DNA-Sequenzierung Flashcards
1
Q
Was ist die Sequenzierung und welche Methode gibt es?
A
Sequenzierung = Bestimmung der Basenfolgen der DNA
Kettenabbruchmethode nach Sanger
2
Q
Wie läuft die Kettenabbruchmethode nach Sanger ab?
A
- Denaturierung
- Synthese der Komplementärstränge
- Denaturierung
- Gel-Elektrophorese
- Ablesen
3
Q
Wie läuft die Synthese der Komplementärstränge bei der Kettenabbruchmethode ab?
A
- beginnt an hinzugefügtem, radioaktiv markiertem Primer
- Synthese durch DNA-Polymerase katalysiert
- Synthese in vier Reaktionsgefäßen
- In jedem Gefäß befinden sich die vier Desoxynucleosid-Triphosphate (dATP,…)
- in jedem Gefäß ein Sorte der vier Abbruchnucleotide (ddATP,…), ihnen fehlt am dritten Kohlenstoffstom des Zuckers ein Sauerstoffatom: Didesoxynucleosid-Triphosphat
4
Q
Was muss bei dem Ablesen der Basensequenz nach der Gel-Elektrophorese beachtet werden?
A
Abgelesene Basensequenz ist zu der analysierendenkomplementär
Beginnt mit der DNA-Bande, die am weitesten gewandert ist
