Cromatografia líquida e gasosa Flashcards
Cromatografia Líquida (CL)
”- Neste método cromatográfico, a fase móvel é um líquido. Pode ser realizada em uma coluna aberta por gravidade ou através de um sistema de bombeamento, como no caso da CLAE (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência).,- Na CLAE, uma bomba é usada para mover a fase móvel (geralmente uma mistura de solventes) através da coluna de separação.,- A amostra é injetada na corrente de solvente e separada com base nas interações entre os componentes da amostra e a fase estacionária dentro da coluna.,- Os componentes são detectados à medida que saem da coluna, permitindo sua identificação e quantificação.”
Cromatografia - Métodos de separação
- Adsorção
- Troca iônica
- Bioafinidade
- Partição
- Exclusão
Cromatografia líquida de alta eficiência - Instrumentação
Técnica de separação e identificação de compostos que atualmente é indispensável nos laboratórios analíticos. Colunas empacotadas + fase móvel sob alta pressão = Alta resolução, eficiência, sensibilidade e rapidez
Cromatografia Líquida (CL)
”- Neste método cromatográfico, a fase móvel é um líquido.”
CL - Coluna Aberta por Gravidade
”- Pode ser realizada em uma coluna aberta por gravidade.”
Amostragem na CL
”- A amostra é injetada na corrente de solvente e separada com base nas interações entre os componentes da amostra e a fase estacionária dentro da coluna.”
Detecção na CL
”- Os componentes são detectados à medida que saem da coluna, permitindo sua identificação e quantificação.”
CLAE - Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
sistema de bombeamento onde uma bomba é usada para mover a fase móvel (geralmente uma mistura de solventes) através da coluna de separação.”
CLAE
- Separa compostos não voláteis
- Pode ser utilizado em íons
- Reprodutibilidade
Instrumentação da CLAE
“1. Reservatório de eluente,
2. Sistema de bombeamento,
3. Amostrador,
4. Coluna cromatográfica,
5. Detector
6. Computador para processamento dos dados.”
CLAE,Limitações desta técnica:
Custo equipamento
Custo operação
Dificuldade análise qualitativa
Ausência de um detector universal
CLAE,Aplicações:
- Técnica largamente utilizada
- Análises ambientais
- Identificação e quantificação Indústria química e farmacêutica
- Análise de alimentos
CLAE: Fase Reversa
- A fase reversa, sao em 2 fases moveis e estacionaria
- móveis são compostas por água, acetonitrila e metanol.
- A fase estacionária pode ser C18, C8 ou fenil.C18 é um hidrocarboneto com 18 carbonos.”
CLAE - Hidrofilicidade dos Fármacos
”- A maioria dos fármacos é hidrofílica.”
CLAE Fase normal
- CLAE fase normal,posui 2 fases moveis e estacionaria
- Fase móveis:os solventes orgânicos como hexano, acetato de etila e diclorometano são utilizados.
- A fase estacionária pode ser composta por sílica, ciano ou amina
CLAE - Melhor Resolução
”- Isso proporciona melhor resolução na separação dos compostos.”
Detectores Condutividade térmica
Universais, não destrutivo, sensibilidade
mais baixa
Cromatografia Gasosa (CG)
”- Neste método, a fase móvel é um gás inerte.”
CG
- Alta resolução
- Equipamento de baixo custo
- Facilmente conectada ao EM
- Voláteis
CG - Vaporização da Amostra
”- A amostra é vaporizada.”
CG - Fluxo de Gás
”- A amostra é injetada em um fluxo de gás.”
CG - Separação
”- A separação ocorre com base na afinidade dos componentes da amostra pela fase estacionária dentro da coluna.”
CG - Detecção
”- Os componentes são detectados à medida que saem da coluna.”
Fase Normal vs. Fase Reversa
- Na fase normal, são utilizados solventes orgânicos.,
- Na fase reversa, são utilizados solventes como água.
Detecção e Quantificação
”- A área sob a curva dos picos cromatográficos está relacionada à quantidade do fármaco na amostra.”
