Chromatographie

Question 1

Quels sont les phases qui composent la chromatographie?

Answer 1

La phase stationnaire et la phase mobile

Question 2

Comment la phase mobile se déplace-t-elle?

Answer 2

• Gravité
• Capillarité
• Transport actif (pompe)

Question 3

Quelles sont les interactions entre les solutés et la phase stationnaire?

Answer 3

• Van der Waals
• Forces électrostatiques
• Liaisons hydrogène
• Interactions hydrophobes

Question 4

Comment les composés se séparent selon le phénomène d’adsorbtion?

Answer 4

Par la polarité des composés

Question 5

La polarité du silice et de l’alumine (principaux adsorbants) est-elle forte ou faible?

Answer 5

Très forte

Question 6

Que signifie HPTLC?

Answer 6

High Performance Thin Layer Chromatography

Question 7

Quelles propriétés peuvent être utilisées pour séparer les molécules dans la chromatographie sur colonne?

Answer 7

• Charge
• Taille
• Hydrophobicité

Question 8

Quelle est la différence entre l’éluant et l’éluat?

Answer 8

L’éluat est un mélange d’éluant et de soluté

Question 9

Que signifie un faible coefficient de partition K?

Answer 9

La molécule va sortir de la colonne plus rapidement

Question 10

Quels sont les paramètres qui peuvent affecter la résolution d’une chromatographie sur colonne?

Answer 10

• Capacité de la colonne (plus la quantité d’échantillon est grande, plus les pics sont larges)
• Efficacité de la colonne (affecte la largeur des pics)
• Sélectivité de la colonne (affecte la distance entre les pics)

Question 11

Quels sont les types de colonnes pour la chromatographie?

Answer 11

• Gravité
• FPLC ou HPLC (débit contrôlé par le système)
• Centrifugation

Question 12

Quels sont les principaux types de chromatographie sur colonne?

Answer 12

• Exclusion stérique
• Échange d’ions
• Hydrphobicité
• Affinité et IMAC

Question 13

Quel est le principe de la chromatographie d’exclusion?

Answer 13

La colonne est remplie d’un matériau poreux et les molécules qui ne peuvent pas entrer dans les pores seront éluées plus rapidement

Question 14

Qu’est-ce que le volume mort d’une colonne d’exclusion?

Answer 14

C’est le volume d’élution d’une molécule exclue de la phase stationnaire

Question 15

Quels sont les paramètres à contrôler lors d’une chromatographie d’exclusion?

Answer 15

• Phase stationnaire
• Type de gel
• Débit de l’élution
• Pression supportée
• Taille des billes
• Hauteur et diamètre de la colonne
• Volume de dépôt

Question 16

Quelles sont les principales applications de la chromatographie d’exclusion?

Answer 16

• Chromatographie préparative
• Chromatographie analytique
• Dessalage d’une solution

Question 17

Quel est le principe de la dialyse?

Answer 17

Une membrane poreuse empêche la diffusion des grosses molécules et les petites molécules peuvent la traverser

Question 18

Comment fonctionne la chromatographie échangeuse d’ions?

Answer 18

Colonne de cations ou d’anions auquelle les molécules chargées vont s’éluer plus lentement (le phase mobile est un tampon aqueux)

Question 19

Quels sont les paramètres qui affectent la séparation des composés dans la chromatographie par échange d’ions?

Answer 19

• La phase stationnaire:
  détermine la charge des ions échangés (anions ou cations) et la
  force de l’échangeur (fort ou faible).
• Le pH de la phase mobile: affecte la charge nette des composés de l’échantillon (pI).
• La force ionique de la phase mobile: l’interaction est favorisée
  à faible concentration de sels.
• La température: l’interaction est favorisée à basse température

Question 20

Quel est le principe de la chromatographie d’hydrophobicité?

Answer 20

La résine légèrement hydrophobe va faire en sorte que les molécules hydrophobes présentes dans la phase stationnaire à haute force ionique vont s’éluer plus lentement

Question 21

Quels sont les paramètres à contrôler lors de la chromatographie d’hydrophobicité?

Answer 21

• La phase stationnaire (Butyl-, Phenyl-, Octyl-Sepharose): plus la chaîne aliphatique est longue, plus forte est
  l’interaction hydrobe
• Le pH de la phase mobile: affecte la charge nette des composés de l’échantillon (pI)
• Le type et la concentration de sel de la phase mobile:
  l’interaction est favorisée à haute concentration de sel puisqu’il
  masque les charges des molécules en solution
• La température: l’interaction est favorisée à haute température

Question 22

Quel est le principe de la chromatographie d’affinité?

Answer 22

La colonne contient un ligand qui se lie à une molécule en particulier

Question 23

Quel est l’avantage et l’inconvénient de la chromatographie d’affinité?

Answer 23

Avantage: Permet de purifier en une seule étape
Inconvénient: Pas d’informations sur les propriétés de la molécule purifiée