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Microbiologie Examen 3 > Biotechnologies microbiennes > Flashcards

Biotechnologies microbiennes Flashcards

1
Q

C’est quoi la biotechnologie?

A

Les organismes vivants sont manipulés par le biais de la génétique moléculaire

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Q

Technologie de l’ADN recombinant?

A

Méthodes qui permettent la modification délibérée de l’information génétique d’un organisme

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3
Q

Principe du clonage? (2 étapes)

A
  • Le fragment d’ADN à cloner est introduit dans un vecteur de clonage
  • Le vecteur recombiné est ensuite introduit dans un organisme hôte ou il va être répliqué
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4
Q

Production d’ADNc utilise quel enzyme?

A

transcriptase inverse

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5
Q

L’ADN obtenu par synthèse chimique provient de quoi?

A

Une synthèse chimique automatisée artificielle qui peut être effectuée si on connait la séquence du gène à synthétiser

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6
Q

Étapes du clonage?

A
  1. Préparation du vecteur et de l’ADN d’intérêt
  2. Jusqu’à 2 enzymes de restrictions sont nécessaires pour l’insertion d’un fragment d’ADN
  3. Construction du vecteur recombinant (vecteur)
  4. Insertion du plasmide recombinant dans l’organisme hôte
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7
Q

C’est quoi le but de l’étape 4 du clonage?

A

amplifier chaque ADN recombinant à l’aide de la machinerie bactérienne

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8
Q

l’ADN recombinant ligaturé pénètre dans une cellule bactérienne par ______

A

transformation

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9
Q

Comment le vecteur plasmidique est capable de se répliquer?

A

les plasmides possèdent habituellement une origine de réplication

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10
Q

Pourquoi le clonage des gènes exprimés par l’organisme hôte des procaryotes est problématique?
Comment résolver ce problème?

A

Les organismes procaryotes n’ont pas la machinerie nécessaire pour retirer les introns pendant la maturation de l’ARNm
-Solution : transcriptase inverse

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11
Q

Southern et Northern déterminent si : (2)

A
  • Un individu est porteur du gène ou plus précisément de l’allèle qui aura préalable été cloné
  • Déterminer si le gène en question est exprimé sous certaines conditions
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12
Q

Southern?

A

Détection de fragments d’ADN d’intérêt au travers des nombreux fragments produits par la digestion par l’enzyme de restriction

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13
Q

5 étapes du Southern

A
  1. ADN digéré par enzyme de restriction
  2. ADN est séparé par électrophorèse
  3. Filtre fixant l’ADN, des serviettes et un poids sont placés sur le gel
  4. Met le filtre dans un sachet avec solution contenant sonde
  5. Filtre est lavé pour enlever excès de sonde et placé sur un film pour rayons X pour voir bandes d’ADN
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14
Q

PCR : enzyme?

A

Taq polymérase

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15
Q

Taq : isolé de quelle bactérie?

A

Thermus aquaticus

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16
Q

3 étapes du PCR

A
  1. Dénaturation à 95°C
  2. Hybridation : amorces s’hybrident à leurs séquences complémentaires
  3. Élongation à 72°C : par ADN Pol
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17
Q

4 grandes types de vecteurs de clonage

A

Plasmides
Vecteurs phagiques
Cosmides
Chromosomes artificiels

18
Q

Vecteurs phagiques :
Génomes de _____
Le gène cloné peut être introduit à une fréquence ____
Clone des fragments de tailles _____

A
  • phages modifiés génétiquement
  • élevée
  • définies
19
Q

Cosmides :
Naturelle ou synthétique?
Leur ADN peut se répliquer dans la cellule comme _____ et empaqueté comme ______
Servent à cloner des fragments de quelle taille?

A
  • Synthétique
  • Plasmide
  • Phage
  • plus de 45kb
20
Q

Chromosomes artificiels :

clonent fragments de quelle taille?

A

Très larges

21
Q

3 régions d’un vecteur de clonage

A

Origine de réplication
Marqueur de sélection
Multisite de clonage

22
Q

Origine de réplication permet quoi?

