analyse chromosomique Flashcards
Caryotype anténatal
Utilise des cellules d’origine fœtale :
Amniocytes (liquide amniotique).
Cellules trophoblastiques (villosités choriales).
Lymphocytes fœtaux (sang du cordon).
Temps de culture variable :
Pour le liquide amniotique : 6 à 10 jours.
Caryotype postnatal
Prélèvement veineux sur tube avec héparinate de lithium (anticoagulant) est standard.
Sang total incubé 48 à 72 heures avec un milieu contenant de la phytohémagglutinine (PHA), stimulant la croissance des lymphocytes.
Les fibroblastes de la peau nécessitent 1 à 3 semaines de culture.
Observation des chromosomes
Les chromosomes sont mieux visibles au microscope en métaphase, nécessitant des cellules en division.
Les cellules sont cultivées pour les arrêter en métaphase afin de réaliser un caryotype.
les bandes de chromosomes
G : riches en G=C et obtenu par dénaturation enzymatique par trypsin, gènes actifs et replication précoce.
R : riches en A=T obtenu par dénaturation thermique, gènes inactifs, réplication tardive.
Blocage en métaphase
Blocage en métaphase :Les cellules sont bloquées en métaphase en ajoutant de la colchicine.
La colchicine empêche la polymérisation de la tubuline, bloquant la formation du fuseau mitotique et stoppant la mitose en métaphase.
Choc hypotonique : Les chromosomes sont libérés des parois cellulaires par un choc hypotonique au KCl.
Cela provoque un gonflement des cellules par différence de pression osmotique, fragilisant les membranes cytoplasmique et nucléaire.
fixation
les techniques spécifiques (rarement d’usage)
Bandes T :
Obtenues par dénaturation thermique avec marquage fluorescent.
Permettent une meilleure analyse des télomères et des régions sub-télomériques.
Utiles surtout en cytogénétique prénatale.
Bandes C :
Colorent l’hétérochromatine constitutive.
Marquent les centromères et les constrictions secondaires.
Imprégnation argentique :
Met en évidence les organisateurs nucléolaires (NOR).
Localise les gènes des ARN ribosomiques sur les bras courts des chromosomes acrocentriques.
Bandes Q (QFQ) :
Réalisées par coloration à la quinacrine, observée en fluorescence.
Colorent intensément :
La région hétérochromatique distale des bras longs du Y.
Certains centromères.
Certains bras courts des acrocentriques.
Techniques de haute résolution :
Étude des chromosomes en prométaphase (ou fin de prophase), où la chromatine est moins compactée.
Permet d’observer 600 à 800 bandes par lot haploïde, améliorant la résolution pour détecter des anomalies plus fines.
- Quelles sont les types de sondes spécifiques utilisées en FISH ?
Sondes spécifiques de loci (LSI) : Elles s’hybrident sur un petit fragment chromosomique spécifique pour identifier un locus particulier.
Sondes de peinture chromosomique (WCP) : Elles marquent des fragments d’ADN représentant un chromosome entier et “colorient” l’ensemble de la paire chromosomique ciblée.
- À quoi servent les sondes de peinture chromosomique (WCP) ?
Réponse : Elles permettent de marquer l’intégralité d’un chromosome ou d’une paire chromosomique, offrant une visualisation complète de celui-ci.
- Quelles sont les limites de la technique FISH ?
Ne permet pas d’explorer l’ensemble du génome contrairement au caryotype conventionnel.
La résolution est de 1,5 Mb pour détecter certaines translocations, mais peut ne pas être suffisante pour identifier des réarrangements complexes.
Ne permet pas toujours de déterminer les régions chromosomiques impliquées dans des insertions chromosomiques ou des duplications.
utilité de FISH
duplications, réarrangement chromosomiques complexes, identification des chromosomes marqueurs
Q: Quels sont les avantages de la technique FISH ? R:
Q: Quelles sont les limites de la technique FISH ? R:
Permet de détecter des anomalies génétiques spécifiques.
Haute précision pour localiser des délétion ou duplication dans des régions ciblées.
Peut être utilisé sur des chromosomes en interphase (pas besoin de culture cellulaire).
Détection des mosaïques faibles./ duplications / réarrangements chromosomqies complexes / identification des chromosomes marqueurs)
FISH avec sonde de peinture chromosomique résolution 1.5 mb détecte des translocations rélomériques
Ne permet pas une analyse globale du génome.
Résolution limitée par la taille de la région ciblée.
Pas efficace pour détecter des réarrangements complexes ou des anomalies équilibrées.
Q: Quels sont les avantages+ limites de la technique Multi-FISH ? R:
Quels sont les avantages de la technique Multi-FISH ? R:
permet : réarrangement chromosomique complexes, identification de l’origine des chromosomes marqueurs)
CGH avantages et limites
ne détecte que les déséquilibres génomiques / les anomalies génomiques équilibrés ( ni perte ni gain) ne sont pas détéctés ) ne détécte les les anomalies en faible mosaique , résolution ne dépasse 5-10 mb
CGH array avantages et limites
principe : métaphase et remplacés par tous les fragments en ADN du génome /détecte les duplications interstitielles /haute résolution en ordre de kb/ résolution dépend de la taille de puce utilisé / dépend de la densité des fragments utilisé : plus que les fragments sont nombreuses il est favorable de détecter les anomlies
les tissus de l’analyse ch
lymphocytes sanguins : anal ch conventionneles ou moléculaire dans un contexte de pathologie constitutionnelle ou acquise / fibroblastes : après culture / c de moelle osseuse : cas d’hémopathie / c épithéliales endobuccales : par FISH interphasique , confirmé une anomalie chromosomqie détéctée en mosaique sur sang / c épithéliales de l’appareil urinaire : confirmer un mosaicisime par FISH interphasique / c embryonnaires : FISH interphasique ou CGH / c trohpblastiques : entre 11-13 semaine d’aménorrhéé / lliquide amniotique ou amniocentèse 15-16 semaine , culture cellulaire/ sang foetal ou cordocentèse : 22 semaine, 2% fausse couche
indications des analyses cytogénétiques en période anténatale
age maternel sup a 35
signe d’appel echograph
antécédent familial de déséquilibre chrom ou parent porteur de remaniement chrom équilibré / diag de sexe risque de malformation sup a 1/250
indications des analyses cytogénétiques en période postnatale
phénotype évocateur d’un syndrome chromosomique connu
une hypotonie néonatale avec dysmorphie
un retard de croissance intra-utérin associé à une dysmorphie ou à une anomalie neurologique
une anomalie de la différenciation sexuelle
un retard de croissance
un retard ou une absence de puberté
une aménorrhée primaire ou secondaire, une ménopause précoce
une suspicion d’un syndrome d’instabilité chromosomique
- Chez un couple présentant un trouble de la fertilité ou des avortements spontanés à répétition
- Devant un remaniement de structure familial
indications des analyses cytogénétiques en pathologie acquise
Le diagnostic d’anomalies chromosomiques récurrentes dans les hémopathies malignes
Le diagnostic d’anomalies chromosomiques récurrentes dans les tumeurs solides
