cours 7 Flashcards
Quelle est la découverte d’Hérelle? Expliquer brièvement.
- Il a mis en évidence un nouvel agent capable de détruire sélectivement les bactéries: le bactériophage
- lors de l’épidémie de dysenterie (Shigelle): sur gélose, il y avait des plages claires où les bactéries avaient été tuées. sur lapin: ingestion des bactéries mais aucun développement de maladie
Qu’est-ce que la R aux AB intrinsèques? Et qu’est-ce qu’elle comprend?
elle dépend des caractéristiques
naturelles de la bactérie
comprends:
- la faible perméabilité membranaire aux AB
- l’efflux actif: expulsion des AB hors de la cellule
- dégradation enzymatique des AB
- augmentation des mutations génomiques, favorisant l’adaptation
Qu’est-ce que la R aux AB acquise? Et qu’est-ce qu’elle comprend?
Résulte de mutations ou du transfert horizontal de gènes entre bactéries
comprends:
- modification des cibles moléculaires des AB
- inactivation enzymatique des AB
- Efflux actif renforcé
Qui joue un rôle de médiateur dans la résistance aquise? Et quel est leur but?
- les éléments génétiques mobiles (plasmide, transposon, intégrons)
- facilite la propagation entre espèces et genres différents
Qu’est-ce que le résistome?
- c’est le fait que l’environnement est une source majeure de gènes de R (présents dans la communauté micro naturelle)
- les bactéries de l’enviro peuvent échanger avec les agents patho (transfert hori)
Que cause l’utilisation excessive d’AB en santé humaine, vetérinaire et agriculture?
favorise la persistance et la dissémination des souches R
Nommer quelques caractéristiques des phages (5)
- virus omniprésent et diversifiés
- retrouvé dans tous les biotopes, partout où il y a des bactéries (+++)
- rôle fondamental dans les ecosystèmes, en régulant les population microbienne
-génomes extrêmement varié, ADN ou ARN, simple ou double brin, circulaire ou linéaire - en général, très spécifique mais recherche pas sur car pas étudié en nature
Quels sont les deux grands types de phages?
- virulents
- tempérés
Qu’est-ce qu’un phage virulent?
- se repliquent uniquement via le cycle lytique
- infection –> détournement de la machinerie bactérienne –> production de nouveaux phages –> lyse de la bactérie et libération des virions
- ex.: T2, T4 (E. coli)
Qu’est-ce qu’un phage tempéré?
- peuvent entrer en phase lysogénique, établissant une association stable avec l’hôte
- le génome viral peut rester sous forme d’épisome ou s’intégrer dans le chromo bactérien sous forme de prophage
- en condition de stress, le prophage peut être réactivé et entrer dans le cycle lytique, entrainant la lyse bactérienne et la libération des virions
- certains de ces phages sont capables d’une infection chronique: les virions sont sécrétés progressivement à travers la membrane sans lyser la cellule. Cela ralentit la croissance de l’hôte sans le tuer immédiatement.
De quoi dépend l’infection d’un phage?
de la présence d’un récepteur spécifique à la surface de la bactérie
Expliquer le mécanisme d’absorption du phage T4 (3 étapes).
- reconnaissance et fixation primaire: fibre de la queue du phage interagissent avec des récepteurs primaires, comme LPS ou porines
- fixation secondaire et ancrage: la plaque basale du phage se modifie, libérant les fibres courtes qui adhèrent aux récepteurs secondaires
- la gaine contractile se rétracte, propulsant le tube de la queue dans le périplasme. La membrane plasmique fusionne avec le tube, ouvrant un canal par lequel l’ADN viral est injecté dans le cytoplasme bactérien.
Quelles sont les 5 étapes clés du cycle lytique? Et expliquer brièvement.
