exam 1 Flashcards
Quelles sont les limites de la PCR qui font qu’on doit encore utiliser le clonage?
1) les sequences de chaque cote diu gene doivent etre connues
2) La longueur de l’ADN qui peut etre amplifier est limitee
Quel est le role de l’EDTA dans la preparation de l’extrait cellulaire?
Affaiblir la paroi celllaire et inhiber l’activité des enzymes cellulaire qui degradent L’ADN
L’EDTA est quel type de produit ?
Un agent chelateur
Quels types d’ions lient l’EDTA?
les ions divalent comme Mg++ pour faire fonctionner la polymerase ou la DNAse
Qu’est le SDS?
un agent denaturant les proteines
Quel est le role du SDS dans la preparation de l’extrait cellulaire ?
Il permet de dissocier les proteines membraniares et d’inhiber l’activité des enzymes cellulaire
Quelles sont les deux approches pour la purification de l’extrait cellulaire ?
1) degrader jes contaminant avec le phénol
2) degrader les contaminant avec une chromatographie sur colonne echangeuse d’ion ou par la methode du thiocyanate de guanidinium et silice
Comment la purification par le phenol se fait ?
Le phenol permettra de completement homogeneiser la solution et ainsi apres centrifugation on recupere les different constituant:
- en haut ADN+ARN
- au milieu des proteines coagulées
- en bas le phenol
Comment se fait la purification par chromatographie echangeuse d’ion ?
en trois etapes:
l’ADN, l’ARN et certaines proteines sont chargees negativement alors elles se lient a la resine positive. Pour les detacher il faut:
1)fixer l’extrait cellulaire dans une colonne
2) laver avec du sel pour faire eluer les proteine et l’ARN
3) laver avec une plus grande concentration de sel et recuperer l’ADN
Comment se fait la purification par la méthode de thiocyanate de guanidium et silice?
En presence de ce composé, l’ADN se lie fortement a la particule de silice et par la suite pouvant etre libere en ajoutant de l’eau
Quel est la fonction du thiocyanate de guanidium et silice ?
Agent denaturant(chaotropique) les proteines et solubilisant la solution
Quels sont les avantages de la purification et Comment se fait la purification par la methode de thiocyanate de guanidium et silice?
A la fin nous obtenons un ADN sans sel et cette methode peut etre automatisee avec des aimants permettant ainsi de traiter de nombreu echantillons a la fois
Quels sont les deux methode de prelevement de l’ADN ?
a) prelevement avec une tige en verre quand L’ADN est tres concentré
b) Dans le cas d’une solution diluee on recupere le precipité par centrifugation
Quels sont les avantages du fluorometre qubit?
1) meilleur quantif de l’ADN
2) avec des colorants
3) Les contaminants ne reagissent pas avec l’ADN
Dans quel cas utilise t-on du CTAB?
Pour les tissus vegetaux riches en polysaccharides qui sont difficles a eliminer
Que fait le CTAB?
il se complexe avec l’ADN ainsi apres une centrifugation il se retrouve pprecipité avec l’ADN au fond du tube
Quelles sont les 4 grandes d’enzymes utilisees pour manipuler l’ADN?
1) nucleases
2) ligases
3) polymerase
4) enzymes de modifications
Un systeme de restriction/modification comporend ?
Une ennzyme de restriction + methylase
Quel est le role des endonucleases de restriction ?
detruire l’ADN des organismes etrangers
comment les bacteries se protegent des endonucleases ?
Avec des methylases qui methylent A ou C qui sont reconnues par l’endonucleases
Quel type d’enzyme de restriction est un homodimere?
type II
Quel type d’emzyme est un heterodimere ?
Type III
Quels sont les cofacteurs du type I?
ATP,Mg++,SAM