Cours # 2

Question 1

Qu’elles sont les deux phases de la chromatographie?

Answer 1

La phase stationnaire (phase où les substances sont séparer) et mobile (substance à séparer)

Question 2

Nomme les propriétés communément utilisées pour effectuer le fractionnement

Answer 2

1. taille (chromatographie par gel-filtration)
2. Charge (chromatographie par échangeur d’ion)
3. Spécificité (chromatographie d’affinité)

Question 3

L’affinité avec laquelle une protéine se lie à un échangeur d’ions dépend de deux choses. Nomme-les

Answer 3

1. Dépend du pH car il affecte la charge net
2. Dépend de la nature et concentration des autres ions en concentration qui peuvent compétitionner pour les sites de liaison des échangeurs d’ions

Question 4

les échangeurs utilisés en chromatographie des protéines dépendent de deux caractéristiques importantes:

Answer 4

1. Nature de la matrice
2. Des groupements fonctionnels qui vont participer au liaison de la protéine à la phase stationnaire.

Question 5

Qu’est ce qu’une matrice

Answer 5

des polymères insolubles qui sont en forme de billes appelé résine

Question 6

Qu’elle est le polymère le plus utilisé?

Answer 6

La cellulose

Question 7

L’échangeur d’ion fonctionne grâce à quel type d’interaction?

Answer 7

Interaction electrostatique

Question 8

Qu’elles sont les deux classes d’échangeur?

Answer 8

Échangeur anionique (charge positif)
Échangeur cationique (charge négatif)

Question 9

Explique la différence entre un échangeur fort et un échangeur faible?

Answer 9

Un échangeur fort est un échangeur qui ne vari pas de charge facilement. Par exemple, il va garder la même charge. Ex: meme charge pour pH de 3-10

Échangeur faible peut seulement avoir une charge dans une faible variation de pH.

Question 10

Un QAE c’est quoi? tu dois être spécifique

Answer 10

C’est un échangeur anionique fort

Question 11

le sulfonate c’est quoi?

Answer 11

C’est un échangeur cationique fort

Question 12

le DEAE c’est quoi?

Answer 12

Un échangeur anionique faible

Question 13

le CM c’est quoi?

Answer 13

C’est un échangeur cationique faible

Question 14

Comme la protéine est également neutralisée par des contre-ions, la protéine doit posséder une plus GRANDE OU PETITE affinité pour l’échangeur que pour les contre-ions qu’elle doit déplace

Answer 14

grande

Question 15

Qu’elle est l’étape qui suit l’addition de la substance a analysé ?

Answer 15

Lavage avec une solution tampon

Question 16

Lorsque la protéine se lie à l’échangeur d’ion à l’aide d’une concentration saline plus élevé que la solution tampon, qu’elle est la prochaine étape?

Answer 16

une élution fractionnée

Question 17

qu’elles sont les deux solutions utilisées pour l’élution?

Answer 17

KCl et NaCl

Question 18

Dans une chromatographie par gel-filtration, les molecules sont séparés par quoi?

Answer 18

Selon leur taille et forme

Question 19

Dans une chromatographie par gel-filtration, la matrice est fait de quoi?

Answer 19

Dextran, agarose ou polyacrylamide

Question 20

Qu’est ce que la limite d’exclusion?

Answer 20

La limite de taille que les pores peuvent laisser passer

Question 21

Les protéines qui ne pénètre pas dans les pores traversent plus vites ou plus lentement? Explique pourquoi

Answer 21

Ils traversent plus vite puisqu’ils ne sont pas retenus

Question 22

Qu’elles sont les matrices les plus utilisées?

Answer 22

Le dextrane, l’agrose ou le polyacrylamide pour le gel de filtration

Question 23

La porosité des gels dépend de quoi?

Answer 23

De la masse moléculaire du polymère
Des liaisons qui se croisent

Question 24

Une grosse masse molaire signifie une descente dans gel plus rapide ou plus lente?

Answer 24

Plus rapide

Question 25

Qu’est-ce que le volume d’élution?

Answer 25

C’est le volume de solvant nécessaire pour éluer la protéine après son dépôt sur la colonne

Question 26

Comment on mesure le volume d’élution relatif?

Answer 26

Ve/Vo

Question 27

À quoi sert de savoir le volume d’élution?

Answer 27

Estimer la masse moléculaire d’une protéine

Question 28

Qu'est ce qu'une dialyse?

Answer 28

Séparation des molécules par la taille grâce a l'utilisation de membrane semi-permeable

Question 29

Donne un exemple important de l'utilisation de la dialyse

Answer 29

utilisée pour éliminer les sels présents dans un échantillon de protéine obtenu après précipitation

Question 30

Explique comment fonctionne la chromatographie d'affinité

Answer 30

On utilise un ligand dans la phase stationnaire qui se lie spécifiquement à la protéine d'intérêt

Question 31

Qu'elles sont les deux avantages de l'utilisation de la chromatographie d'affinité?

Answer 31

1. Permet l'utilisation de propriété biochimique spécifique à la protéine 2. Permet la purification de la protéine d’intérêt à un très haut degré de pureté en une seule étape

Question 32

Comment on élimine le ligand de la protéine?

Answer 32

- en ajoutant un excès de ligand libre dans la colonne ( celui-ci entre en compétition pour la liaison de la protéine) - en changeant le pH, la force ionique et/ou la température

Question 33

la matrice utilisée pour la chromatographie d’affinité doit:

Answer 33

- chimiquement inerte - avoir une grande porosité - présenter de nombreux groupes fonctionnels capables de former des liens covalents avec les ligands

Question 34

Qu'elle est le polymère le plus utilisé dans une chromatographie d'affinité?

Answer 34

l'agarose

Question 35

la liaison par lien de covalence du ligand sur la matrice d’agarose se fait en deux étapes. Que sont-ils?

Answer 35

1) réaction de l’agarose avec du bromure de cyanogène, qui produit un intermédiaire "activé" et stable 2) le ligand réagit avec l’agarose activé pour donner un produit lié par coval ence

Question 36

Nomme un problème avec l'utilisation de l'agarose et la solution

Answer 36

plusieurs protéines sont incapables de se lier à leur ligand couplé au bromure de cyanogène à cause d’interférence stérique avec la matrice d’agarose. Donc, on utilise un bras "espaceur.

Question 37

De quoi est généralement constitué le bras "espaceur

Answer 37

Epoxy (6 atomes de carbones)

Question 38

Qu'elle est l'étape qui précède la chromatographie ?

Answer 38

une méthode qui permette de la ou les détecter quantitativement et spécifiquement dans les différentes fractions de l’éluat