del 2 Flashcards
forklar hvordan et spektrofotometer fungerer?
Hvitt lys sendes gjennom kuvetten. Lyset samles og sendes deretter via et speil,
gjennom kuvetten og en inngangsslit og så til en konkav, reflekterende rist som sprer lyset og deler det inn i de ulike bølgelengdene. Dette lyset detekteres i et
fotodiodearray. Måler da lyset i de bølgelengdene som er definert i applikasjonen til analysen.
hva er forskjellen på reflektometri og potensiometri? hvor brukes disse prinsippene?
Reflektometri: Refl. Lys fra prøven sammenliknes med reflektert lys fra
ref.elektroden.
eks Ulbrichts kule
Potensiometri: Aktuelt ion bindes til membran, gir en spenningsendring som sammenliknes med ref.elektroden.
Høy ionekons gir økt binding til membran og gir økt spenning
eks ioneselektive elektrode
HVA ER IMMUNOASSEY?
antigen/antistoffreaksjoner til måling av analytt
hvilke metoder bruker man for å måle immunoassey?
• Turbidimetri o Antigen/antistoffreaksjon gir blakking av prøven. Partiklene gir dermed minkende lysintensitet gjennom kyvetten • Nephelometri o Lysbrytning • Fluorimetri o Exitering skjer vha en lyskilde o Måling av emitert lys (fluorescense) • Luminescens
hva er forskjellen på Luminescens og fluorimetri?
Med luminescens menes et stoffs evne til å sende ut synlig lys etter at det har mottatt energi utenfra. Prinsipielt likt som fluorimetri, men emisjonen av lys er forårsaket av
en kjemisk, biokjemisk eller elektrokjemisk reaksjon
hva er Nephelometri?
Lysbrytning når lyset treffer partiklene. Mengde lys som brytes i en bestemt vinkel er prop. med konsentrasjonen av stoffet
forklar SANDWICH PRINSIPPET
Brukes hvis vi har høye analytt konsentrasjoner. Først har vi et partikkel bundet med et primært antistoff. Partikkelen er en paramagnetisk partikkel som har bundet et helt spesifikt antistoff. Så tilsettes analytt (antigen) fra pasient. I tillegg tilsettes et antistoff som er bundet til alkalisk fosfatase, denne blandingen inkuberes slik at antigenet kan binde seg til antistoffet på den paramagnetiske partikkelen og oppå den igjen vil antistoffet bundet med alkalisk fosfatase binde seg. Da vil antigenet fra pasienten ligge som en sandwish mellom antistoffene. siden alt antigen blir bundet vil det si at vi har antistoff bundet med fosfatase i overskudd som må vaskes bort. Tilsetter en vaskeløsningen og bruker magneter slik at kulene holder seg i ro, og vi sitter igjen med antistoff/antigen sandwichen. Dette komplekse vil gi fra seg et lite lyssignal som kalles luminescens. Jo større signal jo flere antigener har man og analytt konsentrasjonen øker
forklar COMPETITIVE PRINSIPPE
Brukes i lave konsentrasjoner av analytten. Har paramagnetisk partikkel som binder seg spesifikke antistoffer. Tilsetter analytt fra pasienten og har i tilegg en alkalisk fosfatese som er bundet til antigenet som vi er etter. Antigenet fra prøven vil konkurrere med antigenet bundet til fosfatase. Jo mer antigen fra prøven jo mindre fosfatas vil bindet seg til den paramagnetiske partikkelen og mindre lys blir dannet. Hvis det er lite av analytten vil flere fosfataser binde seg til partikkelen og mer lys, dette gir en omvend proporsjonalitet mellom lys og prøve
hvordan skiller man paramagnetiske partikler fra de andre stoffene i en prøve?
det er Kyvetten med paramagnitiske partikler med antistoff og bundet antigener som gir luminescens. Når man aktiverer kyvetta vil de tiltrekke de paramagnetiske partiklene slik at det kan tilsettes vaskeløsning og fjerne det vi ikke skal ha, dette gjøres tre ganger. Det kan også tilsettes et reagens slik at det dannes en lumininsens signal, dette er et svakt signal og er derfor i en lysmultiplikatoren slik at den kan forsterke signale så vi kan detektere den
forklar trinnene til en enzym mediert kjemiluminescense prosess?
1: pipetterer prøve, paramagnetiske partikler og reagenser
2: inkuberes for å fremme bindinger mellom prøve og paramagnetisk partikkel
3: tilsettes vaskeløsning i et magnetisk felt for å fjerne rest materiale
4: tilsetter et substrat som gir et signal
5: inkuberes for å fremme lys intensitet (jo lenger den inkuberes jo sterkere er lyset)
6: detekterer lys
hvordan fungerer en vitros 350 ?
Har tynne plater med forskjellige lag og funksjoner. Først er det et tynt lag som trekker inn prøven, så går den over ulike reagens lag helt til den komme til et støtte lag slik at prøven ikke forsvinner videre. her leses av absorbansen
hva brukes advia 2120 for?
• Mye brukt teknologi innen hematologi. • Fargede celler i en løsning kommer enkeltvis gjennom en flowcelle • Laserteknikk • Lyssprednin
forklar hvordan Flowcytometri med laserteknikk fungerer
Cellene vil komme inn i flowcella en og en siden de allerede har blitt behandlet med en spesiell reagens. Når lyset sendes inn i og treffer erytrocyttene vil lyset detekteres i 15 graders vinkel slik at vi kan finne hvor mye hemoglobin det er i cella, mens i en annen vinkel kan man detekterer størrelsen på de ulike cellene. Signalet omgjøres digitalt slik at det kommer ut lesbare resultater
hva gjør en sheetløsning i flowcytometri?
Sheatløsningen endrer overfaltespennngen til cellene slik at de ikke klumper sammen – lager en slags “kappe” rundt hver celle. Dette gjør at celle
ne føres enkeltvis inn I flowcellen.
hvordan fungerer peroksidase teknikken?
Her måler man peroksidase for å skille de forskjellige lymfocyttene. Her er leukocyttene forbehandla i tilegg til at cellemembranen er tatt vekk. Wolfram lampe sender lys inn og ved høy vinkel vil størrelsen detekeres i tilegg til at absorbans måles pga peroksidase, fargemengden er avhenge av mengde peroksidase, og hver celletype absorberer forskjellige mengder peroksidase
