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Biotech > Biofilm Chateau > Flashcards

Biofilm Chateau Flashcards

1
Q

Quels produits à utiliser pour une décontamination? (3)

A

par ordre décroissant d’efficacité

  • soude caustique
  • ammoniums quaternaires (biocidal)
  • détergents alcalins
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2
Q

Pourquoi préfère on des mesures d’hygiène préventives?

A
  • il est très difficile d’éliminer un biofilm microbien par les opérations de nettoyage et désinfection classique
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3
Q

Quels produits sont peu ou pas efficaces pour la décontamination? (2)

A
  • les produits à base de chlore (sanibac)

- a base de cétones

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4
Q

Incidences des biofilms?

A

absence d’incidence sanitaire mais conséquence économique possible liée au risque d’altération de la qualité du vin

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5
Q

Quels sont les méthodes de prélevement pour les analyses?

A
  • écouvillonnage (swab/écouvillon)

- wood seeker

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6
Q

L’écouvillonage est pour quels types de matériel de cave? (4)

A
  • chaines d’embouteillage
  • pompes
  • cuves
  • éviers
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7
Q

Wood seeker prélevement (2)

A
  • prélèvement de copeaux

- mis en evidence de brett dans le bois des barriques

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8
Q

quantifiction ATP par bioluinescence (3)

A
  • quantification des cellules viables par ATPmétrie
  • quantité d’ATP est proportionnelle à l’intesité de la lumière émise
  • ATP réagit avec recominant firefly lucerferase et Mg 2+ pour émettre de la lumière
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9
Q

la quantification micro-organismes viables nécessite (2)

A
  • un étalonnage: une gamme de dilution à partir d’une concentration connue d’un micro-organisme test
  • la libération préalable de l’ATP par lyse des cellules
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10
Q

axes d’étalonnage de quantification ATPmétrie

A
  • y : intesnité lumière émise RLU (relative light unit)

- x : concentration en micro organismes CFU (colony formy unit)/ mL

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11
Q

la quantité ATP (lumière émise) est proportionnelle à quoi?

A

au nombre de microorganismes viables constitutifs du biofilm

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12
Q

avantages analyse quantitative directe ATPmétrie (2)

A
  • rapidité

- quantification globale de la contamination

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13
Q

limites analyses quantitative directe ATPmétrie (3)

A
  • absence de spécificité
  • quantité ATP variable selon la nature et l’état physiologique des micro organismes
  • seuil de sensibilité : 10^2 bactéries
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14
Q

Système analyse quantitative directe ATP (6)

A
  • swab
  • snap and squeeze tube
  • insert in systemSURE
  • read results
  • tube porte ecouvillon incluant les réactifs
  • luminomètre à main pré étalonné
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15
Q

Réaction bio luminescence (3)

A
  • beetle luciferin +ATP + O2
  • ajout recombinant firefly luciferase et Mg 2+
  • oxyluciferin + AMP, PP1 + CO2 + light!
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16
Q

étape analyse qualitative après enrichissement de l’échantillon (1) et type bouillons (2)

A
  • étape de pré incubation de l’échantillon en bouillon de culture durant 16 et 24 h
  • bouillon trypticase soja (TSB): bactéries
  • bouillon Sabouraud ou YPD (yeast pepton dextrose): levures
17
Q

intérêts analyse qualitative après enrichissement de l’échantillon (2)

A
  • permet détection de microorganismes qui sont en trop faible quanitité pour être quantifiés par technique directe
  • permet détecter les microorganismes revivifiables: germes stressés, quiescents ou viables non cultivables (VNC)
18
Q

limites analyse qualitative après enrichissement de l’échantillon (3)

A
  • non quantitative, réponse de type présence ou absence
  • lente
  • non spécifique
19
Q

Identification micro organismes constitutifs d’un biofilm (5)

A
  • dénombrement suivi d’une identification génétique
  • mise en culture sur milieu gélosé
  • incubation 30/37 C pendant 48h à une semaine
  • dénombrement des colonies obtenues
  • identification par PCR classique
20
Q

intérêt identification par dénombrement suivi d’une identification génétique (2)

A
  • analyse quantitive

- spécificité

21
Q

limites identification par dénombrement suivi d’une identification génétique (2)

A
  • durée surtout si micro organismes à croissance lente

- ne prend pas en compte les VNC viables non cultivables

22
Q

Intérets d’identification génétique par PCR quantitive en temps réel (quantificaiton directe)

A
  • analyse quantitative
  • spécificité
  • rapidité
  • sensibilité
23
Q

Limites de quantification directe et identification génétique par PCR quantitative en temps réel (1)

A
  • prend en compte les cellules vivantes et mortes (sauf si prétraitement de l’échantillon par propidium monoazide
24
Q

Possibilité de quantification spécifique des cellules vivantes par qPCR (2)

A
  • propidium monoazide (PMA) ne pénètre que dans les cellules mortes
  • couplage entre ADN des cellules morte et le PMA est induit par photo activation
25
Q

Sniff brett (4)

A
  • un bouillon nutritif enrichi en acides cinnamiques et précurseurs des éthyl phénols
  • concentration en Brett est inversement proportionnelle au temps nécessaire à la prod des arômes défectueux
  • mise en culture des copeaux dans le brouillon
  • ensemencement 1 g de copeaux
26
Q

Comment confirmer un sniff Brett positif?

A
  • confirmation de la présence de Brett par observation microscopique
  • en présence d’un colorant vital: bleu de méthylène
27
Q

Identification génétique par PCR classique après sniff brett (3)

A
  • directement
  • ou après obtention de colonies par étalement sur miliu gélosé sélectif et incubation à 30 C
  • milieu YPD (yeast peptone dextrose) + cycloheximide (ou actidione) + chloramphénicol
28
Q

dextrose

A

is D-glucose

29
Q

PCR quantitive pour brett (3)

A
  • directement à partir des copeaux broyés
  • après lyse des levure/ lyticase
  • extraction et purification de l’ADN
30
Q

composition détergent enzymatique Biorem 10 (2)

A
  • activités enzymatques: polysaccharidase

- protéase

31
Q

T et pH d’utilisaiton de Biorem

A
  • 50 C

- pH = 10

32
Q

Avantages Biorem comme détergen enzymatique (2)

A
  • plus efficace que la soude caustique

- biodégradable

33
Q

Autres stratégies de lutte contre les biofilms

A
  • inhibition de l’adhérance des microorganismes aux supports
  • inhibition du quorum sensing
  • lyse des bactéries
34
Q

ihibition de l’adhérence des micro-organismes aux suuport (2)

A
  • traitements des supports par des surfactants

- surfactine

35
Q

inhibition du quorum sensing (2)

A
  • par compétition avec des furanones halogénées

- ce sont des analgues structuraux des auto inducteurs de type lactone

36
Q

lyse des bactéries trois méthodes: (3)

A
  • bactériocines: nisine, mésentéricine
  • bactériophages
  • rayonnement: UV-c

Biotech (4 decks)

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