Examen 1 Flashcards
Pourquoi faut-il faire des duplicata?
Afin d’évaluer le coefficient de variation, avoir une précision
À quoi sert une courbe standard?
Permet de prédire la concentration du produit dans un échantillon
À quoi sert le coefficient de variation?
Sert à comparer le degré de variation d’un échantillon à un autre (le coefficient de variation devient une mesure importante de la fiabilité)
Quelle est l’équation du CV%?
CV = s / x (avec barre) x 100%
où s représente l’écart-type de l’échantillon et, x (avec barre) la moyenne de l’échantillon.
Comment faire une courbe standard et pourquoi?
Il faut préparer un ensemble de solutions standards avec des concentrations connues de produits afin de faire un lien avec l’absorbance et la concentration.
Qu’est-ce que le bleu de Méthylène? À quoi sert-il dans le labo 2?
Chlorure de méthylthioninium
Est un colorant qui peut être bleu (état oxydé) ou incolore (état réduit) tout dépend de son état rédox.
Qu’est-ce que le PBS?
Le tampon phosphate salin (PBS)
Quelle pipette utilise-t-on pour un volume qui n’a pas besoin de précision?
Pipette Pasteur et une poire
Pourquoi faire des dosages?
Afin de mesurer plusieurs composés présent dans le sang, l’urine ou la salive et de mesurer son état de santé.
À quoi sert le dosage du glucose sanguin?
Permet de déterminer la glycémie et de diagnostiquer certaines maladies comme le diabète.
Quelle est la fonction principale de l’insuline?
Permettre au glucose de pénétrer dans les tissus et les cellules du corps
Quelles sont les valeurs d’une glycémie à jeun normal?
Entre 0,74 g/l et 1,06 g/l (4,04 et 5,83 mmol/l)
Moyenne de 0,83 g/l (4,565 mmol/l)
Comment appelle-t-on la mesure du glucose dans l’urine?
Glycosurie
Qu’est-ce que l’activité de l’hexokinase?
L’utilisation d’une enzyme cytosolique qui transforme le glucose + ATP en G6P + ADP
À quel absorbance maximal le NADH absorbe la lumière UV?
340 nm
Qu’est-ce que la protéinurie?
La présence de protéines, habituellement de l’albumine, dans l’urine
Qu’est-ce que l’albumine?
Une protéine dans le sang la plus abondante (60%). Protéine soluble fabriqué par les hépatocytes. (On en retrouve aussi dans l’alimentation)
Trop de protéines dans l’urine indique quoi?
1- Un trouble potentiel au niveau du rein
2- Des troubles cardiovasculaires
Que faut-il prendre en compte dans le dosage des protéines?
Le volume sanguin de la personne
Quelle technique est utilisée pour l’analyse des protéines?
Électrophorèse
Qu’est-ce que le RIPA?
Un tampon dénaturant puissant qui permet d’extraire des protéines de la membrane, du noyau et du cytoplasme à cause du changement de pH.
Que contient le RIPA?
1- Tris-HCl ou phosphate de sodium
2- NaCl pour maintenir la pression osmotique près de la physiologique
3- SDS (détergent tensioactif ionique fort)
4- Sodium deoxycholate
5- NP-40 ou Triton X-100
Qu’est-ce que la méthode Folin-Lowry?
Une méthode de dosage colorimétrique des protéines en combinant deux réactions chimiques
Quelles sont les inconvénients de la méthode Folin-Lowry?
La méthode de Lowry n’est pas totalement fiable à cause des interférences possibles dues aux réactifs. De plus, elle nécessite un certain temps de mise en œuvre. La gamme étalon nécessaire à la détermination de la concentration d’une solution inconnue est délicate à réaliser.
La méthode utilisée en laboratoire pour mesurer la quantité de protéines existantes?
Folin-Lowry modifiée — The Bio-Rad DC Protein Assay
Qu’est-ce que la technique de Folin-Lowry modifiée? (quand on utilise le kit DC…)
Un dosage colorimétrique de la concentration en protéines après solubilisation dans un détergent
Pourquoi utilise-t-on plus la méthode Bio-Rad DC Protein Assay (Folin-Lowry modifiée) au lieu de Folin-Lowry?
