Édition du génome

Question 1

Pourquoi modifier le génome?

Answer 1

Pour corriger des gènes défectueux

Question 2

Nommer des caractéristiques de la thérapie génique conventionnelle

Answer 2

-Addition d’un gène
-intégration plus au moins au hasard = effets secondaires
-Ne permet pas de corriger tous les problèmes
-Possibilité de protéines toxiques

Question 3

Nommer des caractéristiques de la thérapie génique par édition

Answer 3

-Correction de la mutation
-Pas de présence d’un gène sauvage
-Pas d’insertion au hasard

Question 4

Dans le cas des thérapies géniques, avec quoi se fait la livraison

Answer 4

La livraison se fait in vivo avec un virus (adénoassocié ou lentivirus)

Question 5

Quels sont les virus de choix pour la livraison des thérapies ?

Answer 5

adénoassocié ou lentivirus

Question 6

Qu’est-ce que la thérapie génique conventionnelle in vivo

Answer 6

-Transfert de matériel génétique en utilisant des virus
-Virus majoritairement utilisés : rétrovirus et adénovirus
-Risque associé à l’intégration dans le génome : pas capable de cibler certaine région du génome qui aurait 0 risque

Question 7

Qu’est-ce que la thérapie génique conventionnelle ex vivo

Answer 7

-Modification de cellules hématopoïétiques
-Isolation de cellules du patient ou d’un donneur
-Amplification des cellules in vitro et reçoivent la thérapie génique
-Retransfère des cellules dans le corps du patient
-Permet de remonter les cellules immunitaires à un niveau normal

Question 8

Quels sont les enjeux de la thérapie génique conventionnelle

Answer 8

-Faisable avec la technologie existante
-Résultats encourageant pour certaines maladies
-Défis :
Est-ce que le gène va bien s’exprimer ?
Est-ce que l’effet thérapeutique sera durable (jours, semaines, mois, années) ?
Est-ce que l’intégration du transgène va perturber le fonctionnement du génome ?

Question 9

Décrire le principe générale de la technique CRISPR

Answer 9

1.Coupure de l’ADN dirigé dans le génome.
2.Fait par une enzyme nucléase cas9 et dirigé par ARN guide.
3.Une partie de l’ARN guide est complémentaire au site cible et une complémentaire au site PAM pour que la coupure se fasse dans un endroit voulu du génome.

Question 10

Quel est le mode d’action de Cas9

Answer 10

1.L’endonucléase Cas9 est exprimée avec un signal de localisation cellulaire.
2.Un ARN guide permet de cibler Cas9 sur une séquence du génome particulière.
3.Cas9 déshybride l’ADN et coupe les deux brins avant le site PRAM (proto-spacer adjacent motif, 5’-NGG-3’)
4.Deux types de recombinaison possible : NHEL : indel et recombinaison homologue

Question 11

Quels sont les particularités de l’échafaud dans le système CRISPR

Answer 11

-ARN guide = échafaud + séquence cible
-L’échafaud est toujours le même, ne change pas en fonction de la cible
-L’échafaud aide Cas9 à lier l’ADN

Question 12

Par quel étape commence toujours l’édition du génome avec Cas9

Answer 12

Coupure double brin de l’ADN

Question 13

Qu’est-ce que fait un indel

Answer 13

changement du cadre de lecture ou si la délétion est de 3 nucléotides ou un multiple de 3, alors le cadre de lecture ne change pas. Création du codon stop prématuré, donc une protéine tronquée.

Question 14

Qu’est-ce que fait une recombinaison homologue ?

Answer 14

apporte un ADN donneur qui a de part et d’autre de la coupure des séquences parfaitement identiques.

Question 15

Quels sont les 4 stratégies pour le transfert du système CRISPR ?

Answer 15

1. Plasmides
2. Complexe ribonucléoprotéique: Cas9+gRNA
3. ARNm Cas9 + gRNA
4. Adénovirus, virus adéno-associé, lentivirus

Question 16

Par quel méthode peut-on valider le CRISPR?

Answer 16

Par séquençage

Question 17

Que permet l’édition génomique dans les zygotes ?

Answer 17

Permet de modifier toutes les cellules de l’organisme

Question 18

Qu’est-ce que l’effet mosaïque

Answer 18

C’est la diversité des résultats obtenus après une expérience( ceux qui ont fonctionner/non fonctionner). Signifie que CRIPSR n’a pas bien fonctionner et qu’un des allèles donner au singe est resté wild type

Question 19

S’il y a coupure initiale sur les 2 allèles, que ce passe-t-il avec le gène WT

Answer 19

Il n’est pas présent

Question 20

S’il y a coupure sur 1 allèle, que ce passe-t-il avec le gène WT

Answer 20

Il est présent, si le système CRISPR s’inactive rapidement, sinon va finir par le couper

Question 21

Que permet CRISPR dans les zygotes humains viables ?

Answer 21

Minimiser l’effet mosaïque : FIV et CRISPR en même temps

Question 22

Nommer les étapes de l’invasion de mutation

Answer 22

1. Création de Indels
2. CRISPR persiste pendant quelques divisions puis disparaît
3. Effet +/- mosaïque

Question 23

Qu’est-ce que le CRISPR intégratif

Answer 23

Toutes les cellules de l’organisme provenant du développement de l’embryon vont produire en permanence le système CRISPR : toutes les cellules, incluant les gamètes.

Question 24

Quel est un autre nom pour l’invasion de gène

Answer 24

La technologie de l’extinction

Question 25

Quel est la différence entre l’hérédité normale et l’hérédité forcé

Answer 25

La mutation (normale) se répand lentement dans la population
alors que,
le gène modifié (forcé) se répand rapidement