bloc 3 Flashcards
Différences entre la réplication chez les procaryotes et eucaryotes
- Période de réplication durant le cycle cellulaire
- Nature des protéines de réplication
- Nombre de réplicons
- Régulation de l’initiation de la réplication
- Le problème de la réplication des extrémités des chromosomes linéaires
les phases S et M sont des points de contrôle importants du cycle cellulaire
• C’est à l’un de ces points que le cycle cellulaire s’arrête si ____ ou _____
les gènes critiques intervenant dans le contrôle du cycle cellulaire sont mutés ou
si l’ADN est très endommagé
Les ADN polymérases δ et ε possèdent ______ qui a pour rôle de _____
une protéine accessoire (PCNA)
retenir l’enzyme sur la matrice
Puisque le complexe Pol α/ primase est peu processif, il ne peut allonger l’amorce qu’il synthétise que d’environ 30 nt d’ADN
Ce complexe doit donc être remplacé par
l’ADN polymérase δ ou ε
Les ADN polymérases eucaryotiques ne possèdent pas d’activité exonucléase ___
• Par conséquent, elles ne peuvent ______
• Deux enzymes, _____ enleve les amorces
5 prim 3 prim
enlever les amorces d’ARN
RNAse H et FEN-1 (flap endonucléase), enlèvent ces amorces
L’initiation de la réplication chez les eucaryotes comporte deux étapes qui ont lieu à des temps différents dans le cycle cellulaire
- La sélection des origines durant la phase G1 (avant la phase S)
Cette étape mène à la formation d’un complexe préréplicatif (pré-RC) à chaque origine - L’activation des origines durant la phase S
Le complexe pré-RC déjà associé à l’origine est amené à initier la réplication
Formation du complexe pré-RC durant la phase G1
- D’abord le complexe ORC (origin recognition complex), formé de six protéines, s’associe avec l’origine. En fait, ORC (l’équivalent de DnaA de E. coli) demeure associé à l’origine durant tout le cycle cellulaire
- Une fois lié, ORC recrute deux chargeurs d’hélicase, Cdc6 et Cdt1
- Ensuite, le complexe Mcm2-7, qui est probablement l’hélicase fonctionnant à la fourche de réplication, est recruté
- Au terme de cette étape, il n’y a ni séparation des brins, ni recrutement d’ADN polymérases
L’activation des pré-RC durant la phase S conduit à l’assemblage des fourches de réplication :
Les pré-RC sont activés par deux protéines kinases, Cdk et Ddk (inactives en G1)
• Ces kinases phosphorylent les pré-RC et d’autres protéines de réplication, ce qui conduit à l’assemblage de protéines de réplication additionnelles (incluant les trois ADN polymérases et autres protéines nécessaires à leur recrutement et à l’initiation de la réplication). Pol δ et ε s’associent avant Pol α/primase
• Seulement une partie des protéines assemblées deviendront des composantes du réplisome Cdc6 et Cdt1 sont libérées ou dégradées
( VOIR PETITE ANIMATION )
Les Cdks jouent deux rôles apparemment contradictoires :
- Une forte activité Cdk est requise pour activer les pré-RC existants
- Une forte activité Cdk inhibe la formation de nouveaux
pré-RC
Après le passage de la fourche de réplication, des facteurs protéiques appelés ____ escortent les tétramères H3-H4 libres (______) et les dimères H2A- H2B (___) vers les sites d’ADN nouvellement synthétisé
• Ces facteurs transfèrent les histones à l’ADN
• Pour que les facteurs CAF-1 puissent diriger l’assemblage des nucléosomes, l’ADN-cible doit être ____. Ces facteurs s’associent avec ____.
chaperones des histones (CAF-1 et RCAF) NAP-1 en cours de réplication le PCNA
C. La transcriptase réverse
• Cette enzyme possède une activité ADN polymérase dépendante de ___
• Cette dernière activité permet la synthèse d’ADN dans le sens ___ en utilisant une matrice d’ARN avec amorce
• On trouve les transcriptases réverses dans les rétrovirus, des virus eucaryotiques dont le génome est sous forme ____
• Grâce à la transcriptase réverse, le génome des rétrovirus peut être converti en___
l’ARN
5’→3’
d’ARN simple-brin
ADN double-brin
La transcriptase réverse utilise ses trois activités enzymatiques pour convertir le génome d’un rétrovirus en ADN double-brin
- rna-directed DNA POL
- RNase H
- DNA directed DNA POL
La transcriptase réverse ne possède pas de fonction exonucléase de correction (___)
• Elle fait donc des erreurs
• Ceci explique ____
3’→5’
la capacité d’évolution très grande des rétrovirus, de même que la difficulté de mettre au point une thérapie anti-VIH efficace sur des temps assez longs
La réplication des extrémités des chromosomes linéaires soulève une difficulté
• ____
• Pourquoi ?