Car la réaction atteint 95 % de son développement de couleur maximum en 15 minutes, économisant ainsi un temps précieux, et la couleur ne change pas plus de 5 % en 1 heure ou 10% en 2 heures après l’ajout des réactifs.
Quels acides aminés, lorsqu’ils sont exposés à le phosphomolybdate et le phosphotungstate, provoquent le développement de couleur?
Les acides aminés tyrosine (Y) et tryptophane (W)
Quelle est la longueur d’onde à la quel le bleu de Méthylène absorbe (pas mal) de lumière?
625 nm
Pourquoi il est important de mettre les échantillons de cellules/prots dans de la glace?
Car ils ont une meilleure durée de conservation à une température 4 degrés. La glace fixe leur état, pour qu’on ait une Rx, juste quand on ajoute des produits, pas entre temps (Température pièce plus propice aux Rx spontanés que la glace!)
Pourquoi est-il important de mettre des gants?
Car la présence d’une ou plusieurs substances modifiera la réponse de la protéine aux réactifs de dosage
Ex: Protéase sur la peau
Que représente le Réactif A dans le kit DC Protein Assay de Biorad?
Une solution alcaline de tartrate de cuivre
Que représente le Réactif B dans le kit DC Protein Assay de Biorad?
Un réactif de Folin-Ciocalteu, constitué principalement de phosphomolybdate de sodium et de phosphotungstate de sodium (acide chlorhydrique, acide phosphorique)
Que représente le Réactif S dans le kit DC Protein Assay de Biorad?
Tensioactif est un détergent qui utilise du SDS ayant un agent moussant
Pourquoi le Réactif B est dans du papier d’aluminium?
Car il doit être conservé à l’abri de la lumière directe du soleil à température ambiante (25-30 °C)
Pourquoi faut-il travailler près de la flamme?
Car moins de contamination. Zone stérile
À quoi sert le coefficient d’extinction molaire?
Caractérise les capacités d’une solution à absorber la lumière.
Qu’est-ce que la MCF-7 (cellule A )?
Le nom de la lignée de cellules tumorales mammaires
Qu’est-ce que la MDA-MB-231 (cellule B) ?
Une lignée cellulaire de cancer du sein
L’intensité du bleu (de tungstène) est proportionnelle à :
la concentration protéique de l’échantillon choisi
Pourquoi le nom MCF-7?
Michigan Cancer Foundation - 7, en référence à l’institut de Detroit où la lignée fut établie -au septième essai
Où les cellules MCF-7 et MDA-MB-231 sont-elles prélevées?
En culture in vitro à partir d’un épanchement pleural (l’accumulation anormale de liquide dans la cavité pleurale)
Les ions de cuivre se lient où à la protéine?
À 4 N par liaisons covalentes (PAS SUR)
Comment calculer le coefficient d’extinction molaire (absorptivité molaire)?
ε(λ) = A(λ) / (L x C)
A=Absorbance
L= L’épaisseur de solution traversée par la lumière
C= Concentration de la solution
Pourquoi utiliser une urine fraiche?
Car à longue durée, amène des changements biochimiques et micro-biologiques (Bactéries peut manger le glucose)
Qu’est-ce qui crée la coloration de la bandelette test ?
Deux réactions:
1- Glucose-oxydase catalyse l’oxydation du glucose en peroxyde d’hydrogène et en acide gluconique.
2- Peroxydase catalyse l’oxydation d’un chromogène (iodure de potassium) par le peroxyde d’hydrogène avec une couleur violacée/brunâtre.
Une quantité de NADH est proportionnelle à:
La quantité initiale de glucose
Que contient le PBS?
1- NaCl
2- KCl
3- Na2HPO
4- KH2PO4
Qu’est-ce que le ppm?
Partie par millions (1 mg / 1 L )
Quel volume par puits dans la microplaque?
Environ 300 ul
Pourquoi le NADH absorbe la lumière UV?
