Análisis de ácidos nucleicos Flashcards
Tipos de acido nucleico que se pueden extraer
ssDNA
daDNA
RNA
mRNA
rRNA
Organismos de origen del acido nucléico
Procariota
Plantas
Mamiferos
Viruz
Fuentes para obtener acidos nucleícos
Sangre
suero
Plasma
Biopsia
Orina
Heces
Líquido cefalorraquídeo
Líquido sinovial
Líquido amniótico
Esputi
Semen
Raspado bucal
Folículo capilar
ETC
Características del Fenol cloroformo
Ventajas: Se obtien ADN de buena calidad y cantidad
Desventajas: Usas reactívos tóxicos / Perdidas significativas de ADN
Ventajas y desventajas del metodo de columnas para extraer ADN
Es rapido y se extrae una buena cantidad
Desventaja: Es muy CARO
Cuanto ADN pones en el espectrofotometro
1 microlitro
¿cómo funciona el espectrofotometro?
libera ondas dode a una mayor cantidad de luz abosorvida sera mayor la concentración ADN
Ondas de absorción del ADN
260 nm (nanometros)
Ondas de absorción de las proteínas
280 nanometros
Ondas de absorción del fenol
270 nanometros
Tinción que se usa en la fluorometría
Hoescht 33258
Componentes necesarios para la PCR
Secuencia de AND
Enzima DNA polimerasa
Desoxirribonucleotidos
Primers (oligonucleotidos)
¿De qué bacteria se extrae la enzima polimerasa de ADN?
Thermophilus aquaticus
Temperaturas que aguanta la Thermophilus aquaticus (Taq)
Soparta 95%
Temperaturas que aguanta la Thermophilus aquaticus (Taq)
Soparta 95%
Buffer o amortiguador necesario par la PCR
pH de 8.4
Es el cofactor de la Taq polimerasa
Cloruro de Magnesio
¿Quiénes forman a los iniciadores?
Los diseñamos nostros
¿Para qué se utilizan los iniciadores?
Reconocer secuencias blanco en el ADN molde
En que bases nitrogenadas es alto el inciador
Guanina y Citocina
Pasos para la PCR
Desnatrualización
Hibridación
Extención
¿Que pasa en la fase de desnaturalizacion de la PCR?
separación de cadena de ADN
a 95 grados por 20 o 30 segundos
¿Que pasa en la fase de hibridación de la PCR?
Los primers se alinearan al extremo 3’
Estara a temperaturade alineamiento de 50 a 60 grados
¿Que pasa en la fase de extensíon de la PCR?
La Taq polimerasa actuara sobre el complejo de primers
Se dNTP’s complementara para crear cadenas completas
A una temperatrua de 72°C
Formula para obtener la tempertura de alineamiento
(4(cantidad de guanina)+(cantidad de citosina)) + (2(cantidad de adenina) + (cantidad de timina)
¿La PCR permite ver la cantidad de polimofismos?
NO
