Клетъчно култивиране

Question 1

Същност на клетъчно култивиране

Answer 1

поддържане на кл. култури, тъкани и органи, отделени от многоклетъчния организъм в условия ин витро (запазва се архитектура и функция)

Question 2

След колко деления загиват човешките фибробласти?

Answer 2

50

Question 3

Хибридоми

Answer 3

сливане на клетки, които живеят безкрайно дълго (ракови) с такив, които живеят кратко, но синтезират важни неща (тези, които синтезират антитела)

Question 4

Предимства на клетъчни култури

Answer 4

• икономичен вариант
• възможност за наблюдение и манипулация в живо състояние
• премахване на етични проблеми

Question 5

Видове клетъчни култури според организацията им

Answer 5

1) клетъчни
2) тъканни
3) органни

Question 6

Видове клетъчни култури според начина на нарастване в лабораторни условия

Answer 6

1) монослойни - заловени за съда; контакнто ихибиране (биват епителоподобни и фибробластоподобни)
2) суспенсионни - свободно плуване в хранителна среда

чрез метод на отбор можем от едините да направим другите

Question 7

Видове култури според време на отглеждане

Answer 7

1) първични - взети директно от организма чрез ензими за тъканна дисоциация (трипсин, колагеназа и др.); преживяват първите 24 часа; има голяма възможност за зараза и смърт
2) вторични - тези, които са оцелели

Question 8

Примери за клетъчни култури

Answer 8

• MDCK - епителоподобни, куче, бъбрек, ветеринарни ваксини; клетъчна полимеризация
• HeLa - човек, ракова, епителоподобна

Question 9

Методи в клетъчно култивиране

Answer 9

1) Соматична хибридизация
2) Нокаут

Question 10

Соматична хибридизация

Answer 10

позволява сливането на соматични (не полови) клетки на 1 и същи вид (миши фибробласт и лимфобласт) или различни видове (човек+мишка)
- може да имаме ядрен хибрид или цибрид (цитоплазмен хибрид)

Question 11

Нокаут

Answer 11

Генетично манипулиране на ембрионални стволови клетки, при който разрушаваме и двата алела на ген, който искаме да анализираме. Това може да доведе до смърт или до по-нататъшно развитие. След това може да се имплантира в организъм (химерен организъм) и този ген ще участва в процесите.
Може да се използват и полови клетки, като може да се получават хомозиготни ои променения ген

Question 12

Пример за нокаут

Answer 12

Трансгенна мишка с GPF - свети

Question 13

Характеристика на клетъчни култури (паспорт)

Answer 13

• време за удвояване на популация
• времетраене на клетъчен цикъл
• присъствие на специални белтъчни маркери (особено важно при стволови, за да се знае докъде е стигнало развитието)
• изоензимен анализ
• анализ на кариотип
• анализ на ДНК

Question 14

Време за удвояване на популация

Answer 14

на графиката се вижда lag (докато се стабилизират), log (нарастване) и плато (при монослойна тук спира заради контактното инхибиране) и отмиране

Question 15

Анализ на кариотипа

Answer 15

хромозомен брой, размери и дължина, позиция на центромери и вторични прищъпвания, идентификация на Х и У хромозоми

Question 16

Анализ на ДНК

Answer 16

• по-модерно
• секвентиране (определяне на последователността на нуклеотидни бази)
• модел “пръстов отпечатък”

Question 17

Изоензимен анализ

Answer 17

за различаване на тъкани от 1 вид или от различни видове
използва се кисела фосфатаза и др.

Question 18

Етапи на клетъчно култивиране

Answer 18

1) Изолация и пасажиране
2) Броене (може да се оцветяват чрез витално синьо, за да се броят само живите)
3) Замръзяване
4) Размръзяване

Question 19

Изисквания на клетките към средата

Answer 19

1) Физикохимични
- темепратура (20, 35, 37)
- осмотично налягане и рН, които регулираме с йони и СО2
- газов баланс
- подложките са най-често отрицателно зарадени
2) Хранителни вещества
- АК, субстрати за метаболизъм, кофактори, енергия - гклюкоза, глутамин, витамини, прекурсори на НК, липиди

Question 20

Видове среди

Answer 20

1) естествени
2) изкуствени - BME, Eagle’s
3) Смесени - изкуствени + 5-20% серум
+ антибиотик

Question 21

Един от най-важните моменти е…

Answer 21

Стерилизация (автоклавиране, топлина, УВ, филтриране, белина, етилен оксид)