Pressão na CLAE vs CLUE
- Quanto menor o tamanho de partícula da fase estacionária, melhor é a resolução.
- O grande problema na CLUE é a pressão que deve ser exercida pelo sistema.”
CLAE - Até 400 bar
CLUE - até 1200 bar (1220 kg/cm2)
Instrumentação da Cromatografia Gasosa
”- A cromatografia gasosa utiliza um sistema de gás de arraste quimicamente inerte.”Hélio, argônio, nitrogênio e hidrogênio são utilizados
CG - Tipos de Colunas
A vazão do gás é regulada e depende do tipo de coluna utilizada.
Empacotadas - 25 a 150 mL/min
Capilares - 1 a 25 mL/min
Colunas Empacotadas
Diâmetro interno: 1 - 4 mm
Comprimento: 1 - 3 m
Pratos teóricos: 2.400/m
Colunas Capilares
Diâmetro interno: 0,15 - 0,75 mm
Comprimento: 10 - 100 m
Pratos teóricos: 3.000/m
CG - Injeção da Amostra
A injeção da amostra é crucial para garantir que seja feita em volume e velocidade adequados.
CG - Detecção
”- Os componentes são detectados à medida que saem da coluna.”
* Sensibilidade
* Estabilidade e reprodutibilidade (até pg do composto)
* Capaz de responder conforme a faixa de temperatura (até 400ºC)
* Rápida resposta
* Confiável e robusto
CG,Aplicações:
- Identificação e quantificação
- Controle de poluição de ar e águas
- Controles desde a matéria-prima até o produto acabado
- Análise de lipídeos e carboidratos (traços de vitaminas e esteroides)
Aplicações da Cromatografia Gasosa
- Análises ambientais, - Indústria química e farmacêutica,
- Análise de alimentos, - Controle de poluição de ar e águas,
- Análise de lipídeos e carboidratos.”
2.Avaliar metodologia x disponibilidade de equipamentos
”- Utilizar cromatógrafo provido de detector ultravioleta a 220 nm.,
- Coluna de 250 mm de comprimento e 4,6 mm de diâmetro interno.,-
- Fluxo da Fase móvel de 1,0 mL/minuto.”
3.Aplicação Prática do Captopril
- ”- Cromatograma da matéria-prima captopril disponível na indústria (pureza de 101%)., -
- Uso de SQR para a identificação e quantificação.,-
- Etapas produtivas que utilizam CLAE: Recepção, Pesagem, Produção, Embalagem, Produto acabado, Expedição.”
- Aplicação prática da metodologia proposta
- Pesagem
- Produção
- Embalagem
- Matéria Prima
- Recepção
- Expedição
- Produto acabado
Etapas produtivas que utilizarão
do CLAE para realizar o controle da produção
Vantagens da Fase Reversa na Análise de Medicamentos
- Para análise de medicamentos, a FASE REVERSA é a mais utilizada.
- Maior parte dos fármacos são hidrofílicos, o que possibilita boa solubilização na fase móvel.
- Além disso, o uso de fase móvel mais ambientalmente correta contribui para uma melhor resolução.
- Essa técnica possui aplicações praticamente universais.
Detectores
Ionização em chama
Popular, sensível e com boa resposta
Espectrometria de massas
Técnica muito utilizada, permite a
identificação dos analitos (fragmentos)
CLG,Vantagens:
- Alta sensibilidade (ng até pg)
- Precisão
- Reprodutibilidade
- Excelente resolução com rapidez
- Detector universal
CLG,Limitações:
- Número limitado de substâncias difícil emprego na forma preparativa
- Alto custo (equipamento) e manutenção
Cromatografia Gasosa (CG)
”- Neste método, a fase móvel é um gás inerte, como hélio ou nitrogênio.,- A amostra é vaporizada e injetada em um fluxo de gás que passa através de uma coluna de separação.,- A separação ocorre com base na afinidade dos componentes da amostra pela fase estacionária dentro da coluna.,- Como na CLAE, os componentes são detectados à medida que saem da coluna.”
