Virologie cours #4

Question 1

Quelles sont les deux façons d’utiliser les virus pour combattre les maladies ?

Answer 1

1- thérapie génétique (entrer un bon gène dans la cellule pour la corriger)
2- destruction de cellules spécifiques (ex: cellule cancéreuse =virus qui attaque les cellules cancéreuses sans toucher celle en santé )

Question 2

But de la thérapie génétique et l’utilisation des virus :

Answer 2

• corriger un défaut génétique en transférant une copie fonctionnelle du gène correspondant

Exemple: hémophilie /SCID/ distrophie musculaire / fibrose kystique / anémie/cancer

Question 3

Facteurs importants en thérapie génétique

Answer 3

• livraison à des cellules/tissus ou organes spécifiques (méthode de livraison)
  -niveaux d’expression et durée d’expression
  -conséquences immunologiques du mode de livraison et du gène introduit (toxicités)

Question 4

Pourquoi utiliser des vecteurs viraux?

Answer 4

-réplication intracellulaire
-très efficace pour transférer des gènes dans les cellules
-spécificité: attachement à des récepteurs spécifiques
-non-virulents: certains gènes viraux sont enlevés (ajout de gènes d’intérêt)
Les gènes sont modifiés en laboratoire ex: génome du VIH … on contrôle le site d’insertion : - recombinaison forcée
-sors les lymphocytes/ les modifie et les réinjecte

Question 5

Quels sont les deux types de vecteurs viraux:

Answer 5

• virus compétents pour la réplication
• virus non-compétents (le plus utilisé) pour la réplication (n’encodent pas toutes les protéines, 1 seul cycle d’infection )

Question 6

Vecteurs adenoviraux

Answer 6

Adn non-enveloppé (Adn double brin)
Protéines précoces (E1A,E1B,E3 et E4)
E: early
Tardives (L1-L5)
L: late
Infection respiratoires

—> incorporation de gènes d’intérêt comme le vecteur adenoviraux est sécuritaire car il est non replicatif…. Plus tu modifie le gène mieux que c’est

Question 7

Comment cibler certaines cellules qui ne sont pas habituellement infectées par adenovirus?

Answer 7

Récepteur CAR reconnaît adeno viraux
Ajoute une cellule adaptatrice et un récepteur à l’endroit précise…. Mutation pour modifier le codant et lui permettre au virus de s’attacher
Nous pourrions faire plusieurs sortent d’adenovirus mais serait trop coûteux

Question 8

Vecteurs adenovirus avantages et désavantages:

Answer 8

Avantages:
- titres élèvés ( fabriquer en grande quantité)
- large tropisme ( protéine d’attachement: fibre, facilement modifiable )
- pas d’insertion mutationnelle ( reste dans le cytoplasme ne s’intègre pas dans les gènes/noyau )
Désavantages :
- expression transitoire ( pas très utile pour maladie génétique ( pas intégrer dans le noyau donc doit en redonner souvent )
-très immunogeniques ( pouvoir de provoquer une réaction immunitaire)

Question 9

Rétrovirus :

Answer 9

-vecteur non-réplicatif
- vecteur:
* gène d’intérêt
* long terminal repeats (LTR) : promoteur,polyA,intégration,réplication et transcription inverse
*Primer binding site (PBS) —> origine de la réplication
* Poly purine tract (importante pour la réplication

—> on enlève les 3 gènes du VIH … l’enveloppe ressemble mais n’est pas pathogène
—-> utilise l’endocytose pour entrer la cellule… RNA est relâché dans le cytosol
Transcription inverse combinaison avec l’ADN pour intégrer le gène

Question 10

Vecteurs rétrovirus:

Answer 10

Avantages:
- intégration: expression permanente
Désavantages : mutagène insertionnelle (cancer)
* activation d’oncogenes (participe à la régulation de la croissance et de la division cellulaire et qui peut causer la prolifération de cellules cancéreuses
* inhibition de suppressions de tumeurs

Question 11

Herpès simplex virus :

Answer 11

ADN linéarité (152 kpb) environ la moitié des 81 des gènes sont non-essentiels pour la réplication virale
-40/50 kb d’ADN exogène peut être introduit ( permet d’introduire de gros fragment donc plusieurs gènes à la fois qui peuvent corriger plusieurs gènes à la fois)

Question 12

Avantage/ désavantage Herpès simplex virus

Answer 12

Avantage:
-grande capacité d’encapsidation
- extra-chromosomique
Désavantages :
-faible titres viraux= coûte chère

Question 13

Comparaison vecteur viraux

Answer 13

Titers:
Adenovirus : 10^11 ( particules virales/ml)
Rétrovirus : 10^7
Herpesvirus: 10^7

Réaction d’orientation :
Adeno: mauvais
Rétro: bon
Herpès: pas très bon

Immunogenicity:
Aden: très haut
Rétro: bas
Herpès: bas

Question 14

Vecteur idéal:

Answer 14

• production facile
  -grande capacité d’insertion
• non-immunogenetique
  -spécifique (adapteur/mutation)

Question 15

Virus oncolytiques (virotherapie oncolytique):

Answer 15

Des virus qui infectent et se réplique uniquement dans les cellules cancéreuses
Ils détruisent les cellules tumorales sans affecter les cellules normales

Question 16

Vrai ou faux. Les cellules normales répriment la réplication virale par un sentier dépendant de l’interféron ?

Answer 16

Vrai grâce au système PKR.. cela empêche la réplication car le PKR détecte les interferons(lymphocyte T et CD4) cela engendre la dimerisation… elle s’active grâce à la phosphorilisation (Elf alpha) traduit les protéines = synthèse elf2 alpha devient inactive = mort cellulaire/ suicide

Question 17

Vrai ou faux. Chez les cellules cancéreuses le sentier dépendant de l’interféron est habituellement déficient ?

Answer 17

Vrai le système de détection PKR est déficient , les cellules cancéreuses sont alors susceptibles a la réplication virale (destruction)

Question 18

Traitement de cancers humains avec le virus de la rougeole (paramyxovirus)

Answer 18

Virus administrés à 90 patient ayant différent type de cancers terminaux et voit régression de la taille de la tumeur… à moins que tu ailles déjà eu la rougeole

Voie administration:
- application topique
-injection intratumorale
- oral
-rectal
-intraveineuse
( tous efficaces)

Question 19

Avantages des virus oncolytiques ?

Answer 19

• # 1 index thérapeutiques élevés (ce que je souhaite (viser cellule cancéreuse vs ce que je ne souhaite pas viser cellule saine) + moins effets secondaires avec la thérapie virale
• # 2.forte activité antitumorale puisqu’utikise des virus réplications (virus prolifèrent et demeurent dans l’organisme jusqu’à ce que toutes les cellules cancéreuses soient détruites (pas besoin d’une série de traitements)#3. Activité synergique avec traitement conventionnels ( traitement conventionnel + vecteur = très efficace)

Question 20

Est- ce que l’expression de certains oncogènes pourrait être responsable de l’infection productive par reovirus?

Answer 20

Virus capable de se répliquer… ras= sur exprimé= capable de s’attaquer à pleins de virus et non un spécifique