à savoir pour les TD

Question 1

comment obtenir une sonde marquée radio-activement ?

Answer 1

on peut faire :

• nick translation
• random priming
• PCR

Question 2

quelles sont les informations données par un northern blot ?

Answer 2

informations qualitatives (présence ou pas et taille des ARN) + informations semi-quantitative (abondance en ARN)

Question 3

qu’est ce qu’un gène de ménage

Answer 3

C’est un gène dont l’expression sa fait dans toutes les cellules (ubiquitaire) et qui est exprimé en même quantité (constitutif)

Question 4

donne deux exemples de gènes de ménage

Answer 4

GAPDH et actine

Question 5

donne trois exemple de gènes rapporteur

Answer 5

la luciférase, la GFP et la galactosidase

Question 6

qu’est ce qu’un ADNc (complémentaire)

Answer 6

c’est une brin artificiellement synthétisé à partir d’un ARNm. Il représente la partie codante de la région du génome ayant été transcris

Question 7

nothern blot

Answer 7

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Question 8

random priming

Answer 8

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Question 9

PCR

Answer 9

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Question 10

Nick translation

Answer 10

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Question 11

technique de protection contre la RNase

Answer 11

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Question 12

quel est l’intérêt de la technique de protection contre la RNase ?

Answer 12

utilisation de plusieurs sondes + haute sensibilité + quantification aisée

Question 13

hypersensibilité à la DNase

Answer 13

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Question 14

comment faire une lyse cellulaire ?

Answer 14

lyse chimique = utilisation de détergent / bêta-mercaptoéthanol / SDS
broyage mécanique = billes de verre / ultrasons / vortex

Question 15

qu’est ce que le SDS ?

Answer 15

molécule qui va charger toutes les protéines négativement ce qui entraîne la linéarisation de la protéine + mouvement similaire pendant électrophorèse

Question 16

qu’est ce que béta-mercaptoéthanol ?

Answer 16

molécule qui entraine la destruction des ponts disulfures

Question 17

comment se comporte le gel de poly-acrilamide

Answer 17

formation d’un maillage plus ou moins fin en fonction de la concentration utilisée = blocage des moélcules

Question 18

vers quel pôle migrent les protéines lors d’une électrophorèse ?

Answer 18

elles migrent vers le pôle +

Question 19

pourquoi utilisé un colorant lors d’une électrophorèse ?

Answer 19

Le colorant se déplace plus vite que les protéines lors de la migration, c’est le fond de migration. Quand il arrive en bas du gel, on peut arrêter la manipulation

Question 20

Comment fonctionne le bleu de coomassie ?

Answer 20

il se fixe aux arginine et aux acides aromatiques pour les colorés
- coloration aspécifique et irréversible

Question 21

western blot

Answer 21

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Question 22

quelles sont les protéines non reconnue par les Ac dans un western blot

Answer 22

albumine et caséine

Question 23

poids moléculaire d’un acide aminé

Answer 23

110 Da

Question 24

exemple de marqueur couplé aux Ac secondaire

Answer 24

peroxydase qui utilise l’eau comme substrat et qui renvoie des photons (lumière) pour la détection

Question 25

rouge ponceau

Answer 25

colorant aspécifique mais réversible

Question 26

que regarde t-on lors d’un marquage par méthionine radioactive ?

Answer 26

on regarde la quantité de protéine produite pendant un temps court

Question 27

immuno-précipitation

Answer 27

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