Chromatographie Flashcards
Quels sont les phases qui composent la chromatographie?
La phase stationnaire et la phase mobile
Comment la phase mobile se déplace-t-elle?
- Gravité
- Capillarité
- Transport actif (pompe)
Quelles sont les interactions entre les solutés et la phase stationnaire?
- Van der Waals
- Forces électrostatiques
- Liaisons hydrogène
- Interactions hydrophobes
Comment les composés se séparent selon le phénomène d’adsorbtion?
Par la polarité des composés
La polarité du silice et de l’alumine (principaux adsorbants) est-elle forte ou faible?
Très forte
Que signifie HPTLC?
High Performance Thin Layer Chromatography
Quelles propriétés peuvent être utilisées pour séparer les molécules dans la chromatographie sur colonne?
- Charge
- Taille
- Hydrophobicité
Quelle est la différence entre l’éluant et l’éluat?
L’éluat est un mélange d’éluant et de soluté
Que signifie un faible coefficient de partition K?
La molécule va sortir de la colonne plus rapidement
Quels sont les paramètres qui peuvent affecter la résolution d’une chromatographie sur colonne?
- Capacité de la colonne (plus la quantité d’échantillon est grande, plus les pics sont larges)
- Efficacité de la colonne (affecte la largeur des pics)
- Sélectivité de la colonne (affecte la distance entre les pics)
Quels sont les types de colonnes pour la chromatographie?
- Gravité
- FPLC ou HPLC (débit contrôlé par le système)
- Centrifugation
Quels sont les principaux types de chromatographie sur colonne?
- Exclusion stérique
- Échange d’ions
- Hydrphobicité
- Affinité et IMAC
Quel est le principe de la chromatographie d’exclusion?
La colonne est remplie d’un matériau poreux et les molécules qui ne peuvent pas entrer dans les pores seront éluées plus rapidement
Qu’est-ce que le volume mort d’une colonne d’exclusion?
C’est le volume d’élution d’une molécule exclue de la phase stationnaire
Quels sont les paramètres à contrôler lors d’une chromatographie d’exclusion?
- Phase stationnaire
- Type de gel
- Débit de l’élution
- Pression supportée
- Taille des billes
- Hauteur et diamètre de la colonne
- Volume de dépôt
Quelles sont les principales applications de la chromatographie d’exclusion?
- Chromatographie préparative
- Chromatographie analytique
- Dessalage d’une solution
Quel est le principe de la dialyse?
Une membrane poreuse empêche la diffusion des grosses molécules et les petites molécules peuvent la traverser
Comment fonctionne la chromatographie échangeuse d’ions?
Colonne de cations ou d’anions auquelle les molécules chargées vont s’éluer plus lentement (le phase mobile est un tampon aqueux)
Quels sont les paramètres qui affectent la séparation des composés dans la chromatographie par échange d’ions?
- La phase stationnaire:
détermine la charge des ions échangés (anions ou cations) et la
force de l’échangeur (fort ou faible). - Le pH de la phase mobile: affecte la charge nette des composés de l’échantillon (pI).
- La force ionique de la phase mobile: l’interaction est favorisée
à faible concentration de sels. - La température: l’interaction est favorisée à basse température
Quel est le principe de la chromatographie d’hydrophobicité?
La résine légèrement hydrophobe va faire en sorte que les molécules hydrophobes présentes dans la phase stationnaire à haute force ionique vont s’éluer plus lentement
Quels sont les paramètres à contrôler lors de la chromatographie d’hydrophobicité?
- La phase stationnaire (Butyl-, Phenyl-, Octyl-Sepharose): plus la chaîne aliphatique est longue, plus forte est
l’interaction hydrobe - Le pH de la phase mobile: affecte la charge nette des composés de l’échantillon (pI)
- Le type et la concentration de sel de la phase mobile:
l’interaction est favorisée à haute concentration de sel puisqu’il
masque les charges des molécules en solution - La température: l’interaction est favorisée à haute température
Quel est le principe de la chromatographie d’affinité?
La colonne contient un ligand qui se lie à une molécule en particulier
Quel est l’avantage et l’inconvénient de la chromatographie d’affinité?
Avantage: Permet de purifier en une seule étape
Inconvénient: Pas d’informations sur les propriétés de la molécule purifiée