unidad 4-C Flashcards
¿Qué tipo de muestra se hace para la disrupción mecánica en licuadora?
Cuando tenemos una gran cantidad de tejido
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción mecánica de tipo Dounce?
Células tisulares: útil para protocolos de enrequecimiento de proteínas nucleares o mitocondriales
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción por homogenizador de ultrasonido?
Células, tejidos, bacterias
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción mecánica por pulverización de nitrógeno líquido?
Células vegetales, células animales
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción mecánica por perlas de vidrio
Levaduras
Propósito de la sustancia EDTA para lisis celular
Reducción del daño por oxidación, quelato de iones metálicos
Propósito de la sacarosa o glucosa para la lisis celular
Reducción del daño por oxidación, quelato de iones metálicos
Propósito del detergente para la lisis celular
Reducir la pérdida debida a la asociación con los componentes celulares o la autoagregación. extracción y purificación de proteínas integrales de membrana. solubilización de proteínas poco solubles
Propósito del glicerol para la lisis celular
para estabilización, se puede elevar la muestra hasta en un 50%
Propósito de la sacarosa para la lisis celular
Para estabilización
Propósito de las nucleasas para la lisis celualr
degradación de los ácidos nucleicos, reduce la viscocidad de una solocuión simple
Concentración de la sustancia EDTA para la lisis celular
10 mM
Concentración de la sacarosa o la glucosa para la lisis celular
25 mM
Concentración de los detergentes para la lisis celular
0.01-1%
Concentración del glicerol para la lisis celular
5-10%
Concentración de la sacarosa para la lisis celular
10%
Concentración del tapón de lisis de aproptina
1-2 ug/ml
Concentración del tapon EDTA para la lisis celular
1-10 mM
Concentración del tapon EGTA para la lisis celular
1-10 mM
Concentración del tapon de Luepeptina para la lisis celular
1-2 ug/ml
Concentración del tapon de Pepstatina A
1 ug/ml
PMSF
(17-170 ug/ml)
Elementos que contiene un Buffer de lisis
inhibidores de proteasas
detergente
agentes estabilizadores
Procedimiento o paso con mayor afinidad enzimática en la purificación de proteínas
Afinidad por cromatografía
Define que es la retención en el proceso de cromatografía
efecto producido sobre los componentes de una mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido ancado a un soporte sólido
Define que es el desplazamiento en la cromatografía
Es el efecto ejercido sobre un mezcla por una fase móvil (eluyente), puede ser un líquido o un gas
Define que es el proceso de elución en una cromatografía
migración de los componentes sólidos por acción de la fase móvil
Fase estacionaria de una cromatografía en papel
Papel filtro
fase estacionaria de una cromatografía en columna
columna de aluminia o sílica gel
fase estacionaria de cormatografía en capa fina
placa adsorbente
¿Para qué podemos utilizar una cromatografía en papel?
para aminoácidos individuales o dipeptídos
Cromatografía empleada por Sanger para la secuenciación de proteínas
De papel
La muestra se aplica en la parte superior de la columna y se eluye con una mezcla de disolventes de diferentes polaridades
Cromatpgrafía por columna
Ejemplo de cromatografía en columna
Ensayo Bradford o ensayo específico
cromatografía que consiste en el cam bio gradual del pH y la concentración de sales de la fase móvil para crear un gradiente
Intercambio iónico de dipéptidos
Tipo de moléculas que avanzan más rápidamente en el intercambio iónico de dipeptídos
aquellas con carga opuesta a la matriz
Tipo de cromatografía que se basa en la separación de los componentes según la estructura molecular y el tamaño
Cromatografía por exclusión molecular
¿A qué sigue el orden de elución en la cromatografía por filtración en gel?
Al peso molecular
Cromatografía de mayor especificidad y selectividad para la purificación de proteínas
Cromatografía por afinidad
factores de debilitan la afinidad de las moléculas por la fase estacionaria en la cromatografía por afinidad
pH
Fuerza iónica
Polaridad
Solución
¿Con qué se elimina una etiqueta terminal?
Con una proteasa
Ejemplo de una cromatografía líquida de alto rendimiento de tipo preparativa
Espectrometría de masas
cromatografía que hace uso de bombas de alta presión para mover las moléculas alrededor de la columna
Cromatografía líquida de alto rendimiento
componentes que analiza la cromatografía líquida de alto rendimiento
componentes no volátiles
azúcares
vitaminas
drogas
metabolitos
Ejemplo de etiqueta terminal
Glutation
Determinar la composición de una mezcla
Analítica
Se pueden recuperar los componentes posteriormente a su análisis para estudios posteriores
Preparativa
Herramienta molecular que separa macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
Electroforesis
Herramienta molecular que separa macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
Electroforesis
Tipos de muestras que pueden ser analizados mediante electroforesis
ácidos nucleicos y proteínas
¿La movilidad de una molécula en electroforesis de qué factores dependen?
peso molecular y carga eléctrica
Factores intrínsecos de la molécula
peso molecular
carga eléctrica
Factores extrínsecos de la molécula
concentración en gel
voltaje aplicado
tiempo de corrida
temperatura
Si la relación carga eléctrica-PM es constante la movilidad de qué dependerá
del PM
en una relación constante la movilidad se incrementa si se incrementa el peso
FALSO
en una relación constante la movilidad se incrementa si se incrementa el peso
FALSO
Es la secuencia de una cadena de aminoácidos
Estructura primaria de las proteínas
Ocurre cuando los aminoácidos en la secuencia interactúan a través de puentes de hidrógeno
Estructura secundaria
Ocurre cuando ciertas atracciones están presentes entre hélices alfa y las hojas plegadas
Estructura terciaria
Es una proteína que consta de más de una cadena de aminoácidos
Estructura cuaternaria
Componente del gel de poliacrilamida que funciona para la formación de peptídos
Acrilamida
componente del gel de poliacrilamida que funciona para el cross-linking entre cadenas de polímeros
Bisacrilamida
Proteínas que presentan mayor movilidad
Proteínas globulares
Solución que se debe emplear cuando en la electroforesis el fraccionamiento no obedezca a la diferencia de PM
Emplear SDS en la preparacipon de gel de poliacrilamida
Solución cuando el corrimiento electroforético observado represente más de una cadena polipeptídica
Emplear un desnaturalizante reductor
Factor que afecta a la interpretación de la electroforesis porque cabe la posibilidad de que dos cadenas polipeptídicas independientes corran como si fueran una cadena de mayor pesos molecular
Puentes disulfuro en las proteínas
menciona dos agentes desnaturalizantes reductores
Ditiotreitol o beta-mercaptoetanol
Método de tinción que puede detectar hasta 50 ng
Azul de cromaisse
Método de tinción que incrementa la sensibilidad de detección 50x
Tinción de plata
Conjunto de proteínas de un organismo
Proteoma