L’extrémité 5’ du brin retardé ne peut pas être complètement répliquée
La dernière amorce d’ARN à l’extrémité 5’ de ce brin ne peut pas être remplacée par de l’ADN
Les séquences des télomères contiennent de nombreuses répétitions en tandem d’une courte séquence
• Bien que ces séquences répétées varient selon l’espèce, l’unité de répétition suit le patron
5’-T1-4A0-1G1-8-3’ pour la plupart des espèces
Nombre de copies de la répétition dans l’ADN télomérique
• Le nombre de copies est variable selon l’espèce
• Chez une même espèce, le nombre de copies varie d’un chromosome à l’autre. De plus, le même chromosome provenant de différents tissus peut montrer un nombre variable de copies
• Dans les cellules somatiques de l’Homme, on trouve 500 à 3000 répétitions TTAGGG. On verra plus loin que leur nombre diminue avec l’âge
A SAVOIR COMME
À leur extrémité 3’, les télomères portent une extension simple-brin qui est
riche en G
Chez l’Humain, les télomères sont protégés par un complexe de six protéines appelé ___
Pourquoi est-il important que les extrémités des chromosomes soient ainsi coiffées ?
Shelterine ( tin2 , trf1, TPP1, POT1, TRF2/RAP1 )
Si elles ne le sont pas, les extrémités sont identifiées comme de l’ADN endommagé et soumises à la réparation d’ADN
Les bases G dans les séquences simple-brin de télomères s’associent pour former des ___
• C’est le 1er G qui est inclus dans le quartette
• Puisqu’il y a plus d’un G dans une répétition, plus d’un quartette pourrait être formé si d’autres G s’associent
quartettes de G
L’ADN simple-brin envahit la région bicaténaire, en formant une _____ET ____ .
double hélice avec le brin complémentaire et en déplaçant l’autre brin
Les protéines ____ des complexes Shelterine induisent le repliement des télomères
TRF1 et TRF2
Le problème du raccourcissement des extrémités de chromosomes est solutionné par
la synthèse des télomères par la télomérase
La majorité de l’ADN télomérique est synthétisé de manière normale durant la réplication de l’ADN
• Cependant, les télomères peuvent être allongés par un mécanisme de synthèse indépendant qui est catalysé par la télomérase
• La télomérase de Tetrahymena ajoute des répétitions en tandem de TTGGGG à l’extrémité 3’-OH de n’importe quel oligonucléotide télomérique riche en G, en l’absence de toute matrice
savoir.
La télomérase est une _____
• Elle fonctionne comme une ____
• La composante protéique de la télomérase fournit ____, tandis que la composante d’ARN sert de _____ .
• Chez Tetrahymena, la composante d’ARN contient 159 nt, incluant 15-22 bases qui sont complémentaires au brin riche en G dont elle dirige la synthèse. Seulement du dGTP et du TTP sont requis pour cette synthèse
ribonucléoprotéine
transcriptase réverse
l’activité catalytique de la transcriptase réverse
matrice pour chaque étape d’élongation
La télomérase synthétise les répétitions individuelles qui sont ajoutées aux extrémités des chromosomes, mais ne contrôle pas leur nombre
_____ jouent ce rôle
• Les protéines liant les télomères
Modèle de la régulation de la longueur des télomères.
_____ agissent comme inhibiteurs faibles de la télomérase
Le nombre de protéines liant les télomères dépend de ___. Lorsque le nombre de copies est élevé, l’extrémité 3’ des télomères ___.