Instrumentação da CLAE
“1. Reservatório de eluente: Onde os solventes ou misturas de solventes são armazenados para compor a fase móvel.,2. Sistema de bombeamento: Utilizado para bombear a fase móvel através da coluna cromatográfica.,3. Amostrador: Local onde a amostra a ser analisada é introduzida no sistema.,4. Coluna cromatográfica: Onde ocorre a separação dos componentes da amostra.,5. Detector: Responsável por detectar os componentes à medida que saem da coluna.,6. Computador para processamento dos dados: Usado para análise e interpretação dos resultados.”
Fase Reversa na CLAE
”- Na análise de medicamentos, a fase reversa é amplamente utilizada.,- A maioria dos fármacos é hidrofílica, o que significa que eles se solubilizam bem em fases móveis à base de água.,- Isso não só é ambientalmente mais correto, mas também proporciona melhor resolução na separação dos compostos.”
Fase Normal vs. Fase Reversa
”- Na fase normal, são utilizados solventes orgânicos como hexano, acetato de etila e diclorometano, juntamente com fases estacionárias como sílica, ciano e amina.,- Na fase reversa, são utilizados solventes como água, acetonitrila e metanol, com fases estacionárias como C18, C8 e fenil.”
Detecção e Quantificação
”- A área sob a curva dos picos cromatográficos está relacionada à quantidade do fármaco na amostra.,- Isso é fornecido diretamente pelo equipamento, facilitando a quantificação dos componentes.”
CLAE vs CLUE
”- Quanto menor o tamanho de partícula da fase estacionária, melhor é a resolução, devido ao aumento do número de pratos teóricos.,- O grande problema na CLUE é a pressão que deve ser exercida pelo sistema.,- Enquanto a CLAE opera com pressões de até 400 bar, a CLUE pode chegar a até 1200 bar (ou 1220 kg/cm²), o que a torna mais exigente em termos de instrumentação e resistência dos materiais.”
Instrumentação da Cromatografia Gasosa
”- A cromatografia gasosa utiliza um sistema de gás de arraste quimicamente inerte, como hélio, argônio, nitrogênio ou hidrogênio.,- A vazão do gás é regulada e depende do tipo de coluna utilizada: empacotadas (25 a 150 mL/min) ou capilares (1 a 25 mL/min).,- A injeção da amostra é crucial para garantir que seja feita em volume e velocidade adequados para uma boa separação.”
Características das Colunas da Cromatografia Gasosa
”- As colunas capilares têm diâmetro interno menor (0,15 - 0,75 mm) e comprimento mais curto (10 - 100 m), mas oferecem uma maior eficiência por metro de coluna, com aproximadamente 3000 pratos teóricos por metro.,- Já as colunas empacotadas têm diâmetro interno maior (1 - 4 mm) e comprimento mais curto (1 - 3 m), com cerca de 2400 pratos teóricos por metro.”
Aplicações da Cromatografia Gasosa
”- Análises ambientais,- Identificação e quantificação,- Indústria química e farmacêutica,- Análise de alimentos,- Controle de poluição de ar e águas,- Controles desde a matéria-prima até o produto acabado,- Análise de lipídeos e carboidratos (traços de vitaminas e esteroides)”
Metodologia Analítica do Captopril
“Utilizar cromatógrafo provido de detector ultravioleta a 220 nm; coluna de 250 mm de comprimento e 4,6 mm de diâmetro interno, empacotada com sílica quimicamente ligada a grupo octadecilsilano (5 μm), mantida à temperatura ambiente; fluxo da Fase móvel de 1,0 mL/minuto. Fase móvel: mistura de ácido fosfórico a 0,11% (v/v) e álcool metílico (45:55).”
Aplicação Prática do Captopril
“Cromatograma da matéria-prima captopril disponível na indústria (pureza de 101%). Uso de SQR para a identificação e quantificação. Marcados com asterísco são etapas produtivas que utilizarão do CLAE para realizar o controle da produção. Recepção, Pesagem, Matéria Prima, Produção, Embalagem, Produto acabado, Expedição”