Car possède une adénine contenant des cycles à liaisons doubles.
Qu’est-ce que l’AMFO?
Une mousse antibactérienne
Qu’est-ce que l’ERα+ ou ERα- ?
Contient des récepteurs pour l’hormone d’oestrogène Récepteurs d’oestrogène
- plus : se traite avec l’hormone d’oestrogène
- moins : ne se traite pas
Qu’est-ce qu’une solution mère?
Une solution extrêmement concentrée
Pourquoi avons-nous de la protéase sur la peau?
Afin d’aider les nutriments à passer par la peau.
Qu’est-ce que le bec bunsen?
Un appareil de laboratoire destiné à produire une flamme ouverte avec du gaz combustible afin de chauffer et/ou de stériliser
À quoi sert le PBS?
1- La [] des ces sels dans le PBS sont généralement égale à celle du corps
2- Sert surtout à rincer les cellules pour enlever toute trace de milieu
3- Peut être utilisé comme diluant
pour assurer le stockage à sec des biomolécules
4- Empêche la dénaturation
5- Peut servir de valeur (spectre) de référence
Quelle est la différence entre le coefficient de variation et l’écart type?
Coefficient de variation : Comparaison entre les échantillons
Écart type : Comparer avec son même échantillon (duplicateur)
Quand changeons-nous pas l’embout?
Quand on a la même solution de même concentration et qu’il a pas de liquide restant dans la micropipette.
Quand le bleu de Méthylène est en contact avec le glucose ça devient quelle couleur?
Incolore, car le bleu va être réduit par le glucose (forme réduite) (Gagne un électron)
Autre qu’un colorant, qu’est-ce que le bleu de méthylène?
Un antiseptique, un antioxydant et parfois un antidote ( intox nitrates, nitrites et chlorates)
Qu’est-ce que la solution Stock?
Solution très concentration prête à être diluée, car utilisé souvent (éviter d’en refaire)
À quoi sert le blanc dans une microplaque?
Sert de valeur de référence (on fait une blanc par chaque substance à analyser)
Le b de l’équation représente quoi?
L’absorbance du blanc (conc.=0 (la plupart du temps) mais peut aussi contenir des petites qu. de la substance à analyser.
Qu’est-ce que le coefficient d’extinction milimolaire?
Caractérise les capacités d’une solution à absorber la lumière.
Quoi le symbole du coefficient de corrélation?
R (racine carré du coefficient de détermination)
Quand utiliser la pipette graduée et pompe à crémaillère?
Pour avoir des plus grands volumes tout en étant plus précis qu’avec la Pasteur
Quel est le problème de santé relié à l’hyperglycémie?
Diabète
Quelles sont les problèmes de santés réliés à l’hypoglycémie?
1- Maladies endocriniennes
2- Anorexie/malnutrition
3- Insuffance surrénalienne et hypophysaire
4- Métastases hépatiques
Quels sont les deux types de réactions dans la réaction basée sur l’activité hexokinase selon la commission des enzymes (biochimie)?
1- Phosphotransférase
2- Oxydoréductase
Quel est le type de diabète quand il y a une absence d’insuline?
Type 1
Quel est le type de diabète quand il y a un mauvais fonctionnement de l’insuline?
Type 2
Quelle est la différence entre le vortex et spin down (centrifugation rapide)?
Le vortex est mélangé et le spin down est de séparer les composantes.
Pourquoi laisser la plaque à une température pièce pendant 15 minutes?
Afin de laisser le réactif réagir
À quelle concentration de protéine dans l’urine devient un problème de santé?
Supérieur à 50 mg/L
À quoi sert la protéine albumine?
1- Transporte des substances comme des hormones
2- Maintient la pression oncotique (la pression osmotique qui attire l’eau en direction des protéines) du sang
Pourquoi faut-il mélanger le réactif A et S en premier dans le laboratoire 4?
Afin de faciliter les liaisons du Cu2+ plus tard
Quel est l’utilité des types de cellules?
Comparer avec d’autres cellules pour des traitements médicaux
