Chapitre 7 : Maturation des ARNm et autres ARN Flashcards
Vrai ou faux : La traduction commence avant même la fin de la traduction?
Vrai
Chez les eucaryotes, qu’arrive-t-il si les ARNm sont mal épissés?
Ils sont dégradés
Quels sont les 3 processus qui ont lieu dans le noyau au fur et à mesure que le transcrit primaire est produit par l’ARN pol II?
1) Ajout rapide de la coiffe en 5’ du transit
2) Épissage des exons
3) Clivage et polyadénylation de l’extrémité 3’ à la fin de la transcription
Qui est responsable de coordonner les 3 processus entre eux et avec la transcription?
La queue CTD
Vrai ou faux : la queue CTD est très longue proportionnellement à pol?
Vrai
Pour que l’association des facteurs de transcription au domaine CTD se fasse, le CTD doit être…?
Phosphorylé
Qu’est-ce que la coiffe en 5’?
C’est une 7-méthylguanylate ajoutée au transcrit initial lorsqu’il atteint 25-30 nt
Quelles sont les trois étapes de la réaction faisant une coiffe?
1) Une phosphate retire le phosphate y du premier nt transcrit
2) Une guanylyltransférase ajoute un GMP en liaison inverse (5’-5’ avec un pont 3P)
3) Une méthylase ajoute un groupement CH3 sur la guanosine et parfois sur les sucres des nt adjacents (CH3 en 2’ proche phosphodiester pas reconnu par endonucléase)
Quelles sont les fonctions de la coiffe?
Elle distingue les ARNm et les protègent contre la dégradation par les exonucléases
À quoi la coiffe s’unit et qu’est-ce que ça fait?
Elle s’unit au CBC et ça facilite la maturation correct de l’ARNm et son transport à travers le pore nucléaire
Que fait la coiffe dans la transcription?
Elle peut recruter les facteurs de transcription pour accélérer la transcription suivante
Que fait la coiffe dans l’épissage?
Elle apporte l’ARN et les protéines nécessaires pour commencer l’épissage dès que la synthèse des premiers introns et exons ont fini de transcrire
Que fait la coiffe avec les pré-ARN?
Elle accélère l’ajout de poly-A
Que fait la coiffe avec pioneer?
Elle va recruter les protéines qui vont faire le contrôle de qualité de l’ARNm
Que fait la coiffe avec miARN?
Elle lui permet d’inhiber les gènes qui vont être complémentaires à leur séquence
Chez les eucaryotes, que fait la queue poly-A?
Elle protège contre la dégradation par les exonucléases et permet l’exportation du noyau vers le cytoplasme
Que se passe-t-il si la séquence poly-A est mutée?
La polyadénylation d’un transcrit est grandement réduite
Où se trouve le site de clivage?
Entre la séquence poly-A et la région riche en GU ou U
Quel est le mécanisme de polyadénylation en 3’?
1) CPSF lie le transcrit primaire sur la séquence poly-A
2) CStF se lie avec la région riche en GU ou U et interagit avec GPSF (induit la formation d’une boucle dans le transcrit)
3) CFI et CFII se lient au complexe et le stabilise
Qu’est-ce que l’enzyme PAP?
Poly-A / Polymérase
Que fait PAP?
Elle stimule le clivage
Qu’est-ce que la présence de PAP assure?
Que le transcrit sera rapidement polyadénylé après le clivage (et donc protégé)
Quels enzymes effectue le clivage proprement dit?
CFI et CFII
Pourquoi, une fois le clivage effectué, le fragment résiduel d’ARN est rapidement dégradé?
Il est dégradé par le modèle torpedo
Une fois l’extrémité 3’ libre, que fait PAP?
Elle y ajoute une douzaine d’A
Lors de la polyadénylation en 3’, que fait le fragment poly-A initial?
Il recrute PABPII
Lors de la polyadénylation en 3’, que fait la présence de PAPII?
Elle accélère la réaction de polyadénylation par PAP et lorsque la queue poly-A atteint 200-250 ntp, elle signale l’arrêt de la réaction
Quand peut débuter l’épissage des exons?
Dès que le premier intron a complètement émergé de la polymérase (se produit souvent après la fin de la transcription)
Que sont les jonctions intron-exon?
Des motifs moyennement conservés de chaque côté des site d’épissage
Combien de nt à chaque bout des introns sont nécessaire pour permettre l’épissage?
30-40
Qu’est-ce qu’une liaison de transestérification?
Changer les liaisons phosphodiesters
Quelles sont les deux réactions de transestérification pour enlever un intron?
1) 2’-OH de l’A du site de branchement attaque le groupement phosphoryle du G et 5’ de l’intron (formation de la liaison phosphodiester)
2) 3’-OH de l’exon 1 attaque le gr. phosphoryle au site d’épissage 3’ de l’intron : 2 exons se lient ensemble et l’intron est libéré
Qu’est-ce que le spliceosome?
C’est une machinerie protéique complexe faisant un complexe d’épissage et nécessaire pour faire les réactions de transestérification
Quels sont les 3 rôles du spliceosome?
1) Reconnaître les sites d’épissage
2) Rapprocher les sites
3) Réactions de clivage et de ligation
Que font les 5 snARN (U1, U2, U4, U5 et U6)?
Ils participent directement à l’épissage des pré-ARNm
Chacun des snARN s’associe à 6-10 protéines nucléaires pour former des snRNP
Comment les snARN dictent l’assemblage du spliceosome?
Par appariement des bases
Lors de l’assemblage du complexe d’épissage, que font U1 et U6?
Ils s’associent par appariement des bases au site d’épissage en 5’ de l’intron
Lors de l’assemblage du complexe d’épissage, que fait U2?
Il s’associe au site de branchement
Lors de l’assemblage du complexe d’épissage, que font les protéines auxiliaires (non-snRNP)?
Elles interagissent avec l’ARNm selon le séquence
Quelles sont les 3 premières étapes de l’assemblage du complexe d’épissage?
1) Site d’épissage 5’ est reconnu par snARN U1 et protéine aux. U2AF lie la zone polypyrimidine près du site d’épissage 3’ (permet à BBP de lier le site d’embranchement (A))
2) snRNP/U2 déplace BBP et lie le site d’embranchement. Le A ressort du brin
3) snRNP/U4 et U6 sont déjà assemblées et lient snRNP/U5. Elles créent ensuite un complexe avec U1 et U2
Quelles sont les 3 dernières étapes de l’assemblage du complexe d’épissage?
4) Après formation complexe épissage, reconfiguration extensive des appariements de base libère snRNP U1 et U4
5) Complexe est catalytiquement actif et induit première réaction de transestérification (forme lien 2’-5’ entre sucre du A de séquence de branchement et le phosphate du G en 5’ de l’intron)
6) snRNP U5 termine rapprochement deux introns et induit 2e réaction de transestérification
Que fait l’altération de l’appariement des bases entre U1 et le pré-ARNm?
Inhibe l’épissage
Qu’arrive-t-il lorsque le nt A responsable de la formation du lasso ne s’apparie pas avec l’ARN U2?
Il est exposé par la liaison U2 sur le pré-ARNm
Quelles protéines sont nécessaires pour la reconnaissance des jonctions intron-exon?
SR et U2AF
Que font les protéines SR?
Elles interagissent avec les exons sur des séquences amplificatrices d’épissage (ESE)
Elles peuvent aussi faire des liaisons prot-prot et leur présence sur les exons favorise la formation du spliceosome
Que fait la protéine U2AF?
Elle lie l’ARN et aide la liaison de U2 au point de branchement