Les protéines liant la partie bicaténaire des télomères ou les protéines les liant
la longueur des télomères.
n’est pas accessible à la télomérase
Chez les mammifères, l’ADN mitochondrial (15 kb) est répliqué en formant des ___
• Les origines pour répliquer les brins complémentaires ne sont pas situées au même locus et ne sont pas activées simultanément. L’origine sur le brin __ est d’abord activée
• ___ nouvellement synthétisé déplace le brin L parental, ce qui forme__
Après avoir parcouru une distance équivalente au___ , la polymérase atteint l’origine sur le brin L; la synthèse du brin H est alors amorcée
• Lorsque la synthèse du brin L est complétée, celle du brin H n’est complétée qu’au tiers
Boucle D H ( DEDANS ) Le brin L une boucle par déplacement ou boucle D 2/3 du génome
Les mutations peuvent être causées par :
-des facteurs environnementaux tels que les radiations
(UV et ionisantes) et agents mutagènes
– le métabolisme oxydatif qui génère des espèces d’oxygène réactives (radicaux hydroxyle, superoxyde, peroxyde)
– des réactions spontanées via l’action de l’eau (dépurination et désamination)
- mutation spontanées : réaction de méthylation non enzymatique des bases par la S-adénosylméthionine présente dans les cellules .
• Les mutations apparaissent également suite à des erreurs de réplication
Les radiations ionisantes (rayons X et γ) peuvent causer des____ .
• Les radiations ionisantes provoquent ces cassures en s’attaquant directement au ___ ou en ______ .
• Si les extrémités associées aux cassures double-brin ne sont pas reliées correctement, il en résultera des ___.
• Parce que les cellules ont besoin de chromosomes intacts pour répliquer leur ADN, on utilise les radiations ionisantes pour tuer rapidement les cellules cancéreuses. Certains agents chimiothérapeutiques, tel que la bléomycine, causent des cassures double-brin dans l’ADN
- cassures double-brin dans l’ADN
-désoxyribose
-générant des espèces d’oxygène réactives, qui réagissent à leur tour avec le désoxyribose
réarrangements chromosomiques et des translocations
La guanine peut être oxydée suite à l’attaque par des ___.
• Cette réaction d’oxydation génère ___, une base mutagène qui peut s’apparier aussi bien à ___.
• Si l’oxoG s’apparie à l’adénine durant la réplication, une transversion G•C -> T•A apparaîtra. Il s’agit d’une des mutations les plus communes chez les cancers humains
espèces d’oxygène réactives
l’oxoG
l’adénine qu’à la cytosine
L’ADN peut être endommagé par des réactions d’hydrolyse spontanées
a) La désamination de la cytosine génère l’uracile
b) La dépurination via l’hydrolyse du lien N-glycosyl produit un site abasique (i.e. un désoxyribose sans base)
c) La désamination de la 5-méthylcytosine génère une base naturelle, la thymine
d ) désamination : Adénine désaminée va donner hypoxanthine , qui sapparie avec C ( TRANSITION )
GUANINE , désaminée va donner xanthine ( pas de mutation )
La plupart des cellules possèdent au moins quatre types différents de système de réparation
- Systèmes de réparation directe
- Systèmes de réparation par excision
a) excision de nucléotides (NER) b) excision de bases (BER) - Systèmes de réparation de bases mésappariées
- Système de « réparation » par recombinaison, aussi appelé système de réparation de cassures bicaténaires
En plus de ces systèmes, E. coli et les eucaryotes possèdent des systèmes de réparation qui sont sujets à erreurs
• E. coli possède un système de réparation qui est induit par la réponse SOS. Ce système utilise une ADN polymérase qui ne fait pas partie de la machinerie de réplication normale pour répliquer le site d’ADN endommagé
• Les eucaryotes utilisent également des ADN polymérases distinctes pour répliquer les sites d’ADN endommagé
• Chez les eucaryotes, les cassures double-brin peuvent être réparés par le mécanisme ______
NHEJ
A REVOIR DIAPO 18 A LA FIN.
OK.
Les systèmes de réparation directe agissent directement sur les nucléotides endommagés par ___ pour les convertir à leur structure originale
l’irradiation UV ou les agents alkylants
Les dimères de pyrimidines peuvent être éliminés par ____
l’ADN photolyase ( NOUS ON A PU CA )
la lumiere bleue active lenzyme .
