unidad 4-C Flashcards
¿Qué tipo de muestra se hace para la disrupción mecánica en licuadora?
Cuando tenemos una gran cantidad de tejido
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción mecánica de tipo Dounce?
Células tisulares: útil para protocolos de enrequecimiento de proteínas nucleares o mitocondriales
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción por homogenizador de ultrasonido?
Células, tejidos, bacterias
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción mecánica por pulverización de nitrógeno líquido?
Células vegetales, células animales
¿Qué tipo de muestras usamos en la disrupción mecánica por perlas de vidrio
Levaduras
Propósito de la sustancia EDTA para lisis celular
Reducción del daño por oxidación, quelato de iones metálicos
Propósito de la sacarosa o glucosa para la lisis celular
Reducción del daño por oxidación, quelato de iones metálicos
Propósito del detergente para la lisis celular
Reducir la pérdida debida a la asociación con los componentes celulares o la autoagregación. extracción y purificación de proteínas integrales de membrana. solubilización de proteínas poco solubles
Propósito del glicerol para la lisis celular
para estabilización, se puede elevar la muestra hasta en un 50%
Propósito de la sacarosa para la lisis celular
Para estabilización
Propósito de las nucleasas para la lisis celualr
degradación de los ácidos nucleicos, reduce la viscocidad de una solocuión simple
Concentración de la sustancia EDTA para la lisis celular
10 mM
Concentración de la sacarosa o la glucosa para la lisis celular
25 mM
Concentración de los detergentes para la lisis celular
0.01-1%
Concentración del glicerol para la lisis celular
5-10%
Concentración de la sacarosa para la lisis celular
10%
Concentración del tapón de lisis de aproptina
1-2 ug/ml
Concentración del tapon EDTA para la lisis celular
1-10 mM
Concentración del tapon EGTA para la lisis celular
1-10 mM
Concentración del tapon de Luepeptina para la lisis celular
1-2 ug/ml
Concentración del tapon de Pepstatina A
1 ug/ml
PMSF
(17-170 ug/ml)
Elementos que contiene un Buffer de lisis
inhibidores de proteasas
detergente
agentes estabilizadores
Procedimiento o paso con mayor afinidad enzimática en la purificación de proteínas
Afinidad por cromatografía