A

la réplication du plasmide dans la cellule hôte indépendamment du chromosome bactérien

23
Q

Marqueur de sélection permet quoi?

A

différencier les cellules qui ont pris le vecteur (cellules transformées) de celles qui ne l’ont pas pris

24
Q

Multisites de clonage contient quoi? Essentiel à quoi?

A

Contient sites de restriction qui ne se trouvent qu’une fois dans le vecteur de clonage.
Essentiel à l’insertion d’ADN étranger.

25
Q

L’insertion d’ADN recombinant se fait par : (2)

A

Transformation

Électroporation

26
Q

Transformation?

A

forcée, cellules rendues compétentes et artificiellement transformées par choc thermique

27
Q

Électroporation?

A

appliquer une brève impulsion électrique qui rend les membranes perméables pour absorber l’ADN étranger

28
Q

Le gène étranger a besoin d’un ____ pour être transcrit?

A

promoteur

29
Q

En plus du promoteur (pour expression du gène étranger, les modifications incluent l’ajoute de _______

A

marqueurs

30
Q

Marqueurs (pour expression des gènes étrangers) permet de faire quoi?

A

purifier ou détecter facilement les protéines recombinantes

31
Q

3 principes du marquage poly-His?

A
  • Ajoute d’une série d’histidines au N ou C-terminale de la protéine
  • Forte affinité pour les résine avec ions métalliques
  • Protéines marquées sont retenues et éluées par la suite pour enlevé le marqueur grâce à une enzyme
32
Q

Fusion transcriptionnelle permet d’étudier quoi?
On remplace le gène dont on veut connaitre la régulation par quel gène?
L’expression de la protéine est sous contrôle du ______

A
  • La régulation d’un gène
  • le gène qui code pour une protéine fluorescente
  • promoteur du gène qu’on veut étudier
33
Q

Fusion transductionnelle : création d”une protéine chimérique comment?

A

Par l’ajout de la séquence du gène qui code pour une protéines fluorescente à celle du gène codant pour la protéine d’intérêt.

34
Q

Système BAC to BAC permet de produite quoi?

A

baculovirus recombinants plus efficacement qu’en partant de virus purifiés puis transformés

35
Q

Le BAC to BAC est utile comme ______

A

insecticide biologique d’insectes nuisibles

36
Q

Édition génomique?

4 types de ciseaux moléculaires?

A

Modification du génome grâce à l’utilisation d’endonucléases

  1. Nucléases à doigt de zinc
  2. Méganucléases
  3. Système CRISPR-cas9
  4. Nucléases effectrices de type activateur de transcription
37
Q

Les ciseaux moléculaires sont toutes _____. Ils incluent ____ et une ____.
Exception?

A
  • artificielles
  • une nucléase qui coupe l’ADN
  • une protéines qui cible une séquence bien précise du génome
  • Méganucléase
38
Q

CRISPR-cas9:
Quelle sorte d’ADN?
Si la cellule rencontre de nouveau un ADN étranger identique …. ?

A
  • ADN viral double-brin intégrés dans des locis particuliers (loci CRISPR)
  • …, l’ADN sera reconnu et détruit par des enzymes
39
Q

CRISrPR-cas9:

formation du complexe?

A

2 courts ARN (crARN et tracrARN) forment un ARN guide. Cette paire forme une complexe avec cas9, une nucléase ARNdépendante

40
Q

TALENs sont des enzymes constitués de la fusion de deux éléments : ?

A
  • Une partie capable de reconnaitre une portion d’ADN spécifique (partie TALE)
  • Une autre capable de couper le brin d’ADN (partie N pour nucléase FokI)
41
Q

Les TALEs sont des protéines découvertes chez quelles bactéries?

A

bactéries phytopathogènes

42
Q

Les TALEs possèdent quelle domaine ?

A

domaine central constitué de répétitions de 34 acides aminés identiques à l’exception des acides aminés 12-13, qui correspondent à un nucléotide précis

Microbiologie Examen 3 (6 decks)

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