_____ désalkylent les nucléotides alkylés
• Les sites d’attaque les plus fréquents des agents alkylants sur l’ADN sont _________
• D’autres sites peuvent aussi être alkylés (en bleu)
Les alkyltransférases ( capab enlever ethyl et methyl )
groupes phosphate, N7 de la guanine et N3 de l’adénine (en rouge)
Les conséquences de l’alkylation de l’ADN dépendent ____
des sites qui sont touchés
Le dérivé O6-éthylguanine formé par___ s’apparie avec la thymine, causant ainsi le remplacement de G•C par A•T (transition)
l’éthyl méthane sulfonate (EMS)
Les lésions de l’ADN sous forme O6-alkylguanine sont directement réparées par une ___
Cette protéine transfère directement le groupement alkyle sur l’un de ses résidus __, causant ainsi son inactivation irréversible
• Étant donné qu’elle ___, cette protéine ne peut être considérée comme une enzyme
• Les protéines de ce type incluent la protéine __ de E. coli
O6-méthylguanine-ADN méthyltransférase
Cys
ne peut être régénérée
Ada
La protéine Ada d’E. coli a deux fonctions
Le segment C-terminal contient la fonction___ .
Le segment N-terminal assure la fonction _____ .
O6-méthylguanine- ADN méthyltransférase
de réparation des groupements phosphate méthylés
Dans le génome humain, un seul gène spécifie une protéine participant à la réparation directe
•
Cette protéine est la MGMT (06-méthylguanine-ADN méthyltransférase)
D1. La réparation par excision de nucléotides (NER)
• Ce système permet d’éliminer __ et aussi les lésions dues à ____.
• Le système NER procure donc aux organismes qui ne possèdent pas le système de photoréactivation un moyen de réparer les dimères de pyrimidines
• Il existe deux sentiers NER: 1)____ et 2) ____
- les dimères de pyrimidines
- l’addition d’un groupement volumineux sur une base
- sentier agissant sur le génome global (GGR, pour Global Genome Repair)
-sentier agissant sur les gènes transcrits (TCR, pour Transcription-Coupled Repair)
Chez E. coli, la voie NER fait intervenir les protéines ___
• De chaque coté de la lésion, ___ ,
le brin d’ADN est coupé et un oligonucléotide de 12 ou 13 bases est libéré
• La brèche résultante est comblée par Pol I et l’ADN ligase
Uvr (UvrA, B, C et D)
aux positions -8 et +4 ou 5
VOIR ANIMATION DES RÉPARATION ??? ( PAGE 28 )
OK
La maladie Xeroderma pigmentosum (XP) est due à une __ génétiquement défectueuse
NER
Les expériences de fusions cellulaires entre cellules provenant de différents patients XP ont montré qu’il y a 7 groupes de complémentation. Donc, au moins 7 produits de gènes différents (XPA-XPG) sont impliqués dans la voie de réparation des lésions UV. Deux d’entre eux, XPB ? et XPD, sont des sous-unités de TFIIH
OK??.
Le sytème NER des eucaryotes diffère de celui des bactéries
• Le mécanisme ressemble beaucoup à celui des bactéries mais la machinerie est plus complexe (plus de 25 polypeptides) et aucune des protéines n’est similaire aux protéines bactériennes (évolution convergente)
• Le mécanisme fait intervenir 2 sous-unités du facteur général de la transcription TFIIH, XPB et XPD. Ces protéines ont une activité hélicase
• Deux endonucléases distinctes introduisent les coupures simple brin
• Le segment d’ADN libéré comprend 24-32 nt comparativement à 12-13 nt chez les bactéries)
ok
VOIR DIAPO 32.
ok
L’étude du syndrome de Cockayne (SC) a montré que
le système de réparation NER est couplé à la transcription
Les personnes atteintes de SC sont défectives en un type de réparation NER qui est couplé à la transcription. Chez les personnes normales, les dimères de pyrimidines sont
Les gènes codant pour CSA et CSB sont associés à SC. Ces protéines participent à ___. Elles reconnaissent une ARN polymérase qui s’est arrêtée de transcrire un gène dû à la présence de nucléotides endommagés sur le brin d’ADN matrice
plus efficacement excisés des gènes transcrits que des séquences non-exprimées, tandis que chez les personnes atteintes, ils ne sont pas excisés des gènes transcrits
la reconnaissance des lésions dans les gènes transcrits
Lorsqu’une ARN polymérase rencontre une lésion dans l’ADN, elle tombe en panne et la transcription s’arrête
• Chez E. coli, la protéine __ liant l’ADN reconnaît l’ARN polymérase en détresse. Les protéines eucaryotiques analogues, ___, appartiennent à la famille SWI/SNF des enzymes de remodelage des nucléosomes
• Ces protéines aident à ____.
