Biotechnologies microbiennes Flashcards
C’est quoi la biotechnologie?
Les organismes vivants sont manipulés par le biais de la génétique moléculaire
Technologie de l’ADN recombinant?
Méthodes qui permettent la modification délibérée de l’information génétique d’un organisme
Principe du clonage? (2 étapes)
- Le fragment d’ADN à cloner est introduit dans un vecteur de clonage
- Le vecteur recombiné est ensuite introduit dans un organisme hôte ou il va être répliqué
Production d’ADNc utilise quel enzyme?
transcriptase inverse
L’ADN obtenu par synthèse chimique provient de quoi?
Une synthèse chimique automatisée artificielle qui peut être effectuée si on connait la séquence du gène à synthétiser
Étapes du clonage?
- Préparation du vecteur et de l’ADN d’intérêt
- Jusqu’à 2 enzymes de restrictions sont nécessaires pour l’insertion d’un fragment d’ADN
- Construction du vecteur recombinant (vecteur)
- Insertion du plasmide recombinant dans l’organisme hôte
C’est quoi le but de l’étape 4 du clonage?
amplifier chaque ADN recombinant à l’aide de la machinerie bactérienne
l’ADN recombinant ligaturé pénètre dans une cellule bactérienne par ______
transformation
Comment le vecteur plasmidique est capable de se répliquer?
les plasmides possèdent habituellement une origine de réplication
Pourquoi le clonage des gènes exprimés par l’organisme hôte des procaryotes est problématique?
Comment résolver ce problème?
Les organismes procaryotes n’ont pas la machinerie nécessaire pour retirer les introns pendant la maturation de l’ARNm
-Solution : transcriptase inverse
Southern et Northern déterminent si : (2)
- Un individu est porteur du gène ou plus précisément de l’allèle qui aura préalable été cloné
- Déterminer si le gène en question est exprimé sous certaines conditions
Southern?
Détection de fragments d’ADN d’intérêt au travers des nombreux fragments produits par la digestion par l’enzyme de restriction
5 étapes du Southern
- ADN digéré par enzyme de restriction
- ADN est séparé par électrophorèse
- Filtre fixant l’ADN, des serviettes et un poids sont placés sur le gel
- Met le filtre dans un sachet avec solution contenant sonde
- Filtre est lavé pour enlever excès de sonde et placé sur un film pour rayons X pour voir bandes d’ADN
PCR : enzyme?
Taq polymérase
Taq : isolé de quelle bactérie?
Thermus aquaticus
3 étapes du PCR
- Dénaturation à 95°C
- Hybridation : amorces s’hybrident à leurs séquences complémentaires
- Élongation à 72°C : par ADN Pol
4 grandes types de vecteurs de clonage
Plasmides
Vecteurs phagiques
Cosmides
Chromosomes artificiels
Vecteurs phagiques :
Génomes de _____
Le gène cloné peut être introduit à une fréquence ____
Clone des fragments de tailles _____
- phages modifiés génétiquement
- élevée
- définies
Cosmides :
Naturelle ou synthétique?
Leur ADN peut se répliquer dans la cellule comme _____ et empaqueté comme ______
Servent à cloner des fragments de quelle taille?
- Synthétique
- Plasmide
- Phage
- plus de 45kb
Chromosomes artificiels :
clonent fragments de quelle taille?
Très larges
3 régions d’un vecteur de clonage
Origine de réplication
Marqueur de sélection
Multisite de clonage
Origine de réplication permet quoi?
la réplication du plasmide dans la cellule hôte indépendamment du chromosome bactérien
Marqueur de sélection permet quoi?
différencier les cellules qui ont pris le vecteur (cellules transformées) de celles qui ne l’ont pas pris
Multisites de clonage contient quoi? Essentiel à quoi?
Contient sites de restriction qui ne se trouvent qu’une fois dans le vecteur de clonage.
Essentiel à l’insertion d’ADN étranger.
