Espectrofotometría

Question 1

Espectrofotometría

Answer 1

Técnica basada en la capacidad de ciertas sustancias de absorver y emitir luz selectivamente de ondas electromagneticas de una longitud de onda específica

Question 2

La energia de una onda electromagnetica está dada por:

Answer 2

E=hv donde E es energia H es la constante de planck 6,626 x 10^(-4) y V el número de ondas

Question 3

Absorvancia

Answer 3

Medida de la cantidad de luz absorvida

Question 4

Transmitasa

Answer 4

Medida de la luz que es transmitida. Recordemos que las moleculas absorven o dejan pasar la luz, es decir la trasnmiten

Question 5

Que cosas tiene una onda

Answer 5

Longitud de onda y frecuencia, siendo la longitud de onda la distancia entre dos puntos de la onda. Recordar que a mayor longitud de onda menor energia. A menor longitud de onda mayor energía

Question 6

Ecuación de la energía

Answer 6

E=n x v

Question 7

Rango de. Edicion de la espectrofotometría

Answer 7

Es del espectro visible. Va desde los 400 micrometros a los 700 micrometros

Question 8

Cromóforos

Answer 8

1. Moléculas coloreadas
2. Capaces de absorver luz
   3.tiene electrones pi
3. Tiene electrones no enlazantes que pueden pasar de su estado basal a un nivel energético mayor
4. Tiene enlaces conjugados lo que le da capacidad de absorver

Question 9

Que se usa para poder medir la concentración de proteínas en un espectrofotómetro (tinte)

Answer 9

Azul de comassie. Permite cuantificar proteínas, reaccionando con ella y formando un complejo proteína-reactivo, con este se puede hacer cuantificacion de la absorcion de luz

Question 10

Reactivo de bradford

Answer 10

Es el azul de comassie

Question 11

Que requiere una proteina para que se le pegue el reactivo de bradford

Answer 11

Residuos basicos u aromáticos. Es en estos donde se une el azul de comassie

Question 12

Espectroforómetrp

Answer 12

Instrumento utilizado para cuantificar la absorvancia. Sus partes son
1. Fuente luminosa: emite muchas ondas de luz
2. Selector de lo gitud de onda: elegie 1 onda de luz a trabajar
3. Cubeta: contiene la sustancia. Además, va a dejar pasar (transferir la luz)
4. Sistema fotométrico: mide la transmitasa y la transforma a absorbancia

Question 13

Cual es la relaciom matemática de la absorvancia?

Answer 13

Tiene una relacion directamente proporcional con la concentración de una sustancia. @=Elc

E y L son una constante entonces A=kxc siendo C la concentración.

E: absorvidsd molar
L: espesor de las paredes de la cubeta.

Los valores de absorvancia van entre 0 y 1

Question 14

Espectro de absorción

Answer 14

Es un gráfico propio de cada sustancia que relaciona la absorvancia (y) con la longitud de onda (x). Debe,os elegir la longitud de onda con mayor absorvancia, es decir la longitud de onda máxima lo que llamamos LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

Question 15

Que es la longitud de onda de trabajo

Answer 15

Es la longitud de onda máxima, es decir, la longitud de onda en la que una sustancia tiene mayor absorvancia

Question 16

Pasos para hacer espectrofotometría

Answer 16

1. Determinar longitud de trabajo
2. Usar curva de calibración
3. Determinar la concentración de la muestra problema

Question 17

Curva de calibración

Answer 17

Grafico que relaciona la absorvancia con las concentraciones. Deben ser conocidas.

Cosntruccion de una curva de calibracion
1. Preparar 5 puntos de la sustancia a cocentraciones crecientes mediante tecnica de disolución C1v1=C2V2. Incluir un tubo sin muestra en el medio el que es llamado tubo blanco
Recordar que en cada baso vamos a mantener el volumen total. Medimos el volumen en microlitros
2. Determinar la absorvancia de cada tuvo
3. Construir curva de calibración (relación de absorvsncia y de concentrscion)
4. Determinar la concentración por medio de la absorvancia y la curva de calibración
A) por interpolación
B)ecuación de la recta que la da el exel y reemplazar. Y=mx+c

Question 18

Nombre las lartes de una micropipets y su funcion

Answer 18

1. Botón de accionamiento: absorve y dispersa liquido
2. Rueda de ajuste de volumen: ajustar el volumen girando la pelotita
3. Indicador de volumen: muestra el volumen a aspirar
4. Eyector de la punta: su función es eyectar las puntas
5. Soporte de puntas: proporciona, ajuste a las puntas que contienen el volumen del líquido requerido

Question 19

Clasificación de las micropipetas

Answer 19

Micropipetas de volumen fijo
Micropipetas de volumen variable

Question 20

Clasificación según número de csnales

Answer 20

Monocanal
Multicanal: ventaja: reducen la carga ce ñas micropipetas monocanal

Question 21

Funcionamiento de las micropipedas de desplazamiento de aire

Answer 21

Embolo en el pulgarb
Suelto
Pongo punta desechable con liquido
Presiono el embolo
Suelto el liquido

Question 22

Posición 1

Answer 22

Posición de reposo
Colocar punta adecuada seguj el volumen y hacer presion

Question 23

Posición 2

Answer 23

Aspirar líquido hasta el primer tope. Sumergir la punta en el líquido, soltar y aspirar. Se llena el voluemen establecido

Question 24

Posición 3

Answer 24

Presiono el embolo, se disperza liquido. Al primer tope se vacía el líquido y al segundo se vacía toda la pipeta