• Ce processus explique pourquoi___.
- Mdf
- Rad26 (levure) et CSB (Homme)
- recruter les protéines de réparation du système NER au site de la lésion et à dissocier l’ARN polymérase de l’ADN
- l’ADN endommagé est réparé plus rapidement dans les régions activement transcrites que dans les régions non-transcrites
La réparation par excision des bases (BER)
Ce système de réparation enlève les____ .
Ce système peut aussi enlever une base normale dans certaines paires de bases mésappriées (T•G ou A•oxoG) afin de prévenir l’apparition de mutations (système de sécurité ou système « fail-safe »)
De plus, il sert à réparer les sites abasiques
bases anormales ou chimiquement modifiées, en particulier celles qui présentent des changements subtils (bases modifiées par l’ajout ou l’enlèvement d’un groupement peu volumineux ou l’ouverture du cycle des bases) par rapport aux bases normales
Les ADN glycosylases____.
L’ADN glycosylase clive le lien ___, créant ainsi un site apurinique ou apyrimidinique (sites AP)
Notez qu’un site AP peut être formé dans les conditions physiologiques normales par ____.
enlèvent les bases altérées
glycosidique entre la base altérée et son sucre
l’hydrolyse spontanée d’une liaison glycosidique
On retrouve au moins _ glycosylases chez l’Homme
8
Mécanisme de la BER
- La glycosylase excise la base altérée
- Le résidu désoxyribose au site AP est coupé du côté 5’ par une endonucléase AP et une ADN phosphodiestérase enlève le désoxyribose phosphate au site AP
- L’ADN polymérase (Pol I chez E. coli et Pol β chez les mammifères) remplace le nucléotide manquant sur le brin complémentaire
- L’ADN ligase soude la cassure simple-brin
Comment les ADN glycosylases repèrent-elles les bases altérées ?
Comment agissent-elles sur les bases ?
Elles font pivoter la base altérée vers l’extérieur de la double hélice pour la placer dans leur site actif
___. de E. coli participe à la réparation BER de l’ADN
Cette enzyme monomérique de 211 aa a 2 fonctions enzymatiques :
L’endonucléase III
(a) ADN glycosylase reconnaissant les pyrimidines oxydées
(b) endonucléase AP
Fonctions de ___
• Cette enzyme excise les U présents dans l’ADN sous forme de paires U•G; ces U sont remplacés par C via la voie BER
aussi une fonction importante au cours de la réplication de l’ADN. Elle élimine les U qui se retrouvent parfois dans les ADN néosynthétisés suite à l’incorporation de dUTP par l’ADN polymérase au lieu de dTTP. Les U sont remplacés par T via la voie BER
l’uracile N-glycosylase
la cytosine avait tendance à se convertir en uracile par ___
désamination
Une glycosylase répare le mésappariement T•G
Comment la cellule reconnaît-elle la base incorrecte ?
Le système de glycosylase assume qu’un T dans la paire T•G provient de ___ et enlève sélectivement le T qui est alors remplacé par un C
la désamination de la 5-méthyl-cytosine
Une ADN glycosylase reconnaissant oxoG•A fournit un système de sécurité
Après son apparition, la base modifiée oxoG peut être éliminée par la voie BER avant la réplication ; sinon, un A pourra être incorrectement incorporé en face de cette base modifiée durant la réplication. Une glycosylase « fail-safe » pourra alors enlever le A (une base normale), permettant ainsi de le remplacer par un C. Une glycosylase éliminera éventuellement oxoG
ok
La réparation des mésappariements
• Ce système, présent chez les bactéries et les eucaryotes, élimine les bases mésappariées qui n’ont pas été enlevées par l’ADN polymérase au cours de la réplication. Il élimine aussi les petites insertions et délétions
• À l’exception de G•T, les paires de bases mésappariées ne peuvent pas être éliminées par les systèmes de réparation décrits précédemment parce les bases qu’elles contiennent sont normales
• Le système de réparation des mésappariements doit détecter _____ ; ensuite il excise une partie de la chaîne-fille et comble le trou résultant
l’absence d’appariement entre la chaîne parentale et la chaîne-fille
____ ( 3 prot ) de E. coli participent à la réparation des mésappariements
MutH, MutL et MutS
Notez que la séquence GATC se retrouve à toutes les __ en moyenne sur le génome de E. coli
250 pb
RÉPARATION DES MESAPPARIEMENTS CHEZ E COLI .
