eletroforese horizontal

Question 1

Qual a finalidade da imersão do gel de agarose em solução de brometo de etídio?

Answer 1

é importante para a visualização do material genético, visto que o brometo de etídio é um composto que se intercala aos nucleotídeos e emite fluorescecia quando iluminado por luz UV

Question 2

A mobilidade eletroforética do DNA através do gel de agarose é influenciada por vários
fatores, cite-os

Answer 2

1. depende do tamanho da molécula de dna (quanto menor, mais rapida)
2. depende da conformação do dna (quanto mais espiralado mais rapido)
3. corrente aplicada (quanto maior a corrente mais rapida a migração)
4. depende da composição do tampão (quanto menor a presença de ions, mais lentamente migra o dna)

Question 3

Cite dois sinais que indicam que a corrente elétrica
realmente está passando pela cuba.

Answer 3

1. a formação de produtos da eletrólise da água (bolhas de hidrogenio no eletrodo negativo e gas oxigenio no eletrodo positivo)
2. visualização dos corantes dos tampões migrando através do gel em direção ao polo positivo

Question 4

César esqueceu de misturar azul de bromofenol nas amostras de DNA a serem
analisadas pela eletroforese horizontal em gel de agarose. Qual será a consequência desse
descuido?

Answer 4

sem o azul de bromofenol césar não conseguirá visuzlizar a adição da solução no gel, pois ambos possuem a mesma coloração, podendo estravazar as canaletas. além disso, não será possivel vizualizar se o gel migrou até o polo positivo completamente.

Question 5

Normalmente adiciona-se glicose junto ao DNA nas canaletas do gel de agarose. Por
qual motivo?

Answer 5

a glicose é adicionada para aumentar a densidade da amostra e, com isso, garantir que o material genético afune na canaleta, garantinfo que a amostra penetre corretamente na matriz

Question 6

Após realizar todo o preparo, corretamente, da amostra de DNA e do gel de agarose,
Ana ligou a cuba de eletroforese, e após 30 minutos percebeu que a amostra não correu
pelo gel. Onde Ana errou?

Answer 6

ana ligou de forma invertida o anodo e o catodo, pois o dna corre em direção ao polo positivo, devido a sua carga negativa. desse modo, o anodo deve ser ligado no lado oposto as canaletas, permitindo que o dna tenha espaço para percorrer no gel