Chapitre 8 - Recombinaison homologue Flashcards
Cause directe des cassures double brins?
Radiations ionisantes ou protéines spécialisées
Les 6 choses que nécessite la recombinaison homologue ?
1) Alignement de molécules d’ADN homologue (chromatides soeurs)
2) Cassures pour générer des simples brins
3) Appariement des brins recombinants (déclenche la recombinaison)
4) Jonction de Holliday (inter-molécules)
5) Migration des branches
6) Résolution des jonctions de Holliday (fin de l’échange des brins)
Les 5 étapes à la recombinaisons d’un brin ?
1) Il y a cassure double brins et une hélicase les sépare
2) La 5’ exonucléase digère une séquence de ces brins pour former des simples brins
3) 1ère invasion du brin 3’OH du brin coupé (synthèse et réparation à partir de l’extrémité 3’OH)
4) 2e invasion par le brin non-coupé
5) régénération des brins coupé à partir de leurs chromosomes homologues (gris→gris) *IL Y A MAINTENANT 2 JONCTION DE HOLLIDAY
Les 2 sites de clivages possible ?
1) En dehors des jonctions de Holliday
2) Sur la jonction de Holliday
Les 2 résultats possible après le clivage des brins?
1) Un réarrangement = les 4 simple brin se mélange (la moitié bleue et l’autre grise sur tous les brins)
2) Pas de réarrangement = une petite portion est changé (une petite portion grise sur un des brins bleu et même chose pour le bleu dans le gris)
Les 4 protéines qui génèrent les 5 étapes de la recombinaison d’un brin chez E.Coli ?
De 1 à 2: RecBCD
De 2 à 3: RecA
De 3 à 4: RuvAB
De 4 à 5: RuvC
Rôles de l’hélicase/nucléase RecBCD ?
1) Génère des extrémités simple brin
2) Recrute la protéine d’échange de brin RecA
Par quoi sont contrôlés les actions de RecBCD?
Par des séquences d’ADN spécifique (les sites CHI)
Les fonctions de ce complexe pour chaque parties?
RecB = Hélicase 3' vers 5' et nucléase (coupe et digère) RecC = Reconnaît les séquences CHI RecD = Hélicase 5' vers 3'
Qu’arrive-t-il lorsque RecC rencontre une séquence CHI?
Il arrête de digérer le brin 3’ vers 5’, mais continue à digérer l’autre
Que ce passe-t-il si un ADN étranger entre dans E.Coli ?
Il sera digérer en entier par RecBCD s’il n’y a pas de séquence CHI.
Que ce passe-t-il si un autre ADN E.Coli entre dans E.Coli ?
Il y aura recombinaison dû à la présence de séquence CHI
Fonction de RecA ?
Favorise l’invasion simple brin de molécule d’ADN homologue
Rôles de RecA ?
1) Reconnaissance de régions homologues
2) Appariement des molécules
Comment fonctionne RecA ?
1) Elle se lie à une molécule simple brin
2) Le complexe RecA-ADNsb recherche la région complémentaire sur un ADNdb
Quel est le critère de recherche de RecA et la fonction de ses sites de liaisons?
Critère de recherche = la complémentarité des bases
- Site de liaison 1 = liaison de l’ADNsb
- Site de liaison 2 = analyse de la complémentarité d’un brin homologue d’ADNdb
Vrai ou faux, il faut un minimum de 100 Pbs identiques sur l’ADNdb pour valider une homologie avec l’ADNsb ?
Faux, il en faut seulement 15 Pbs
Que nécessite l’échange de brins dans la structure tricaténaire de RecA ?
1) Une rupture des liaisons W-C de la molécule d’ADNdb et la reformation des liaison W-C avec la molécule d’ADNsb (molécule hybride)
2) La formation d’une double hélice de la molécule hybride (hétéroduplex)
Qu’arrive-t-il une fois que RecA a catalysée l’initiation de l’échange des brins ?
RuvAB reconnaît les jonctions de Holliday formées et favorise la migration des brins
Le rôle de chaque parties du complexe RuvAB ?
RuvA = reconnaissance des jonctions de Holliday RuvB = Hélicase qui déplace les molécules hybride par hydrolyse d'ATP
L’utilisation d’ATP par RuvB favorise quoi?
L’élongation des molécules hybrides
Quel est le rôle de l’endonucléase RuvC ?
Coupe les brins spécifiquement à la jonction de Holliday
Qu’est-ce qui est primordial pour RuvC, pour que l’ADN ligase puisse relier une extrémité 3’-OH à une 5’-P
Faire une incise sur des brins homologues de même polarité
RuvC incise tout de même à un site spécifique qui se retrouve tous les 64 Pbs, lequel?
5’-(A/T)-TT-(G/C)-3’
Qu’est-ce que cette coupe spécifique par RuvC assure avant la résolution des jonctions de Holliday?
Une élongation minimale des brins
Chez les eucaryotes, à quel stade doit se passer la recombinaison ?
Au stade 2X2N, soit avant la 1ère méiose
Les 2 étapes à la recombinaison méiotique, ainsi que le résultat final?
1ère division de méiose: Les chromatides soeurs sont appariées
2e division de méiose: Les chromatides soeurs se séparent
Résultat final: 4 gamètes haploïdes
Qu’arrive-t-il en absence de recombinaison ?
Les chromosomes sont sur/sous-représentés = faible fertilité
Qu’est-ce qui provoque des cassures double brins programmées et comment ?
SPO11 qui est activée spécifiquement pendant la méiose et fait des cassures double brins à des régions peu spécifiques, mais en dehors des nucléosomes
Vrai ou faux, SPO11 est activée à un moment très précis ?
vrai, au début de l’appariement des chromosomes homologues
Comment font les 2 S.U. SPO11 pour faire une cassure double brins ?
Elles utilisent chacune une tyrosine sur un nucléotide pour briser le pont phosphodiester en formant une liaison covalente protéine-ADN
Une fois que SPO11 a fait ses coupures, qui est recruté ?
MRX, analogue à RecBCD chez E.Coli (génère 2 extrémités simple brin grâce à des nucléase)
Où agît MRX exclusivement ?
Sur l’extrémité 5’ formé par SPO11, 3’-OH n’est pas dégradé.
La digestion est donc 5’ vers 3’
Où et comment interagissent les analogues a RecA, Dmc1 et Rad51 ?
- Dmc1: Seulement pendant la méiose, favorise la recombinaison inter-homologues et assiste l’appariement des chromosomes avant la 1ère méiose
- Rad51: pendant la méiose et la mitose, assiste l’appariement des chromosomes avant la 1ère méiose
