2. Tecnologia da biologia celular e molecular Flashcards
Quais são as principais etapas de preparação de lâminas?
1) Coleta do material (Biópsias)
2)Fixação (manter estruturas clr e impedir destruição) - uso de: formol e aldeído
glutárico- estabilizam proteínas
3) Desidratação (Retirada de água do material- uso de álcool para isso)
4)Diafanização (preparar o material para etapa de inclusão. Usa geralmente xilol para
retirar líquidos e tornar material translúcido)
5) Inclusão (Banho de parafina, para formar blocos)
6) Microtomia (Corte de estruturas por aparelho: MICRÓTOMO)
7) Colocação do corte da lâmina (montagem de lâmina)
8) Coloração (corantes BÁSICOS- afinidade por o que é ÁCIDO-basofílico | Corantes ÁCIDOS- afinidade por o que é BÁSICO- acidófilo)
- sistema de lentes: ampliação pelas lentes objetivas e pelas lentes ópticas
- poder de resolução: mede a capacidade de identificar pontos individualizados.
- Lente objetiva que regula resolução
MICROSCÓPIO DE LUZ/ ÓPTICO
_
Aparelho com poder de resolução de um sistema óptico com capacidade de separar detalhes, com limite de resolução 0,5 micrometros
1) Lente q serve para ampliar a imagem dada pela objetiva ______
2) Lente q serve p ampliar a imagem do objeto a observar _____
3) Regula a intensidade da luz q atinge o objeto a observar ______
4) Tem a função de iluminar o material a ser observado ______
1) lente ocular
2) lente objetiva
3) condensador e diafragma
4) fonte de luz
- feixe de luz polarizada dividido pelas
estruturas - o que desvia luz: ANISOTRÓPICAS
- o que NÃO desvia luz: ISOTRÓPICAS.
MICROSCÓPIO DE POLARIZAÇÃO
- Analisa contraste entre estruturas celulares:
aparecem em fase positivas-claras ou em fase
negativas-escura. - mais denso o material: menor velocidade que luz
passa. - menos denso corpo, > velocidade que luz passa.
MICROSCÓPIO DE CONTRASTE DE FASE
- Proporciona nitidez em todas as estruturas ao mesmo tempo. - Ilumina por meio de um laser, que percorre pela região toda. - Uso de corante fluorescente - Leitura em computadores.
MICROSCÓPIO CONFOCAL
_
As células ou tecidos são submetidos a um composto
fluorescente e a luz emitida é processada em um computador
Utilizado para construir uma imagem tridimensional,
ou para cálculos de comprimento, área, volume e outras análises, de acordo com a finalidade do estudo
- Usa comprimentos de luz muito pequenos- vê estruturas muito
microscópicas. - feixe é de elétrons, e não de luz.
- O que aparece escuro: elétron-denso (estruturas celulares não desviam)
- O que aparece claro: tons de cinza (estruturas celulares desviam)
- Corte de lâmina deve ser fino: inclusão em resina e navalha de vidro/diamante.
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO
_
visualização de estruturas celulares não visíveis ao microscópio óptico por contar com poder resolutivo muito maior.
0,2-0,5nanometros
micelaroscópio eletrônico
- emissão de feixe de elétrons para
tecido - elétron contorna estruturas- visão 3D
das estruturas.
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE VARREDURA
Visualização a:
Olho nu: ovo de rã
MO: cl animal e vegetal, bactéria
ME: vírus, ptn, pequena molécula, átomo
V
Como podemos ver as ptn?
Imunocitoquimica
1) direta: procura reação antígeno-anticorpo
2) indireta: procura antianticorpo
Como conseguimos ver cls vivas?
Em cultura de cls - Soluções nutritivas: nutridas com aminoácidos, glicídios e sais minerais, - Observa-se o metabolismo e o comportamento celular de seres vivos.
MO: amplia até 1.500 vezes (pele, mucosa, cilios da traqueia, interdigitações do epitelio - borda estriada-) - limite de resolução: 0,5µm
ME (limite de resolução: 0,2-0,5 nm): Transmissão: as imagens são de cortes ultrafinos ou mostram a região interna da célula com a estrutura de membrana, as organelas, como mitocôndrias e retículo endoplasmático etc. Varredura: a imagem é formada quando o feixe percorre a
superfície da amostra, arrancando de sua superfície elétrons que irão formar
uma imagem da superfície externa que estiver sendo “varrida”
V
Na Citoquimica existem reagentes que reagem com a estrutura- alvo em forma de cor. Relacione:
Reação de Feulgen
Oil Red
Tricómio de Masson
PAS
DNA
Lipídeos
Colágeno
Glicogênio
Se baseia na reação antígeno- anticorpo e permite estudar a localização intracelular de proteínas específicas
Imunocitoquímica
Células isoladas a partir de tecidos intactos
Cultura celular
É um método para detectar proteínas em células ou tecidos biológicos
Eletroforese em gel para separar as proteínas desnaturadas por massa
Western blot
Técnica de amplificação de DNA sem utilizar organismos vivos, utilizado em clonagem de genes, teste de paternidade, detecção de
organismos causadores de infecções.
Extrai DNA ou RNA, add primers + DNA polimerase
PCR (reação em cadeia da polimerase)
Principais etapas da preparação de lâminas
Coleta
Fixação
Corte (microtomia)
Coloração
( ) Micrótomo é o nome dado para o aparelho que consegue preparar exemplares de tecidos em parafinas, a fim de colocá-los em lâminas.
( ) Corantes básicos coram estruturas básicas.
( ) Corantes ácidos coram estruturas básicas.
( ) Os principais tipos de microscópios são: de luz e eletrônico.
( ) Imunocitoquímica direta é a busca pelo antianticorpo em uma solução com antígenos e anticorpos.
( ) Imunocitoquímica indireta é a busca pela reação antígeno-anticorpo em uma solução com antígenos e anticorpos.
( ) Cultura de células é o nome dado para meios nutritivos que mantém células vivas, para serem estudadas mais minuciosamente.
V F V V F (isso é a imunocitoq. indireta) F (isso é a imunocitoq. direta) V
