Клониране на ДНК

Question 1

Видове клониране

Answer 1

1) соматично - цял организъм
2) генетично - клониране на НК

Question 2

Какво е клониране на ДНК

Answer 2

техника, чрез която се създават идентични копия на ген или част от ДНК

Question 3

Как се извършва клонирането?

Answer 3

Целевият ген, след като е изрязан от специфични ензими се вмъква с помощта на други ензими в кръгова молекула ДНК (плазмид). Свързват се чрез фосфодиестерни връзки за здравина.
Плазмидът се въвежда в бактерия и се използва за синтез на антибиотици (чрез експресия на гена и транслация). Процесът се нарича трансформация за прокариоти и трансфекция при еукариоти.

Question 4

Каква е целта от създаването на много копия от 1 ДНК поредица в 1 плазмид?

Answer 4

в някои случаи ни трябват доста ДНК копия, за да се проведе експеримент, в други частта ДНК кодира полезен протеин и бактериите се използват като “фабрики” за създаването му : инсулин от E. coli

Question 5

Стъпки

Answer 5

1) плазмида се отваря (изразва от рестриктази и се събира от ДНК лигази)
2) вмъкване, селектиране
3) отглеждане като фабрики
4) използване

Question 6

Какво е необходимо по време на трансформацията?

Answer 6

да се подложи на шок (например висока температура(, за да се окуражи да приме чужда ДНК

Question 7

Какво се случва с бактериите, които не приемат плазмида?

Answer 7

Умират, тъй като в него има ген за антибиотична резстентност, а в средата има антибиотици

Question 8

Как можем да проверим дали даден плазмид е вкарал ген

Answer 8

чрез PCR - трябва да е по-голям плазмида след като е приел гена

Question 9

Какво се случва когато отглеждаме бактериите като фабрики?

Answer 9

Изолираме търсеното от нас съединение, като клетките се отварят и почистват от други молекули чрез колонна хроматография ; за да е обаче биологично активна молекулата се изискват още стъпки

Question 10

Употреби на клониране на ДНК

Answer 10

• биолекарства
• генна терапия
• генен анализ