Análisis de Ácidos Nucléicos Flashcards
Primer paso para los estudios de biología molecular y para las técnicas de DNA recombinante, secuenciación, mutagénesis.
Extracción de DNA
Ramas de investigación dónde se utiliza el análisis de ácidos nucléicos
- Medicina forense
- Bioinformática
- Nanotecnología de DNA
- Historia y antropología
De qué depende la extracción:
- Tipo de ac nucleico que se va a extraer
- Organismo origen del ácido nucleico
- Fuente del ácido nucleico
- Técnica en que se utilizara el ácido nucléico extraído
Tipos de ac nucleico que se puede extraer
ssDNA, dsDNA, RNA, mRNA, rRNA.
Fuentes de extracción del acido nucleico.
sangre, suero, plasma, biopsia, orina, heces, LCR, semen, raspado bucal, etc. (de dónde sea)
Pasos para la extracción de DNA
- Lisis celular
- Separación
- Purificación
- Precipitación
- Lavado
- Disolución
Técnica de extracción con la que se obtiene ADN de buena calidad y cantidad
Fenol-cloroformo
Cons de fenol-cloroformo
- Reactivos tóxico
- Pérdida significativa de DNA
Cloruro de amonio en lisis celular
Lisis de eritrocitos
SDS (dodecilsulfato sódico) en lísis celular
lisis de membranas celulares y nucleares.
Extracción de proteínas y lípidos es mediada por:
solventes orgánicos
Fenol: cloroformo: alcohol isoamilico
25: 24: 1
Precipitación de DNA
Solución salina salturada
Etanol 100%
Lavado de DNA
Etanol 70%
Agua