6.4 Chromatographie D'affinité Flashcards
c’est le type de Chromatographie le plus…
sélectif
combien de fois peu être purifier une protéine avec cette technique ?
10^3 à 4 en une fois
sur quel principe repose la Chromatographie D’affinité ?
reconnaissance spécifique entre une mol d’un mélange et une mol greffer sur une phase stationnaire
comment s’appelle la phase fixe?
ligands
comment interagissent la mol à séparé et le ligands ?
de manière hautement spécifique (et réversible)
comment est la phase stationnaire et mobile?
stationnaire : solide
mobile : liquide
comment désorbe-t-on les molécule fixées au ligands ?
☆tampon ph différent
☆ajout d’une tierce molécule qui entre en compétition (ligands lui même en plus forte concentration ou molécule à la structure analogue)
de quoi peu être composer le support (matrice)?
bille poreuse
polyacrylamide (pas use si masse mol elever)
gel d’agarose
que nécessite la matrice pour pouvoir immobiliser le ligands?
il faut l’activer => créé des site réactionnel qui permette d’établir des liaison covalante
quel son les moyen d’activer la matrice ?
☆activation des groupe hydroxyle
☆ajout de bras espaceur (spacer) => trop court inefficace, trop long interaction non spécifique majeur
que permet cette méthode ?
séparation, purification et analyse d’une molécule donné
qu’est-il nécessaire de connaître pour purifier une protéine?
nécessaire de connaître la protéine pour choisir le ligands adapté
