cours # 5 Flashcards
Est ce que l’ADN est soluble dans l’eau?
oui, car il est polaire et il y a peu de groupement fonctionnel
La solubilité de l’ADN varie selon quoi?
La concentration saline et la présence de substance organique
Nomme une façon de précipiter l’ADN
l’utilisation de l’éthanol
Décrit un protocole typique de la précipitation de l’ADN à l’aide de l’éthanol?
- ajout de 2.5 vol d’éthanol et ajouter 0.25 M d’acétate de sodium
- Mettre la solution à -20°C pendant 30 minutes
- resuspendre en utilisant un microcentrifugeuse à 10 000 g pour 10 minutes à 4°C
- Éliminer les sels accumulé par un lavage avec 70% d’éthanol
Après l’addition du phénol, 1. Où se trouvent l’ADN 2. Où se trouvent les protéines?
- L’ADN se trouve dans la phase aqueuse
- les protéines, souvent dénaturer, se retrouvent dans la phase phenolique
Donne un protocole typique de l’utilisation du phenol
- agite doucement 1 vol de phénol avec 1 vol de solvant contenant l’ADN
- On met du chloroforme pour éliminer le phénol
Par contre, le phénol doit d’abord être ajusté à un pH autour de 8
Pourquoi on utilise des protéases lors de l’extraction de l’ADN
pour dégrader les protéines et faciliter leur extraction au phénol
De quoi dépend la température d’hybridation?
de la longueur (long = temp élevé) et de la composition des nucléotides (bcp C/G = temp élevé)
À 72°C, quelle est la vitesse de la TAQ polymérase? En base par min
1000 bases par min
Qu’est ce que le Tm?
température de fusion
En relation avec le Tm, quel est la température générale d’hybradation?
5°C en bas du Tm
Est ce qu’on peut utilisé l’électrophorèse pour tester la pureté de l’ADN? Explique
Oui car les A-N sont chargé négativement
Quel type de gel est utilisé pour l’électrophorèse d’ADN? explique
On utilise l’agarose car les gels fait de polyacrylamide ont des pores trops petit pour l’ADN
La séparation dans l’électrophorèse se fait pourquoi?
la séparation s’effectuera selon la masse
moléculaire de l’ADN, qui dépend de la taille des fragments d’ADN:
Qu’elle colorant est utilisé dans l’électrophorèse d’ADN?
du bromure d’éthidium
