Diagnóstico Virológico Flashcards
Em que circunstâncias se pede um diagnóstico virológico?
- diagnóstico etiológico (suspeita de agente)
- vigilância
- doenças exóticas com potencial zoonótico
- regras internacionais de movimentação de animais
- implementação de medidas de erradicação
Onde são feitos os diagnósticos virológicos?
- serviços nacionais de diagnóstico (INIAV)
- laboratórios específicos
- World Organization for Animal Health (monitorização internacional)
Quais são os principais passos da patogénese viral?
- infeção do hospedeiro
- replicação no local de invasão e linfonodos regionais
- virémia primária
- disseminação pela corrente sanguínea
- lesões nos órgãos-alvo
- doença
Quais as vias de excreção viral?
- aerossóis
- gotículas
- crostas
- fluidos corporais e secreções (saliva, sangue, leite, urina, fezes)
Quais os padrões de infeção das doenças virais?
Infeção aguda:
- elevada infecciosidade e resistência ambiental
Infeção latente:
- persistente
- reativação periódica
Como se efetua a colheita, armazenamento e transporte das amostras?
- recolher material apropriado (atendendo à patogenia da infeção)
- colher precocemente (maior título de vírus)
- evitar contaminações secundárias
- testar animais sãos que estejam em contacto direto com os doentes
Como se preserva a infecciosidade e/ou patogenicidade dos viriões?
Para isolamento:
- meio de transporte (tamponado e suplementado com albumina bovina/soro bovino)
Para diagnóstico molecular:
- compostos inibidores
- cuidado para a preservação do ácido nucleico viral (heparina atua como anticoagulante mas destrói genoma viral)
Para imunofluorescência:
- fixação de esfregaços diretos (metanol)
Para imunocitoquímica:
- formol
Para cadáveres:
- RNAlater (proteção de tecidos)
Quais os principais apontamentos relativamente à temperatura de armazenamento das amostras?
- enviar material fresco ou refrigerado
- evitar congelações e descongelações (reduzem infecciosidade)
O que se deteta no diagnóstico virológico?
- vírus
- antigénios virais
- ácido nucleico viral
Quais os métodos de isolamento de vírus e respetivas vantagens/desvantagens?
- culturas de células
- ovos embrionados
Vantagens:
- sensibilidade
- adaptável a vários tipos virais
Desvantagens:
- trabalhoso, lento, caro
- necessidade de metodologias complementares de confirmação
Qual as vantagens e desvantagens da microscopia eletrónica na deteção de vírus?
- observação de vírus que não podem ser isolados em cultura
- baixa sensibilidade
- dispendiosa
- dificuldade de diferenciação de vírus da mesma família
Quais as técnicas de deteção de anticorpos e antigénios virais?
- ELISA (Enzyme Linked Immnunosorbent Assay)
- imunofluorescência (marcação)
- imunocitoquímica (ligação a enzima)
- imunodifusão (agár)
- fixação de complemento
- hemaglutinação
- seroneutralização, inibição de hemaglutinação (anticorpos neutralizantes)
- Western Blot
Quais as técnicas de deteção de ácido nucleico viral mais utilizadas?
- PCR convencional (amplificação em gel de agarose)
- RT-PCR (quantificação)
- hibridação “in situ” (sondas)
