Urgente !!!! Flashcards
Quais enzimas necessárias para a técnica de engenharia genética?
endonulceases de restrição, DNA ligase, DNA polimerase, topoisomerase
Qual a função de cada enzima?
Endonuclease de restrição (cliva o DNA em fragmentos específicos )
DNA ligase (liga os fragmentos de Okasaki)
DNA plimerase (sintetiza uma nova fita através da fita molde)
Topoisomerase (desenrola a fita de DNA para a replicação)
O que é um vetor ?
é uma molécula de DNA capaz de transportar a sequencia gênica a ser clonada para o interior da célula
Quais os critérios que o vetor deve possuir ?
O vetor deve crescer de forma fácil em meios de culturas baratos, não ser patogênico, ser competente e ser geneticamente estável em cultura
Quais são os tipos de vetores e quais são suas diferenças ?
Vetores bifuncionais (capazes de se duplicar e serem selecionados em dois hospedeiros diferentes)
Vetores de expressão (utilizados para expressar peptídeos ou proteínas codificados pelo segmento de DNA)
Como ocorre a purificação da proteína ?
é necessário inserir uma sequencia peptídica na região aminoterminal ou carboxiterminal que altera a sequencia do gene e é utilizado cromatografia de afinidade e removida por uma protease específica
Quais as características de um bom hospedeiro?
aceitar o DNA exógeno sem modifica-lo, fácil seleção do hospedeiro que contem o DNA exógeno, para hospedeiros de expressão ser deficientes em proteases e baixo risco de proliferação no ambiente
Como ocorre a expressão em procarioto ?
não possui processamento transcricional sendo necessário a clonagem de DNAc e também não realiza eventos pós- traducionais restrigindo a produção de proteínas
Como ocorre a expressão em eucarioto?
resolve o problema de processamento dos procariotos, mas necessita de técnicas mais sofisticadas
Quais são os produtos produzidos pelos procariotos e eucariotos?
insulina, IGF, somatotrofina, antígenos virais, anticorpos monoclonais, proteínas diversas e biofármacos
Como a biotecnologia está envolvida na área da saúde ?
por meio de desenvolvimento de novos medicamentos, diagnóstico de doenças e aperfeiçoamento de técnicas de tratamento
Em que se baseia a terapia gênica ?
introdução de genes nas células e tecidos dos indivíduos que possuem uma doença causada pela deficiência desses genes (utilizam vetores virais)
Em que se baseia a vacina recombinante ?
deleta- se genes do patógeno que codifica para fatores de virulência, mas mantendo os produtos que induzem a resposta imune
O que são biofármacos ?
são produzidos por microrganismos como fator de coagulação VIII, interferon beta
Em que região do plasmídeo deve-se inserir um gene de interesse para sua expressão?
No sítio múltiplo de clonagem.
O que consiste o corte sticky ends ?
deixa pontas complementares coesivas e se ligam ao vetor por complementariedade de base
O que consiste o corte blunt ends ?
não deixa pontas complementares e é necessário utilizar DNA ligase para inserir ao vetor
Mutagênese sítio-dirigida ?
utiliza técnica de DNA sintético e de clonagem para modificar poucas bases e manipular características de proteínas
Qual a diferença do fago lambda para vetores cosmídeos ?
O fago lambda possui 1/3 do seu genoma não essencial que pode ser substituída por um DNA exógeno
Os vetores cosmídeos apresenta extremidades coesivas quando clivado
Quais são os tipos de cromossomos artificiais ?
BAC-> baseado no plasmídeo F
YAC-> origem de replicação de DNA, telômeros para a replicação do DNA nas regiões terminais do cromossomo e um centrômero para a regeneração durante a mitose
Como você poderia detectar uma colônia contendo um gene clonado, caso já conhecesse a sequência do gene?
Em vetores plasmidiais pela seleção de um marcador e em vetores virais pela placas de lise
Gene repórter
utilizados para sinalizar a presença ou ausência de um elemento genético em particular ou a inserção de DNA em um vetor
Plasmídeo Ti
usado para modificar o DNA de planta
Vetores de expressão
permite aos cientistas que controlem a expressão gênica da célula em questão
Vetores bifuncionais.
permite o transporte de DNA exógeno para dois organismos que não estão relacionados
Para que servem cromossomos artificiais ?
são usados para organismos que possuem genomas maiores e que necessitam de muitos números de clones para obter a sequência completa
Vacinas de subunidades
são contituídas de uma ou mais proteínas específicas do patógeno e são purificadas
Características de um plasmídeo
Origem de replicação, genes de resistência à antibióticos e ser autorreplicantes
O que é RFLP
é um segmento de DNA produzido quando uma endonuclease de restrição hidrolisa o DNA
O que é sonda de DNA
é um fragmento curto de DNA de fita simples
Descreva um experimento com rDNA em duas ou três frases. Utilize os seguintes termos: íntron, éxon, DNA, mRNA, cDNA, RNA- -polimerase e transcriptase reversa.
Em matérial genético de eucarioto é necessário retirar os introns e deixar somente os éxons para que a RNA polimerase se ligue a sequencia de DNA para produzir o RNAm a qual é necessário realizar a transcriptase reversa para produzir o DNAc para ser inserido no vetor bacteriano
Qual a importância da manipulação do DNA in vitro
pode ser utilizado para estudar regulação gênica, aumentar a expressão de um produto gênico de interesse ou para analisar a resposta de uma região reguladora a diversas condições
Como os genes dessas proteínas são obtidos ?
Por meio de proteínas que utilizam um único códon
O que é um gene ?
região codificadora de um produto
Supondo que você desejasse múltiplas cópias de um gene que você sintetizou. Como você poderia obter as cópias necessárias por clonagem? E por PCR?
Por clonagem é só cultivar o vetor com a sequencia de DNA exógeno de interesse.
Por PCR é necessário extrair o DNA de interesse e realizar a técnica
