligando al receptor induce
apoptosis en muchas
células cancerosas pero
no en células normales.
DR4, DR5
miembros anti-apoptóticos de esta familia pueden actuar como
oncogenes
miembros pro-apoptóticos pueden actuar como genes
supresores de tumores
La actividad de proteínas pro-apoptóticas son reguladas a diversos niveles por ubiquitinacion
Raf + mek + Erk + fosforila a BIM
La actividad de proteínas pro-apoptóticas son reguladas a diversos niveles por secuestracion
Akt y RAf fosforilan a Bad
La actividad de proteínas pro-apoptóticas son reguladas a diversos niveles por activacion
Bid es cortado por caspasas y pasa a tbid
Bim, Puma, bid, bad y noxa
pro-apo
Bcl2, bclx, bclw, mcl1 y a1
anti-apo
Son proteasas (12 identificadas en
humanos) que destruyen proteínas de
componentes celulares en residuos de
aspartato.
caspasas
zimógenos
necesitan actividad para activarse
En células cancerosas las caspasas
tienden a estar ya activadas, pero su
actividad está bloqueada
proteinas inhibidoras de apoptosis
son señales de
muerte que se enlazan a los
receptores de muerte TNFR y Fas,
respectivamente
TNF (Tumor Necrosis factor) y FasL
homólogo inactivo de
caspasa 8. Inhibe interacciones
dependientes de FADD o
procaspasa 8.
c-FLIP
produce contracción del núcleo.
Lamins
ruta que No depende de estímulos
externos (señales de muerte).
intrinseca
Requiere la participación de la
familia de proteínas de Bcl-2 que
actúa en la membrana externa
de la mitocondria.
intrinseca
MOMP
Mitochondrial Outer Membrane
Permeabilization.
Smac/Diablo inhibe a
IAPs
La activación de Bid
representa el punto de
encuentro de ambas rutas
p53 regula expresion de mediadores de ambas rutas
IGFBP impide que el
factor de crecimiento
IGF se enlace a su
receptor
FOXO3 induce Bim y
PUMA; reprime Flip
AKT/PKB ℗ a caspasa
9, inactivándola.
p53 también puede inducir apoptosis _________________________ de
transcripción.
independientemente
no pueden entrar al núcleo, no pueden enlazar ADN, carecen de dominio de
transactivación
versiones mutatnes de p53 que causa apoptosis
p53 en apoptosis __________expresión de
APAF-1, PTEN y NF-κB y ___________
expresión de IAPs, bcl-2 y bcl-x.
induce, reprime
p53 puede ser blanco de __________, ________, etc. en el citosol,
cinasas, acetilasas
hace que p53 remueva a Mcl-1 de Bak
Ac
Ub puede interactuar con MDM4 (proteína similar a MDM2) y Bcl-2
permitiendo liberación de citocromo c
p53 despues de HAUSP
- Bajo condiciones de estrés
genotóxico, Bcl-x enlaza a p53
en el citoplasma. - p53 nuclear induce la expresión
de PUMA, que sustituye a p53
en los complejos con Bcl-x en
el citosol. - p53 citosólico activa a Bax para
inducir MOMP.
expresión de PUMA conecta la actividad
pro-apoptótica de p53 en el núcleo con la del
citosol
Interacciones de p53 con otras proteínas
contribuyen al destino celular: inhibición de
ciclo celular
ausencia de myc
Interacciones de p53 con otras proteínas
contribuyen al destino celular: inhibición de
apoptosis
presencia de myc y aspp
una proteína que sirve de
cofactor para la inducción de genes pro-
apoptóticos por p53.
ASPP
En células cancerosas se han identificado
mutaciones en ASPP que
impiden su
interacción con p53 o que silencian el gen.
mutaciones presentes en cáncer que afectan el proceso de apoptosis
- Deficiencia de expresión de caspasa 8 (por hipermetilación del
promotor o mutaciones) – SCLC y neuroblastomas
Deleción de Leu 62 en caspasa 8, impidiendo su interacción con
FADD – carcinoma de células escamosas.
Expresión de bcl-2 puede estar alterada por una traslocación,
t(14;18), en la cual el gen se encuentra cercano al potenciador
(“enhancer”) del gen de la cadena pesada de Ig – común en
linfomas, y cáncer gástrico, pulmonar y de próstata.
Sobreexpresión de bcl-2 por reducción de niveles de miR-15a y
miR-16-1 es común en algunas leucemias crónicas.
Mutaciones en bak, bid y bax son comunes en varios tumores.
Expresión de XIAP es inducida en leucemias, cáncer pulmonar y
de próstata, entre otros.
Proteína que se une a fosfatidilserina, cuando esta última
se encuentra en la cara externa de la membrana plasmática.
Annexin V, para Detección de cambios en la membrana celular durante apoptosis
Análisis de apoptosis mediante citometría de
flujo
cuadros de annexin y PI
Agente que se intercala en el ADN y sirve
para indicar apoptosis en etapas tardías.
Propidium Iodide (PI)
un proceso de muerte celular que ocurre a consecuencia de daño
a la célula por falta de nutrientes, trauma físico o infección. Produce inflamcion y no necesita caspasas. Puede ser accidental o ser el resultado de un programa genético
necrosis, mecanismo y mediador de muerte celular
programa genetico que activa receptores de muerte (por ejemplo, el de TNF) y las cinasas RIPK1 y RIPK3.
necroptosis
un proceso catabólico (mediado en parte por la proteína Beclin-1)
en el cual componentes intracelulares dañados son secuestrados y
degradados para ser reciclados. Es importante bajo condiciones de inanición
de la célula y para la destrucción de orgánulos defectuosos. Puede suprimir o
promover la supervivencia de células cancerosas.
autofagia
está asociado con inflamación en el contexto de infecciones por
patógenos intracelulares. Puede ser activado por la exposición de células
cancerosas a terapias citotóxicas. Conlleva la activación de la caspasa 1.
piroptosis
está asociado con la disponibilidad de Fe y peroxidación de lípidos
intracelulares. Aparenta estar involucrado en la respuesta a ciertos agentes anti-cáncer. Evidencia reciente indica que puede ser regulado por p53.
Ferroptosis
Estrategias terapéuticas anti-cáncer dirigidas
a regular apoptosis
- quimioterapia inducen produccion de TNF que induce apoptosis.
- bcl2 + Bh3 venetoclax = inhibicion anti-apo
- Inhibidor de HDACs (SAHA) promueve actividad de factor pro-apoptótico Bid.
Se han probado terapias para activar o retirar la inhibición de IAPs
Sin exito a nivel clinico