- Éclipse
- transcription des gènes précoces par l’ARN pol de l’hôte (génome est à l’intérieur de la cellule)
- expression d’une exonucléase qui dégrade l’ADN bactérien et bloque ses gènes
- réplication de l’ADN viral et mod épigénétique (pour ne pas être embêter par les e* de restriction de l’hôte
- expression des gènes tardifs (capside, queue…) - Latence
- assemblage des prot virale: queue, fibre, plaque basale et formation de la capside
- encapsidation de l’ADN et assemblage du virion - Croissance et lyse
- expression de gènes de lyse: Holine, perforation de la membrane plasmique. Endolysine, dégradation du peptidoglycane - Entrée d’eau massive
- éclatement de la cellule et libération des virions - Burst size (nombre de particules par cellule)
- 10 à +s centaines de virions par cellule infectée
Comment déterminer la dynamique d’absorption? Expliquer l’expérience.
- On prend un tube et on incube des bactéries avec des phages à un MOI de 0,01 par exemple (cela veut dire qu’il y a un rapport de 1 phage pour 100 bactéries)
- ensuite on ajoute du chloroforme et on centrifuge
- après cela, il va rester des phages libres qui ne sont pas liés aux bactéries
- en mettant sur gélose, on peut ensuite voir les plage de lyse selon le temps et la dilution
- permet de déterminer si absobe et replique
Que veut dire MOI?
- multiplicity of infection
- nombre de phage / nombre de batéries hôtes
Comment déterminer la dynamique d’infection dans le cycle lytique? Expliquer expérience.
- prend une solution MOI 0.01
- on les laisse intéragir ensuite centri et deux lavages du culot
- chaque bactérie est alors avec un phage
- toutes les 10 min on fait une titration
Quelles sont les caractérisitques générales du phage lambda?
- infecte principalement E.coli
- génome: ADN double brin
Pour lambda, comment se fait l’entrée et circulation et le début de l’infection?
entrée et circulation:
- injection de l’ADN linéaire dans la cellule
- circulation via des extrémités cohésives (va devenir un cercle)
début de l’infection
- expression des gènes précorces immédiat
- décision entre latence et cercle lytique dépendant du rapport CII/Cro (deux régulateurs)
Pour lambda, expliquer les 3 étapes du cycle lytique.
Cro>CII
1. réplication
- réplication bidirectionnelle –> formation d’un épisome
- transition vers une réplication en cercle roulant (accumulation d’ADN viral)
2. expression des gènes viraux
- gènes précoces –> synthèse d’ADN et d’ARN viraux
- gènes tardifs –> production des protéines de structure
3. assemblage et lyse
- interaction site Cos/capside –> encapsidation du génome
- coupure en Cos –> maturation du virion
- assemblage final tête + queue
- lyse cellulaire et libération des nouveaux virions
Pour lambda, expliquer les 3 étapes du cycle lysogénique.
Cro<CII
1. intégration du prophage
- insettion entre les opérons Glactose et biotine.
- recombinaison site-spécifique entre attB (bactérie) et attB (phage). nécessite intégrase phagique + intégration Host Factor (IHF).
- génère une réplication des sites att (attL et attR)
2. maintien en lysogénie
- expression des gènes de latence
- répresseur CI bloque l’expression de l’intégrase et de Xis, empêchant l’excision
3. Induction et entrée en cycle lytique
- sous stress, activation de Xis et de l’intégrase
- recombinaison entre attL et attR –> excision du phage sous forme circulaire
- passage en réplication active et entrée en cycle lytique
Les promoteurs sont principalement dans les gènes précoces immédiats ou dans les gènes tardifs? Nommer deux promoteurs forts.
- Dans les gènes précoces immédiats
- PL et PR
Dans les régions de promoteurs chevauchants, quels sont les deux répresseurs et qu’est-ce qu’ils répriment et dans quel cycle?
- Répresseur C1: repression de cro, dans lysogénie
- Répresseur Cro: repression de cl, dans le cycle lytique (ADN pol ne peut pas aller sur le promoteur car Cro est déjè là)
Que produit cII? (+/- imp)
- activation de PRE (super faible)
- production d’antisens de cro
- expression de cI
Que produit cI? (+/- imp)
-active son promoteur
- reprime PR
