essaies immunologiques Flashcards
l’utilité de les techniques immunochimiques
doser petite concentration analyte- comme hormone, vitamine, protéine spécifique
Le principe de ces dosages est fondé sur : antigène-anticorps
- La réaction entre un anticorps et deux antigènes identiques (l’un d’eux est marqué, l’autre est à doser)
- La réaction entre un antigène (à doser) et deux anticorps dont l’un est marqué.
Antigène = patient, anticorps=réactif va avoir substance marquer et subtance non marquer
3 techniques de immuno
- radio-immunologique (RIA)
- techniques enzymo-immunologiques (ELISA)
- fluoro-immunodosages (FIA)
5 facteurs qui affecte le dosage
- concentration réactant
- spécificité l’ac pou l’ag
- affinité : probabilité à se lié
- avidité : probabilité de séparation
- environnementales
Zone équivalence
granulation ex : science trans ou test mono
Post
excès d’antigène , donc pas d’anticorps qui se lie un complexe antigène-anticorps=pas granulation
dosage par compétition
Ag(sérum) + Ag*(marqueur) + Ac(réactif)
Ag – Ac + Ag* - Ac + Ag + Ag*
La detection du marqueur (Ag*) est inversement proportionnelle ou proportionnelle à la concentration du sérum
inversement proportionnelle
istope
125 =
57 Co=
gamma
enzymes dosage
NAD-NADH 340nm
Fluorophores
Fluorescéine, Rhodamine et Umbelliferone
Les techniques immunochimiques isotopiques -Le déroulement du dosage s’effectue en 4 étapes
- Incubation et compétition pour le site actif de l’anticorps Ac, Il y a compétition entre Ag* et Ag pour les sites de liaison de l’anticorps Ac.
- Il y a compétition entre Ag* et Ag pour les sites de liaison de l’anticorps Ac.
- Dosage du marqueur radioactif dans le complexe antigène – anticorps Ag*-Ac.
- Traitement des données
Immuno RadioMetric Assay (IRMA)=type sandwich
pas compétitive, Réaction proportionnelle au sérum
Enzyme Immuno Assay (EIA)
Les techniques EIA sont très rapides (5-10 minutes) par rapport aux RIA (un à cinq jours).
Homogène ou Hétérogène.
pas besoin technique de séparation= homogène, hétérohène= besoin