à savoir pour les TD Flashcards
comment obtenir une sonde marquée radio-activement ?
on peut faire :
- nick translation
- random priming
- PCR
quelles sont les informations données par un northern blot ?
informations qualitatives (présence ou pas et taille des ARN) + informations semi-quantitative (abondance en ARN)
qu’est ce qu’un gène de ménage
C’est un gène dont l’expression sa fait dans toutes les cellules (ubiquitaire) et qui est exprimé en même quantité (constitutif)
donne deux exemples de gènes de ménage
GAPDH et actine
donne trois exemple de gènes rapporteur
la luciférase, la GFP et la galactosidase
qu’est ce qu’un ADNc (complémentaire)
c’est une brin artificiellement synthétisé à partir d’un ARNm. Il représente la partie codante de la région du génome ayant été transcris
nothern blot
voir protocole
random priming
voir protocole
PCR
voir protocole
Nick translation
voir protocole
technique de protection contre la RNase
voir protocole
quel est l’intérêt de la technique de protection contre la RNase ?
utilisation de plusieurs sondes + haute sensibilité + quantification aisée
hypersensibilité à la DNase
voir protocole
comment faire une lyse cellulaire ?
lyse chimique = utilisation de détergent / bêta-mercaptoéthanol / SDS
broyage mécanique = billes de verre / ultrasons / vortex
qu’est ce que le SDS ?
molécule qui va charger toutes les protéines négativement ce qui entraîne la linéarisation de la protéine + mouvement similaire pendant électrophorèse
qu’est ce que béta-mercaptoéthanol ?
molécule qui entraine la destruction des ponts disulfures
comment se comporte le gel de poly-acrilamide
formation d’un maillage plus ou moins fin en fonction de la concentration utilisée = blocage des moélcules
vers quel pôle migrent les protéines lors d’une électrophorèse ?
elles migrent vers le pôle +
pourquoi utilisé un colorant lors d’une électrophorèse ?
Le colorant se déplace plus vite que les protéines lors de la migration, c’est le fond de migration. Quand il arrive en bas du gel, on peut arrêter la manipulation
Comment fonctionne le bleu de coomassie ?
il se fixe aux arginine et aux acides aromatiques pour les colorés
- coloration aspécifique et irréversible
western blot
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quelles sont les protéines non reconnue par les Ac dans un western blot
albumine et caséine
poids moléculaire d’un acide aminé
110 Da
exemple de marqueur couplé aux Ac secondaire
peroxydase qui utilise l’eau comme substrat et qui renvoie des photons (lumière) pour la détection
rouge ponceau
colorant aspécifique mais réversible
que regarde t-on lors d’un marquage par méthionine radioactive ?
on regarde la quantité de protéine produite pendant un temps court
immuno-précipitation
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