___ reconnaît la base mésappariée et ____. ___ est un endonucléase latente se liant spécifiquement aux séquences GATC ____.
• La complexe formé de MutL et MutS s’associe avec une protéine MutH voisine, ce qui____.
• MutH coupe la chaîne-fille (non méthylée) dans la séquence GATC. Le site d’incision peut être à___ ou plus du mésappariement, soit en 5’ ou en 3’
• Un segment de la chaîne-fille situé entre la coupure et le mésappariement est excisé et remplacé par la séquence correcte
MutS recrute MutL MutH hémiméthylées active la fonction endonucléase de MutH 1000 nt
Des homologues de MutS __ et MutL ___) ont été identifiés dans les cellules humaines et chez la levure
(MSH)
(MLH et PMS
La réparation par recombinaison homologue
• Ce système est utilisé pour réparer ____
• Ce système ne peut être activé que lorsqu’une _____ .
• Seules les cassures d’ADN peuvent être éliminées par ce système et ce sans introduire d’erreurs. Pour les autres types de lésions, le système de réparation par recombinaison est plutôt un mécanisme de tolérance aux dommages causés à l’ADN
les cassures bicaténaires provoquées par des agents exogènes (comme les radiations ionisantes) ou par des fourches de réplication bloquées par une lésion d’ADN
copie homologue à la région de l’ADN endommagé peut être récupérée sur un chromosome nouvellement synthétisé ou en cours de synthèse (fin de la phase S ou G2)
La voie de réparation des cassures bicaténaires est étroitement reliée à la recombinaison homologue
• Chez E. coli, cette voie de réparation utilise __, une protéine capable de provoquer l’échange de brins frères de même polarité entre segments d’ADN homologues
• Les mutants recA- de E. coli sont à la fois déficients pour la réparation par recombinaison et pour la recombinaison génétique
RecA
La réparation de cassures double-brin par recombinaison homologue chez les humains
rad brca etc. VOIR VIDEO OK.
Protéines participant à la voie de réparation des cassures double-brin par recombinaison homologue (voir fig. précédente)
• Le complexe__ se lie avec l’ADN de chaque côté de la cassure. Il contient ____
• Le complexe MRN recrute ____ et d’autres modifications de protéines qui conduisent à la synthèse et au recrutement de gros complexes de protéines de réparation au site de cassure. ATM (pour ataxia telangiectasia-mutated)
• ___, une des premières protéines de réparation recrutées
• BRCA2 interagit avec ___ et probablement recrute cette protéine
• RAD51, l’analogue de RecA, s’associe aux extrémités d’ADN sb pour former des filaments de nucléoprotéines
MRN (senseur)
MRE11, lequel se lie et peut cliver l’ADN, et RAD50, qui est une protéine qui peut également se lier aux extrémités d’ADN cassé, de même que NBS1 (chez les mammifères) et Xrs2 (chez la levure)
la kinase ATM (régulateur), ce qui active son activité kinase et déclenche une cascade de phosphorylations
BRCA1
RAD51
la plupart des femmes qui héritent d’une susceptibilité héréditaire au cancer du sein possèdent une mutation dans un allèle soit du gène ____. La perte ou l’inactivation du second allèle inhibe la voie de réparation par recombinaison et ainsi favorise l’apparition du cancer dans les cellules épithéliales du sein ou des ovaires
BRCA-1 ou de BRCA-2
Si un chromosome non répliqué subit une cassure, il n’y a pas de chromosome frère pouvant servir de matrice pour la voie de réparation par recombinaison homologue. Dans ces conditions, la voie ___ intervient
NHEJ
La réparation des cassures double- brin par le mécanisme NHEJ
L’hétérodimère ___ se lie à chaque extrémité de l’ADN cassé et recrute ___, une protéine kinase qui à son tour forme un complexe avec ___
• Artemis est à la fois une exonucléase 5’→3’ et une endonucléase latente activée par ___ par DNA-PKcs. Ces activités permettent de digérer les extrémités cassées et de les préparer pour la ligature
• Un complexe, composé de____ ligature les extrémités cassées
Ku, formé de Ku70 et Ku80,
DNA-PKcs
Artemis
sa phosphorylation
l’ADN ligase IV, XRCC4 et Cernunnos-XLF
reponse sos.
