3. Développement bactérien et culture en laboratoire Flashcards
De quoi les bactéries ont elles besoin pour bien se développer?
Bonne disponibilité en nutriments
Conditions environnementales favorables
Quels sont les éléments nutritionnels indispensables?
Macroéléments (carbone, hydrogène, azote, soufre et phosphore)
Oligoéléments (fer, calcium, magnésium,…)
Que sont les macroéléments?
Éléments nutritionnels dont la cellule a besoin en grande quantité
Quels sont les macroéléments et leurs rôles?
Carbone: constituant de base de toutes les molécules de la bactérie
Hydrogène : constituant de la structure des molécules organiques
Azote, soufre et phosphore: plus particulièrement pour la synthèse des protéines, des acides nucléiques (ADN et ARN), de l’ATP…
Quels sont les oligoéléments et leur rôle?
Minéraux (fer, calcium, magnésium)
Réactions enzymatiques (cofacteur)
Quelles sont les sources des principaux nutriments?
Carbone, hydrogène, oxygène et phosphore : glucides, acides organiques et acides gras
Azote et soufre: protéines faites d’a.a. dont la cystéine et la méthionine (soufre) ainsi que des nitrates (azote)
Oligoéléments : eau
Quels sont les mécanismes d’absorption des nutriments?
Diffusion passive
Osmose
Perméases
Exoenzymes
Décrivez la diffusion passive
Les nutriments traversent la paroi et la membrane plasmique sans apport particulier d’énergie
Décrivez l’osmose
Mécanisme d’équilibre de concentration ionique de part et d’autre de la membrane principalement par entrée et sortie d’eau
Décrivez les perméases
Mécanisme mettant en jeu des enzymes dont le rôle est de “transporter” des molécules vers l’intérieur de la bactérie
Décrivez les exoenzymes
Enzymes qui contribuent indirectement à l’absorption en fractionnaire les molécules qui sont trop grosses pour traverser la paroi et la membrane par les mécanismes précédents (diffusion passive, osmose, perméases)
À quoi servent les milieux de culture?
Obtenir des bactéries en plus grande quantité
Identifier et étudier
Exploiter afin de produire des substances (bioprocédés)
Assure l’apport des nutriments et certains des conditions favorables au développement bactérien
Quels sont les éléments nécessaires à l’apport de nutriments pour les milieux de culture?
Peptones (petites protéines)
Eau
Facultatif:
Glucides
Sels organiques
Facteurs de croissance particuliers requis pour le développement des bactéries plus exigeantes
Quelle est l’offre de conditions favorables des milieux de culture?
Valeurs de pH et d’osmolarité optimales
Système tampon maintenant le pH habituellement à une valeur entre 7.2 et 7.6
Sels minéraux tels que NaCl ou KCl pour assurer la tonicité optimale
Quels sont les types de milieux simples (usage général)?
Bouillon nutritif TSB (Trypticase Soy Broth)
Peptones extraits principalement du soya par l’action de la trypticase
Gélose de base TSA (Trypticase Soy Agar)
Peptones extraits principalement du soya par l’action de la trypticase
Agar provenant des algues et qui assure la gélification du milieu
Pourquoi utiliser l’agar plutôt que la gélatine pour gélifier les milieux de culture solide?
Les bactéries sont incapables d’utiliser l’agar comme substance nutritive (alors que certaines bactéries peuvent utiliser la gélatine comme substance nutritive)
Quelle est la concentration d’agar dans le milieu et le rôle de cette concentration?
Plupart des géloses: entre 1.0% et 1.5%
Milieu semi-solides: entre 0.5% et 0.75% (test de mobilité)
Milieu légèrement visqueux: entre 0.05% et 0.5% (réduire les courants de convection)
Qu’est-ce qu’un milieu enrichi?
