essaies immunologiques Flashcards
l’utilité de les techniques immunochimiques
doser petite concentration analyte- comme hormone, vitamine, protéine spécifique
Le principe de ces dosages est fondé sur : antigène-anticorps
- La réaction entre un anticorps et deux antigènes identiques (l’un d’eux est marqué, l’autre est à doser)
- La réaction entre un antigène (à doser) et deux anticorps dont l’un est marqué.
Antigène = patient, anticorps=réactif va avoir substance marquer et subtance non marquer
3 techniques de immuno
- radio-immunologique (RIA)
- techniques enzymo-immunologiques (ELISA)
- fluoro-immunodosages (FIA)
5 facteurs qui affecte le dosage
- concentration réactant
- spécificité l’ac pou l’ag
- affinité : probabilité à se lié
- avidité : probabilité de séparation
- environnementales
Zone équivalence
granulation ex : science trans ou test mono
Post
excès d’antigène , donc pas d’anticorps qui se lie un complexe antigène-anticorps=pas granulation
dosage par compétition
Ag(sérum) + Ag*(marqueur) + Ac(réactif)
Ag – Ac + Ag* - Ac + Ag + Ag*
La detection du marqueur (Ag*) est inversement proportionnelle ou proportionnelle à la concentration du sérum
inversement proportionnelle
istope
125 =
57 Co=
gamma
enzymes dosage
NAD-NADH 340nm
Fluorophores
Fluorescéine, Rhodamine et Umbelliferone
Les techniques immunochimiques isotopiques -Le déroulement du dosage s’effectue en 4 étapes
- Incubation et compétition pour le site actif de l’anticorps Ac, Il y a compétition entre Ag* et Ag pour les sites de liaison de l’anticorps Ac.
- Il y a compétition entre Ag* et Ag pour les sites de liaison de l’anticorps Ac.
- Dosage du marqueur radioactif dans le complexe antigène – anticorps Ag*-Ac.
- Traitement des données
Immuno RadioMetric Assay (IRMA)=type sandwich
pas compétitive, Réaction proportionnelle au sérum
Enzyme Immuno Assay (EIA)
Les techniques EIA sont très rapides (5-10 minutes) par rapport aux RIA (un à cinq jours).
Homogène ou Hétérogène.
pas besoin technique de séparation= homogène, hétérohène= besoin
EMIT (Enzyme-Multiplied Immunoassay Technique)
homogène ou hétérogène
homogène
EMIT (Enzyme-Multiplied Immunoassay Technique)
Ligand= antigène patient et enzyme= antigène marquer avec un enzyme
, p =produit, pacman=anticorps, s =substrat/réactif
3 possibilté de réaction
1. Ag* + ‘’pacman’’ + s = complex agpacman incatif + s
2. Ag + pacman + s = complex ag-pacman inactive + s
3. Ag + s = Ag*(reste libre) + produit(ce quon mesure)
méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
homogène ou hétérogène
hétérogène
méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
L’absorbance est directement proportionnelle à la concentration de l’antigène à doser.
EMIT (Enzyme-Multiplied Immunoassay Technique)
proportionnelle ou inversement proportionelle
Ceci ces proportionnelle
ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
proportionnelle ou inversement proportionelle
L’absorbance est inversement proportionnelle à la concentration.
Fluorescence Immuno Assay (FIA)
ac(réactif)+ligand(patient)+ GU-ligand(réactif non fluo)
avec B-galactosidase U-ligand(fluo)
Fluorescence Polarization Immuno Assay (FPIA)
Les petites molécules tournent librement et, par conséquent, la lumière fluorescente émise par la molécule est orientée dans toutes les directions (dépolarisée). Cependant, les grosses molécules, comme les protéines ou complexe Ag – Ac , tournent plus lentement et émettent une lumière polarisée
Luminol
est oxydé avec l’hydrogène de peroxyde, utilisant un catalyste, pour fournir S-aminophthalate
CEA – antigène carcinoembryonique
augmente tout cancer
AFP – Alpha – Fétoprotéine
carcinome hépatocellulaire et meurs testiculaires.
CA 125
cancers de l’épithélial ovarienne.
CA 19 – 9
l’évaluation de la récurrence de cancer en conjonction avec CEA.
CA 15 – 3
l’identification des cancers avancés du sein.
PSA Prostate spécifique antigène
tile dans l’évaluation du cancer de la prostate
hCG
Gonadotrophine chorionique humaine
NSE Énolase Neurone Spécifique
neuroblastome