Les protéines ___ forment Pol V, une polymérase capable de répliquer l’ADN en face d’un dimère de pyrimidines ou d’une base avec un groupement volumineux
• RecA se lie à l’ADN simple-brin dans la région de la lésion, puis le complexe UmuD’2C s’associe à son tour aux protéines RecA ainsi attachées
• Le complexe UmuD’2C, appelé Pol V, réplique l’ADN en face d’un dimère de pyrimidines même si la lecture du brin lésé est impossible. Aucune
brèche n’est laissée, mais des bases incorrectes sont insérées dans l’ADN
UmuC et UmuD’
Lorsque Pol III rencontre une lésion sur la matrice au cours de la réplication, elle se dissocie de l’ADN et est remplacée par une ADN polymérase translésionnelle (Pol IV ou Pol V). Cette dernière ajoute des nt en face du dimère de pyrimidines, puis est remplacée par Pol III
Comment est recrutée la polymérase translésionnelle ?
L’anneau β pourrait jouer un rôle
ok
Régulation des gènes de la réponse SOS : ___ est un répresseur
• L’exposition aux UV ou à un agent mutagène active l’activité coprotéase de RecA. Le signal activant RecA semble associé avec la liaison de cette protéine à l’ADN simple-brin
• La principale cible de la coprotéase RecA est LexA, un répresseur de 43 gènes impliqués dans la réparation et le contrôle de la division cellulaire
• L’activité coprotéase
de RecA stimule l’autoprotéolyse de LexA, ce qui provoque la synthèse des protéines SOS
LexA
P.76 AUPIRE LIMAGE
La réponse à l’ADN endommagé chez les eucaryotes
• Des ADN polymérases translésionnelles sont synthétisées au cours de cette réponse
• La polymérase η (êta) ajoute des nucléotides (normalement 2 A) en face des dimères de pyrimidines
Une variante de la maladie XP est due à un défaut de cette polymérase
• Les polymérases ι (iota) et ζ (dzêta) fonctionnent de concert pour répliquer des matrices contenant des sites AP ou des dimères de pyrimidines
OK
Les régions d’ADN simple brin et les cassures double brin indiquent la présence d’ADN endommagé
• La réponse DDR est stimulée par la liaison de protéines “senseur” (RPA ou MRN) à ces sites
• Au lieu d’agir directement sur la régulation transcriptionnelle des gènes de réparation, les protéines senseurs des eucaryotes recrutent des protéines kinases régulatrices (ATM ou ATR) qui coordonnent une réponse plus complexe
• Les kinases régulatrices phosphorylent et activent les médiateurs, qui lorsque phosphorylés, recrutent des effecteurs, c’est-à-dire des protéines qui réparent l’ADN endommagé , contrôlent le cycle cellulaire, ou entraînent l’apoptose (dans le cas des eucaryotes multicellulaires si les lésions ne sont pas réparées)
OK P 79 - 81
Bruce Ames et coll. ont inventé un test rapide et efficace sur les bactéries, permettant de prévoir l’effet cancérigène
• Ils ont construit des souches de Salmonella thyphimurium portant les caractères suivants :
– différents types de mutations (transitions, transversions et mutations de cadre de lecture) dans les gènes requis pour la biosynthèse de l’histidine (mutants his-)
– une mutation rendant les parois des cellules perméables à de nombreuses substances
– une mutation inactivant le système de réparation par excision
_____ un composé produit par des moisissures proliférant sur les arachides et le maïs, est un des plus puissants agents cancérigènes connus
L’aflatoxine B1,
Une protéine spécifique __, produite au début de la méiose, génére les cassures bicaténaires stimulant la recombinaison
(Spo11)
voir bloc 3 avec les videos…. refaires les questions .
ok