Faits à partir de milieux simples, de base (TSB ou TSA) auxquels on ajoute des substances qui favorisent une croissance plus importante des germes plus exigeants
Nommez deux types de milieux enrichis
Gélose au sang
Gélose chocolat
Décrivez la gélose au sang
Enrichi le plus souvent de sang de mouton
Occasionnellement, de sang de lapin ou de cheval
Décrivez la gélose chocolat
Enrichi de sang de mouton qui est lysé par la chaleur lors de sa préparation
Libéré le contenu des GR qui fournit entre autres du facteur V (NAD+)
Inhibe l’enzyme qui dégradé le facteur V (NADase)
Le facteur X (hématine) est présent dans le sang
Nommez et décrire les 3 types d’hémolyse
Non hémolytique (gamma): aucune hémolyse
Alpha hémolytique (alpha): hémolyse partielle (zone verte), dégradation de l’hémoglobine jusqu’à la biliverdine
Beta hémolytique (beta): hémolyse complète (zone claire), dégradation de l’hémoglobine
Décrivez les milieux sélectifs
Contiennent des agents inhibiteurs qui limitent la croissance de certains groupes de germes tout en laissant croître d’autres: permettant de sélectionner ceux qu’on désire garder
Nommez un milieu sélectif et décrivez le
Milieu MacConkey
Sels biliaires: inhibent la croissance de la majorité des bactéries à Gram positif
Violet de cristal: inhibe les Staphylococcus et les Enterococcus qui sont des Gram positif qui résistent aux sels biliaires
Sélectif pour les BGN (les coccis ne poussent pas)
PAS tous les BGN poussent sur MacConkey, certaines bactéries sont plus exigeantes
Décrivez les milieux différentiels
Permettent de différencier divers groupes de bactéries selon leur comportement sur ce milieu
Contiennent une substance que seulement certains groupes bactériens peuvent transformer et un indicateur de cette réaction de transformation (généralement un indicateur de pH)
Nommez un milieu différentiel et décrivez le
Milieu MacConkey
Lactose: substance “test” à dégrader
Indicateur de pH: rouge neutre
Résultat : colonies roses ou incolores (lactose -> acide pyruvique (acide))
Décrivez les milieux de transport
Pas vraiment des milieux de culture
Pas de substances nutritives
Ne permettent pas le développement des MO
Protège les MO de la dessiccation, des variations importantes d’osmolarité et de pH
Quels sont les buts des milieux de transport?
Garder les bactéries viables
Garder les bactéries en proportions
Nommez 3 milieux de transport
Milieu Stuart
Milieu Amie
Milieu Cary-Blair
Quels sont les conditions environnementales importantes pour les bactéries?
Température
Atmosphère
Quels sont les 3 types de température auxquelles les bactéries vivent?
Psychrophiles: 0-20°C (idéal 15°C)
Mésophiles: 20-40°C (idéal 37°C)
Thermophiles: >55°C
En microbiologie clinique: mésophiles
Contrôle qualité pour l’autoclave: 2 bactéries thermophiles
Quelle est l’humidité relative pour les bactéries ?
≥70%
Quels sont les types d’atmosphère selon le type respiratoire de la bactérie?
Aérobique: O2
Anaérobique: sans O2
Facultative: O2 ou sans O2
Air ambiant: 20% O2 et 80% N2
Air ambiant enrichi (capnophile): 5 à 10% (environ 7.5%) CO2
Sans O2 et enrichi de CO2
Microaérophile: entre 3 et 8% O2 (taux inférieur à l’air ambiant)
Quels sont les appareils et instruments pour les conditions environnementales?
Incubateur
Chambre anaérobie
Jarres anaérobiques
Générateurs d’atmosphère anaérobie
Quelles sont les étapes globales de la reproduction bactérienne?
Réplication de l’ADN
Les 2 ADN se séparent
Un septum (cloison) se forme
Les 2 parties se séparent pour donner deux cellules filles identiques et ainsi de suite
Le mode de reproduction est il responsable des arrangements bactériens?
Oui
Décrivez les modes de reproduction et l’arrangement bactérien associé
Mêmes plans: chaîne (streptocoque)
Plusieurs plans: amas (staphylocoque)
BGN: plupart sans arrangement
Nommez les 4 phases de la croissance de la population bactérienne
Latence/adaptation
Croissance exponentielle/logarithmique
Stationnaire
Décroissance ou déclin
