5 - Fluorescence Flashcards
Définir Fluorochrome et Fluorophore
Phore : partie fluorescente qui génère la lumière
Chrome : Molécule fluorescente
Définir le colorant fluorescent et le probe fluorescent
Colorant : ?
Probe : molécule qui réagit directement et permet de devenir fluorescent par un rx biochimique
Définir le coefficiant molaire d’extinction
Abilité d’absorber les photons
Définir le rendement quantique
Ration de photos absorbé/photons émis
Quel est la cause du photobleaching?
ROS intéragissent avec le fluorochrome = ↓ luminosité
Quel est la limite d’utiliser des scavenger pour diminuer le photobleaching?
le médium applatit notre cell et on perd la structure 3D.
Décrire la technique de Point spread function (PSF)
Les loi de la physique montre que plus on s’éloigne de notre object, on perd de la résolution (deviens flou)
On fait alors des calculs mathématique en évaluant la fluorescence à chaque point focal pour créer une image à haute résolution
Décrire le fonctionnement d’un microscope confocal
On place un diaphragme derrière la lentille pour réflété
Définir la résolution
Capacité de distinguer 2 objets et on l’exprime en nm
Décrire la technique de STED (stimulated emission depletion)
On envois un 2ième photon et l’électron retourne au niveaux initial sans émission de photon
On mesure la fluorescence de différence déplétion/emission et ceci augmente notre résolution à 50nm au lieu du max de 200
Décrire la technique de multiphoton excitation
On vx atteindre une longueur d’onde en IR puisque la chaleur traverse mieux la cellule.
On envois un pulse de photons concentré temporalement et spatialement = excitation spécifique on point focal puisque la densité photonique n’est pas suffisante pour exciter les autres points.
Décrire l’influence de SSC vs FSC
SSC : Granularité
FSC : Size
