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Bi440 > CM4 > Flashcards

CM4 Flashcards

1
Q

Par quel étapes la bactérie peut acquérir un fragment d’ADN exogène ?

A

La conjugaison
Par transfert d’information génétique d’une cellule bactérienne vers une autre

La transduction
Par les virus bactériens : les bactériophages

La transformation par de l’ADN

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Q

Qu’est ce que la transformation bactérienne ?

A

C’est une technique expérimentale consistant à faire pénétrer un ADN exogène
(Ici un ADN recombinant sous forme de plasmide recombinant) dans une bactérie

Il faut à préalable rendre les bactéries compétentes afin que l’ADN puisse pénétrer dans les bactéries

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Q

Comment rendre les bactéries compétentes ?

A

Deux techniques les plus répandu
Les bactéries peuvent être rendu
-thermocompétente ou (chimiocompétente)
-électrocompétente

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4
Q

Principe de la bactérie chimiocompétente ?

A

Méthode qui altère la perméabilité des membranes

Ca2+, K+ altère la perméabilité des membranes car
Ca2+ intérargit avec les charges (-) négatives des phospholipides ce qui neutralise partiellement les charges

Diminution de la température rend les phospholipides plus stationnaires ce qui permet une meilleure accessibilité des Ca2+

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5
Q

Dans les bactéries chimiocompétente
Que crée le choc thermique ?

A

Un déséquilibre de la température et donc un courant ce qui contribue à faire rentrer l’ADN dans la cellule

Le choc thermique aide aussi à la cellule de recruter les protéines pour réparer la membrane

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6
Q

Dans les bactéries compétentes
Que consiste l’électroporation ?

A

À appliquer un fort voltage ( choc électrique) qui peut aller jusqu’à 20 000 volts sur les cellules avec de l’ADN

L’electroporation fabrique des pores hydrophiles dans la membrane permettant le passage de l’ADN durant l’électroporation

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7
Q

Durant l’électroporation, comment est l’ADN?

A

Polaire, chargé négativement et ne peut donc pas traverser la membrane hydrophobe facilement

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8
Q

Pourquoi un seul plasmide par bactérie ?

A

Mélange de fragments digérés par les enzymes de restriction + vecteurs digérée par les mêmes enzymes de restriction

= recircularisation du vecteur
Ou formation de l’ADN recombinant

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9
Q

Comment se fait la transformation des plantes ?

A

Il n’existe pas de plasmide naturel chez les plantes

Que
-qq virus rarement utilisé comme vecteur

  • utilisation svt du plasmide bactérien Ti

-electroporation sur protoplaste
( cellules végétales sans paroi , obtenu expérimentalement par digestion de la paroi pecto cellulosidique

-fusil à gènes ( particule recouverte d’ADN à introduire)

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10
Q

Pour la transfection animale ?

A

N’existe pas de plasmide naturel

  • Vecteur utilisé dérivent de virus se répliquant dans la cellule ( adénovirus ou rétrovirus )
    Ex : thérapie génique
  • Plasmide artificielle très instable avec
    Une ORI bactérienne + marqueur de résistante pour la construction et l’amplification dans la bactérie

Promoteurs , maturation des transcrit ( signaux d’épissage , poly A )

Marqueurs de sélection

-ADN nu

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11
Q

Quels techniques de transfection de l’ADN nu sont utilisés ?

A

Utilisation de phosphate de calcium ( principe de choc osmotique qui rend les cellules osmotique )

Utilisation de polymère cationique ( complexe avec l’ADN et aide la pénétration dans la cellule )

Utilisation de liposome ( lipofection) ( piège l’ADN dans des vésicules membranaires artificielles puis endocytose ou alors juste des interactions mais pas d’encapsulation)

Fusion de protoplaste

Electroporation( impulsion électrique )

Biolistique ( fusil à gêne )

Microinjection ( injection par pipette dans la cellule )

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12
Q

Quel est la différence entre sélection et criblage ?

A

Sélection :
quand les nouvelles propriétés des clones peuvent permettre directement de les sélectionner

Criblage :
quand les clones obtenus doivent subir d’autres études afin de déterminer quels sont les clones d’intérêt

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13
Q

Quels sont les 2 types de sélection ?

A

Sélection sur milieu de culture + antibiotique

Sélection phénotypique : blanc / bleu

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14
Q

Sur quoi est basé la sélection phénotypique ?

A

Basé sur la complémentation fonctionnelle ou l’expression d’un nouveau phénotype

Ce qui permet la détection d’un gène sur la base de sa fonction ou le produit de son expression

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15
Q

Que signifie MCS?

A

Site de clonage multiple (MCS) = polylinker
Court segments de l’ADN qui contient jusqu’à 20 sites de restriction

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16
Q

Que produit le gène lacZ ?
Que peut faire ce produit enzymatique en présence du substrat X-Gal ?

A

Cette enzyme est capable de cliver la liaison et libérer le noyau indol qui va se dimériser X2 et donner une couleur bleue à la colonie bactérienne

17
Q

Comment se fait un criblage ?

A

Par hybridation avec une sonde d’ADN marqué

18
Q

Propriété d’un marquage par une sonde ?

A

Radioactif ou chimique

19
Q

Deux propriétés de l’hybridation moléculaire ?

A

Spécifique et réversible

20
Q

Complète la phrase :
Plus les conditions sont stringentes plus l’hybridation est …..,

A

Spécifique

21
Q

Comment est la stringence à PH constant ?

A

Elle est proportionnelle à la température et à l’inverse de la [Na+]

22
Q

Qu’est qu’une sonde ?

A

Sonde à ADN sont des segments d’ADN qui sont marqués afin d’indiquer la détection de segments homologues d’ADN dans des échantillons de culture

Tronçons d’ADN simple brin utilisé pour détecter des acides nucléaire complémentaire (séquence cible par hybridation

23
Q

Quel est l’autre technique qui repose sur le même principe que celui de l’hybridation sur colonie ?

A

Criblage par révélation d’anticorps spécifiques basé sur l’expression de la structure de la protéine

24
Q

Que signifie DOT BLOt ?

A

Révélation avec un anticorps spécifique

25
Q

Que faut il pour réaliser une séquençage de Sanger ?

A

Formation d’une liaison de phosphodiester

On a besoin de l’ADN polymérase
D’une amorce
Des déoxynucléotides
( dATP) (dTTP) (dCTP) (dGTP)

Des didéoxynucléotides radiomarqué
(ddNTP) (ddATP ) (ddTTP) (ddGTP)

26
Q

Pour la méthode de Sanger qu’utilise t-on ?

A

Capillaire d’électrophorèse

27
Q

Qu’est ce qu’un vecteur ?

A

Un vecteur est une molécule d’ADN capable de se répliquer dans une cellule donné et qui sert à cloner , transporter, et amplifier des fragments d’ADN étrangers , appelés inserts

28
Q

Attribue la technique qu’on utilise avec les différents acides nucléiques ?

A

ADN chromosomique = PCR séquençage et clonage

ADN plasmidique = clonage (isoler une portion d’ADN ,modifier un gène )

ARN messager = RT (ADN complémentaire) et PCR

29
Q

Que se passe t-il quand le pH= pI ?

A

La solubilité d’une protéine est au MINimUM quand pH= pI

Cette propriété est à l’origine d’une d’une méthode de purification de protéine appelé précipitation isoélectrique

Bi440 (4 decks)

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