DNA recombinante Flashcards
DNA cromosomico
Escencial para la bacteria
DNA plasmido
- Si se puede quitar a la bacteria ye lla seguira viviendo.
- No es escencial y da caracteristicas a las bacterias
¿Que es el DNA recombinante?
Molecula de doble cadena que abarca dos tipos de DNA de origen diferente
Plasmido +gen=
DNA recombinante
¿Cuales son los 2 tipos de DNA que tiene una bacteria?
- Cromosomico
- Plasmido
Primer paso en las etapas de la ingenieria genetica
Se localiza el gen que se desea transferir
Paso 2 de etapas de la ingeneria genetica
Se aisla el gen utilizando enzimas que cortan el DNA
Paso 3 de etapas de la ingeneria genetica
Se inserta el gen en otro segmento del DNA (plasmido)
ADN recombiannte con ayuda de una ligasa
Paso 4 etapas de la ingeneria genetica
Se introduce el DNA recombinante en la celula que se quiere multiplicar
Paso 5 etapas de la ingenieria genetica
Confirmar que la celula huesped tiene las propiedades del DNA transferido.
Paso 6 etapas de la ingenieria genetica
Se clona el gen dejando que se multipliquen las celulas
¿De donde provienen las enzimas de restriccion?
De las bacterias
Caracteristicas de las enzimas de restriccion
- Son endonucleasas (Cortan en medio de la cadena)
- Son un mecanismo de defensa de las bacterias frente la entrada de DNA foraneo
¿Que ocurre despues de que las enzimas de restriccion detectan DNA extraño?
- Detectan el DNA extraño
- Lo identifican,lo cortan
- Lo agregan al DNA cromosomico
¿A quien degradan las enzimas de restriccion?
Al DNA extraño
¿Como se nombran las enzimas de restriccion?
- 1er letra: género de la bacteria
- 2a y 3a letra: especie de la bacteria
- última letra: cepa
- número romano: # de acuerdo a su cronologia (descubrimiento
Enzimas del sitema de modificacion
Metilasas : modifica el DNA propio para que no sea degradado
Metilacion en residuos de Adenina o Citosina cada bacteria reconoce a una secuencia determinada
El DNA metilado es ____, si no seria _____
El DNA metiladoes inmune ,si no seria degradado
Tipos de enzimas de restriccion
- I
- II
- III
- IV
Enzima de restriccion
Tipo1
- Asimetrico
- El sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento (1000 pares de bases)
- El sitio de corte es aleatorio,rio abajo o rio arriba
Enzima de restriccion
tipo2
- Reconocen secuencias palindromicas
- El sitio de reconocimeinto es igual al sitio de corte
- Es el mas especifico
- Con esta enzima se corta el DNA
Enzima de restriccion Tipo 3
- Asimetrico
- Corte asimetrico
- Corte lejos de la secuencia de reconocimiento( 20 a 30 pares de bases)
Enzima de restriccion Tipo IV
- Reconoce DNA metilado
- Corta el DNA metilado
¿Que son las secuencias palindromicas?
Son las secuencias que se leen igual de derecha a izquierda y de izquierda a derecha
¿Donde hace el corte la enzima tipo II?
En la secuencia palindromica
Tipos de cortes
- Cohesivos :quedan pares de bases libres (cortes en diferente posicion) 3 a 5 nucleotidos de diferencia
- Romos: Simetricos en ambas cadenas (parejito)
V/F
El DNA y el plasmido se debe cortar con la misma enzima de restriccion
Verdadero
¿Quien va a unir los fragmentos del DNA eucariota y plasmido?
La ligasa une los fragmentos y ya queda el DNA recombinante
¿Que es un vector?
Es una molecula de DNA de doble cadena que puede albergar un fragmento extraño o externo(plasmido)
Tipos de vectores
- Clonacion
- Expresion
Vector de clonacion
La bacteria se va a replicar
* Almacenar secuencias
* Obtener grandes cantidades de DNA
¿Cuales son los tipos de vectores que pueden hacer clonacion?
- Plasmidos
- Bacteriofagos
- Fagemidos
- Cosmidos
Vector de expresion
Produce un transcrito o proteina
¿Cuales son los tipos de vectores que pueden hacer expresion?
- Plasmidos
- Bacteriofagos
¿Que tienen que tener el vector (plasmido) par que inicie la clonacion?
- Origen de replicacion (donde se separan las hebras para que se empiece a copiar)
- Sitio multiple de clonacion (se encuentran las secuencias palindromicas para que lo pueda cortar la enzima y tambien ahi va insertado el gen)
-
Marcador de seleccion(Selecciona a las bacterias que tienen el plasmido)
-Resistencia antibioticos- Proteina verde fluorescente
- Enzima para que crezca mas la bacteria
¿Que tiene que tener el vector(plasmido) para iniciar la expresion?
- Sitio de origen (Sitio Ori)
- Promotor
- Como es bacteria no tiene caperuza pero si tiene sitio de union a ribosoma
- Sitio multiple de clonacion
- Cola de Poli A
- Marcaje de seleccion
¿Como son los vectores bacteriofagos?
- Son virus que infectan a las bacterias
- Se modifican geneticamente
- Eliminan genes que no se requieren para la replicacion y el empaquetamiento.
¿Como es el gen que alberga el plasmido?
Pequeño por que el lasmid lo es ; en cambio el del bacteriofago es largo
V/F
Lambda es un bacteriofago
Verdadero
Vectores cosmidos
Mezcla entre plasmidos y bacteriofagos
* Vectores hibridos
* El plasmido se modifica para arrancar gen mas grande y se le pone sitio cos region que viene de un bacteriofago
¿Para que sirve el sitio Cos
Permite que se empaquete el DNA y se pueda poner en el bacteriofago
Esto es para albergar mas pedazos de DNAmas grandes
¿Como son los vectores **Fagémidos?
- Plasmido al que se le incorpora el origen de replicacion de un fago
- No tiene sitios cos
- Son lineales
¿Cuales son los tipos de vectores de cromosomas artificiales?
- **BAC **(bacterias)
- YAC (levaduras)
V/F
Los plasmidos tienen sitio Ori y los bacteriofagos sitio Cos
Verdadero
DNA recombinante se corta ….
Cohesivo
