DIAGNÓSTICO MOLECULAR Flashcards
Para un PCR se requiere:
- Secuencia de DNA
- Enzima DNA Polimerasa
- Desoxiribonucleótidos
- Primers
- Mg
- Enzima que polimeriza una cadena de DNA tomando como molde una preexistente
- Soporte 95°C
DNA polimerasa
pH del amortiguador de PCR:
8.4
- Diseñan
- Se utilizan para reconocer secuencias blano en el DNA molde
- Proporcionan un extremo 3’
Iniciadores
Reacción en cadena de la polimerasa
PCR
Esquema de la PCR:
- inicio de la desnaturalización
- ciclos de amplificación
- amplificación final
¿Cuáles son los pasos de una PCR?
- desnaturalización
- hibridación
- extensión
- Se separan las cadenas de DNA
- 95°C (20 a 30 segs)
qué paso de la PCR es y qué orden
Desnaturalización y es el primer paso
- Los primers se alinean al extremo 3’
- Tm 50°C a 60°C
qué paso de la PCR es y qué orden
Hibridación y es el segundo paso
- La Taq polimerasa actúa sobre el complejo templado de primers
- Agrega dNTP’s complementarios para crear cadenas completas
- 72°C
qué paso de la PCR es y qué orden
Extensión y es el tercer paso
Al final de la PCR se realiza un…
gel de electrofóresis
Amplificación de un segmento de DNA utilizando dos partidores. La detección de la amplificación es mediante geles de agarosa
- detección cualitativa de un segmento de DNA
PCR estándar
Amplificación de 2 o más segmentos de DNA utilizando varios partidores en una sola reacción de amplificación. La detección de la amplificación es mediante geles de agarosa
- Detección de varios segmentos de DNA en una sola reacción de PCR
PCR multiplex
Estándar con paso posterior de digestión con enzimas de restricción
- Detección de polimorfismos genéticos (SNPs)
PCR-RFLP
Síntesis de cDNA a partir de RNA mediante transcripción reversa, seguido de una PCR
- Expresión de genes, detección de virus de RNA
RT-PCR
