Cours #2 Microscopie Flashcards
A quoi sert principalement le microscope?
Ces outils ont une importance capitale dans la compréhension de la corrélation structure-fonction des microorganismes.
Ex: - cellule eucaryotes de 10-100 hm
- cellule procaryotes de 0,2 a 50 hm
- resolution de l’œil humain est de 100 hm ( pouvoir de séparation)
- la microscopie permet d’agrandir une image en augmentant la résolution
Vrai ou faux. La résolution représente la capacité de distinguer des petits objets près l’un de l’autre?
Vrai. Elle dépend de :
—> la longueur d’onde de la lumière ( plus elle est petite meilleure est la résolution= + délimité= voit plus les détails)
* spectre du visible = longueur onde assez grande
—-> l’ouverture numérique ( plus elle est grande meilleure est la résolution) dépend de :
* refraction
*l’angle de la lumière entrant dans l’objectif ( deviation à l’extérieur du champ observé)
* la distance de travail ( maximiser l’espace selon la luminosité)
—> oil empêche les rayons de dévier= plus d’info sur ce qu’on regarde
Quels sont les 3 types de microscopes?
- optique : fond clair,fond noir,contraste de phase,fluorescence,confocal
- électronique: transmission,balayage
- balayage de sonde : a effet tunnel, a force atomique
Description de la microscopie à fond clair:
- ideale pour les microorganismes fixées et colores ( parois état frais)
- la lumière est concentrée par un condensateur
- image agrandie par objectif ( 4x-100x) et par oculaires 10x= résolution d’environs 0,2 hm
—-> produit une image foncée sur un fond brillant
Description microscopie à fond noir:
- utilise la lumière réfractée par l’objet a observer.. l’échantillon apparaît éclairée et le fond est noir
- permet d’observer à l’état frais ( cellules vivantes non colorées- motilité )
—-> lumière non réfléchie = perdue
Description microscopie à contraste de phase:
- permet d’observer des organismes vivants
- convertit les différences d’indice de réfraction (changement de phase… permet que les deux ondes soient à leur pic de leur phase lors de l’observation= doit retarder l’une des deux ondes pour qu’elles arrivent en même temps) et de densité cellulaire en différentes intensités lumineuses visibles par l’œil
—> c’est la bactérie qui créer le retard dans les ondes
—> l’image de l’échantillon sera sombre sur un fond clair ( avec nuance de gris selon le décalage des ondes)
Description microscopie à fluorescence:
- éclaire un échantillon marqué par un fluorochrome et forme une image à partir de la lumière fluorescente émise
-l’échantillon émet cette lumière visible après avoir absorbé des photons de haute énergie ( faible longueur d’onde= vu)
—-> création d’un hybride qui réfléchit la lumière
-l’immunofluorescence est très utilisée pour des fins de diagnostic en microbiologie médicale
Description microscopie confocale:
- permet d’étudier des échantillons épais et complexes
- crée une image à partir d’un plan focal en éliminant les rayons parasites provenant des régions autres que celles du plan focale
—-> aperture = intercepte les rayons selon la profondeur souhaitée
—> faire une mise au point= changement de profondeur / étage pour observer ce que l’on souhaite = permet de faire une reconstruction 3D
Description microscopie électronique:
- utilise un faisceau d’électrons plutôt que la lumière visible , car la longueur d’onde des électrons est 100 000x plus courte = résolution supérieure
—-> l’air interfère avec les électrons
Description microscopie électronique à transmission :
- l’échantillon est très mince est coloré par des solutions de sels de métaux lourds ( uranium,plomb)
- les régions épaisses sont dites: denses en électrons . Cela se traduit par une région sombre par rapport aux régions plus minces qui apparaissent claires = image avec contraste
- cette technique donne des détails des structures internes
Description microscopie électronique à balayage :
- utilise pour étudier les caractéristiques de la surface externe de l’échantillon
Description microscopie à balayage de sonde : le plus récent
A effet tunnel :
- détermine les caractéristiques de surface avec une sonde qui effectue un balayage de l’échantillon
- grossissement de 100 millions ( observation des atomes à la surface )
Description microscopie à balayage de sonde
—> a force atomique ( contacte direct) :
- excellent pour les surfaces qui ne conduisent pas bien l’électricité ( très haute résolution/ principe du braille)
- utilise pour étudier les interactions entre protéines et le comportement de bactéries
Description des différentes préparations et colorations en microscopie optique:
- montage frais: goutte de culture contenant le microorganisme vivant —> étudier motilité
- montage sec: microorganismes fixé à la lame , les structure sont durcies et protégées de la destruction par les enzymes. Par la chaleur ou des agents chimiques (conservation de la structure interne)
- coloration: colorants basiques sont chargés positivement et se fixe aux molécules chargées négativement
Colorants acides négatifs adhèrent aux structures chargées positivement
Les colorants neutres sont plus complexes composés d’une colorants acide et basique
Définition coloration + différent types :
—> coloration= technique utilisé pour distinguer des organismes sur la base de leur coloration
- coloration simple ( cristal violet et bleu de méthylène )
- coloration différentielle ( coloration de gram/ acido-alcoolo-résistant )
- coloration de structure spécifique ( endospores,capsules,flagelles)
