Chapitre 4 - La chromatographie (1-10)

Question 1

Qu’est-ce que la chromatographie ?

Answer 1

La chromatographie est une technique de séparation des substances qui repose sur des différences de comportement entre une phase mobile (liquide ou gazeuse) et une phase stationnaire (solide ou liquide) des constituants d’un mélange.

Question 2

Quels sont les paramètres fondamentaux de la chromatographie ?

À quoi sont liés ces paramètres

Answer 2

Les paramètres fondamentaux de la chromatographie sont :

• le paramètre de séparation, qui est lié à la résolution
• le paramètre de détection, qui est lié à la sensibilité

Question 3

Quels types de combinaisons peuvent exister entre phase mobile et phase stationnaire ?

Answer 3

Les combinaisons possibles entre phase mobile et phase stationnaire incluent :

• les systèmes liquide/solide comme dans :
  1. la chromatographie ionique
  2. la chromatographie d’adsorption
  3. la chromatographie d’affinité
  4. la chromatographie de perméation de gel
• les systèmes liquide/liquide comme dans la chromatographie de phase greffée en phase inverse
• les systèmes gaz/solide comme dans la chromatographie en phase gazeuse

Question 4

Comment la taille des particules influence-t-elle la chromatographie ?

Answer 4

En chromatographie, lorsque la taille des particules diminue :

• le nombre de plateaux théoriques (N) augmente, ce qui améliore la résolution
• le temps de rétention des molécules reste inchangé

Question 5

En chromatographie, que représente le temps de rétention ?

De quoi dépend le temps de rétention ?

Answer 5

En chromatographie, le temps de rétention correspond au temps pendant lequel une molécule reste dans la colonne.

Plus une molécule a une affinité élevée avec la phase stationnaire, plus son temps de rétention est long.

Question 6

Quels sont les différents supports chromatographiques utilisés en chromatographie liquide ?

Answer 6

Les supports chromatographiques utilisés en chromatographie liquide sont :

• les colonnes ouvertes
• les papiers ou couches minces (CCM)
• les systèmes HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
• les systèmes FPLC (Fast Performance Liquid Chromatography)

Question 7

Qu’est-ce que la chromatographie en colonne ouverte ?

Answer 7

La chromatographie en colonne ouverte est une technique de chromatographie au cours de laquelle :

• l’éluant est versé comme phase mobile
• les échantillons sont collectés à la sortie de la colonne
• la séparation des ions se fait en fonction de leur ordre de sortie et dépend des interactions qu’ils ont avec la phase stationnaire

Question 8

Qu’est-ce que la chromatographie sur papier ou couche mince (CCM) ?

Comment fonctionne-t-elle ?

Answer 8

La chromatographie sur papier ou couche mince est une technique de chromatographie au cours e laquelle le solvant migre par capillarité sur un support pouvant être une plaque de silice ou de papier.

Cette tecnhiqie entraîne la séparation des substances contenues dans le solvant et propose 4 modes de révélation incluant :
1. la colorimétrie
2. l’autographie
3. les UV
4. la fluorescence

Question 9

Comment fonctionne le système HPLC ?

Answer 9

Le système HPLC :

1. fonctionne à haute pression et à haute résolution
2. utilise des solvants comme phase mobile liquide
3. peut fonctionner soit :

• en conditions isocratiques (concentration constante)
• en gradient (variation progressive des solvants)

4. collecte les échantillons par fraction après détection

Question 10

Qu’est-ce que le système FPLC ?

Answer 10

Le système FPLC est une technique de chromatographie qui est :

• automatisé
• fonctionne à basse pression
• utilisé pour purifier des protéines actives dans des conditions douces afin de préserver leur fonctionnalité