Chapitre 8 - Recombinaison homologue

Question 1

Cause directe des cassures double brins?

Answer 1

Radiations ionisantes ou protéines spécialisées

Question 2

Les 6 choses que nécessite la recombinaison homologue ?

Answer 2

1) Alignement de molécules d’ADN homologue (chromatides soeurs)
2) Cassures pour générer des simples brins
3) Appariement des brins recombinants (déclenche la recombinaison)
4) Jonction de Holliday (inter-molécules)
5) Migration des branches
6) Résolution des jonctions de Holliday (fin de l’échange des brins)

Question 3

Les 5 étapes à la recombinaisons d’un brin ?

Answer 3

1) Il y a cassure double brins et une hélicase les sépare
2) La 5’ exonucléase digère une séquence de ces brins pour former des simples brins
3) 1ère invasion du brin 3’OH du brin coupé (synthèse et réparation à partir de l’extrémité 3’OH)
4) 2e invasion par le brin non-coupé
5) régénération des brins coupé à partir de leurs chromosomes homologues (gris→gris) *IL Y A MAINTENANT 2 JONCTION DE HOLLIDAY

Question 4

Les 2 sites de clivages possible ?

Answer 4

1) En dehors des jonctions de Holliday

2) Sur la jonction de Holliday

Question 5

Les 2 résultats possible après le clivage des brins?

Answer 5

1) Un réarrangement = les 4 simple brin se mélange (la moitié bleue et l’autre grise sur tous les brins)
2) Pas de réarrangement = une petite portion est changé (une petite portion grise sur un des brins bleu et même chose pour le bleu dans le gris)

Question 6

Les 4 protéines qui génèrent les 5 étapes de la recombinaison d’un brin chez E.Coli ?

Answer 6

De 1 à 2: RecBCD
De 2 à 3: RecA
De 3 à 4: RuvAB
De 4 à 5: RuvC

Question 7

Rôles de l’hélicase/nucléase RecBCD ?

Answer 7

1) Génère des extrémités simple brin

2) Recrute la protéine d’échange de brin RecA

Question 8

Par quoi sont contrôlés les actions de RecBCD?

Answer 8

Par des séquences d’ADN spécifique (les sites CHI)

Question 9

Les fonctions de ce complexe pour chaque parties?

Answer 9

RecB = Hélicase 3' vers 5' et nucléase (coupe et digère)
RecC = Reconnaît les séquences CHI
RecD = Hélicase 5' vers 3'

Question 10

Qu’arrive-t-il lorsque RecC rencontre une séquence CHI?

Answer 10

Il arrête de digérer le brin 3’ vers 5’, mais continue à digérer l’autre

Question 11

Que ce passe-t-il si un ADN étranger entre dans E.Coli ?

Answer 11

Il sera digérer en entier par RecBCD s’il n’y a pas de séquence CHI.

Question 12

Que ce passe-t-il si un autre ADN E.Coli entre dans E.Coli ?

Answer 12

Il y aura recombinaison dû à la présence de séquence CHI

Question 13

Fonction de RecA ?

Answer 13

Favorise l’invasion simple brin de molécule d’ADN homologue

Question 14

Rôles de RecA ?

Answer 14

1) Reconnaissance de régions homologues

2) Appariement des molécules

Question 15

Comment fonctionne RecA ?

Answer 15

1) Elle se lie à une molécule simple brin

2) Le complexe RecA-ADNsb recherche la région complémentaire sur un ADNdb

Question 16

Quel est le critère de recherche de RecA et la fonction de ses sites de liaisons?

Answer 16

Critère de recherche = la complémentarité des bases

• Site de liaison 1 = liaison de l’ADNsb
• Site de liaison 2 = analyse de la complémentarité d’un brin homologue d’ADNdb

Question 17

Vrai ou faux, il faut un minimum de 100 Pbs identiques sur l’ADNdb pour valider une homologie avec l’ADNsb ?

Answer 17

Faux, il en faut seulement 15 Pbs

Question 18

Que nécessite l’échange de brins dans la structure tricaténaire de RecA ?

Answer 18

1) Une rupture des liaisons W-C de la molécule d’ADNdb et la reformation des liaison W-C avec la molécule d’ADNsb (molécule hybride)
2) La formation d’une double hélice de la molécule hybride (hétéroduplex)

Question 19

Qu’arrive-t-il une fois que RecA a catalysée l’initiation de l’échange des brins ?

Answer 19

RuvAB reconnaît les jonctions de Holliday formées et favorise la migration des brins

Question 20

Le rôle de chaque parties du complexe RuvAB ?

Answer 20

RuvA = reconnaissance des jonctions de Holliday
RuvB = Hélicase qui déplace les molécules hybride par hydrolyse d'ATP

Question 21

L’utilisation d’ATP par RuvB favorise quoi?

Answer 21

L’élongation des molécules hybrides

Question 22

Quel est le rôle de l’endonucléase RuvC ?

Answer 22

Coupe les brins spécifiquement à la jonction de Holliday

Question 23

Qu’est-ce qui est primordial pour RuvC, pour que l’ADN ligase puisse relier une extrémité 3’-OH à une 5’-P

Answer 23

Faire une incise sur des brins homologues de même polarité

Question 24

RuvC incise tout de même à un site spécifique qui se retrouve tous les 64 Pbs, lequel?

Answer 24

5’-(A/T)-TT-(G/C)-3’

Question 25

Qu’est-ce que cette coupe spécifique par RuvC assure avant la résolution des jonctions de Holliday?

Answer 25

Une élongation minimale des brins

Question 26

Chez les eucaryotes, à quel stade doit se passer la recombinaison ?

Answer 26

Au stade 2X2N, soit avant la 1ère méiose

Question 27

Les 2 étapes à la recombinaison méiotique, ainsi que le résultat final?

Answer 27

1ère division de méiose: Les chromatides soeurs sont appariées
2e division de méiose: Les chromatides soeurs se séparent
Résultat final: 4 gamètes haploïdes

Question 28

Qu’arrive-t-il en absence de recombinaison ?

Answer 28

Les chromosomes sont sur/sous-représentés = faible fertilité

Question 29

Qu’est-ce qui provoque des cassures double brins programmées et comment ?

Answer 29

SPO11 qui est activée spécifiquement pendant la méiose et fait des cassures double brins à des régions peu spécifiques, mais en dehors des nucléosomes

Question 30

Vrai ou faux, SPO11 est activée à un moment très précis ?

Answer 30

vrai, au début de l’appariement des chromosomes homologues

Question 31

Comment font les 2 S.U. SPO11 pour faire une cassure double brins ?

Answer 31

Elles utilisent chacune une tyrosine sur un nucléotide pour briser le pont phosphodiester en formant une liaison covalente protéine-ADN

Question 32

Une fois que SPO11 a fait ses coupures, qui est recruté ?

Answer 32

MRX, analogue à RecBCD chez E.Coli (génère 2 extrémités simple brin grâce à des nucléase)

Question 33

Où agît MRX exclusivement ?

Answer 33

Sur l’extrémité 5’ formé par SPO11, 3’-OH n’est pas dégradé.

La digestion est donc 5’ vers 3’

Question 34

Où et comment interagissent les analogues a RecA, Dmc1 et Rad51 ?

Answer 34

• Dmc1: Seulement pendant la méiose, favorise la recombinaison inter-homologues et assiste l’appariement des chromosomes avant la 1ère méiose
• Rad51: pendant la méiose et la mitose, assiste l’appariement des chromosomes avant la 1ère méiose