TP bactéries Flashcards
Milieu EMB (Eosine Bleu de Méthylène) Objectif :
Identification des coliformes chez les entérobactéries.
Le principe repose sur la capacité des bactéries de cette famille à utiliser ou non le lactose comme source carbonée.
Milieu EMB (Eosine Bleu de Méthylène) Principe :
utilisation d’un milieu différentiel légèrement sélectif
Milieu EMB (Eosine Bleu de Méthylène) Identification :
Colonies translucides : Lac -
Colonies violettes : Lac +
Colonies en dos de scarabée : Lac +
Milieu de Kliger - Hajna
Principe:
Milieu différentiel contenant:
- Peptone (20 g/L)
- Lactose (10 g/L)
- Glucose (1 g/L)
- Rouge de phénol (indicateur coloré de pH)
- Thiosulfate de sodium
- Citrate de fer
Milieu de Kliger - Hajna
Objectif:
Ce milieu permet la lecture de l’utilisation (par fermentation et/ou voie oxydative) du glucose, du lactose, avec production de gaz dont l’hydrogène H2 et le CO2.
Milieu de Kliger - Hajna
1 . Culot anaérobie = fermentation
- Pente aérobie = respiration
- H2S & CO2
- Rouge orangée (pas d’acidification) : Glu -
- Jaune (acidification) : Glu +
- Rouge : (alcalinisation de la pente) Lac -
- Jaune : (forte acidification) Lac +
- Production d’H2S si précipité noir
- Production de CO2 si décollement de la gélose.
Ensemencement test ONPG
principe
Test utilisé si une entérobactérie a donné une réponse Lactose- lors du test sur milieu de Kligler. En effet, l’incapacité d’une bactérie à métaboliser le lactose peut être dû soit à l’absence d’une β-galactosidase fonctionnelle, soit de lactose perméase (la non fonctionnalité des 2 autres enzymes impliquées dans l’opéron lactose.)
–>Recherche de l’activité β-galactosidase
Ensemencement test ONPG
Identification
La 𝛽 - Galactosidase permet de transformer l’ONPG en Galactose et en ONG (Prtho-NitroPhénol) qui à la capacité d’émettre dans le jaune.
Milieu jaune: ONPG + ; possède la 𝛽 - Galactosidase active => non assimilation du lactose due à absance de lactose perméase fonctionnel
Milieu incolore : ONPG - ; abs 𝛽 - Galactosidasede => non assimilation du lactose due à absance de 𝛽 - Galactosidase perméase fonctionnel ou aussi de absance de lactose perméase fonctionnel
Ensemencement test ONPG
Protocole (ensemencement)
- Prélèvement de qlq colonies d’un milieu lactosé (Kligler)
- Réaliser une suspension bactérienne
- Ajouter un demi disque ONPG
- Incuber à 37°C
Milieu à la phénylalanine (APP)
identification des bactéries possédant une phénylalanine désaminase.
La phénylalanine est sous l’action de la phénylalanine désaminase (PDA) transformée en APP, celui-ci lorsqu’il est associé au fer absorbe et émise dans le vert.
En présence de fer, l’APP prend donc rapidement une teinte verte, cela est signe de la présence de phénylalanine désaminase. La bactérie est alors notée PDA + .
Milieu « Eau peptonée sans Indole » (EPS)
Objectif
Identification des bactéries possédant une tryptophanase Cette enzyme permet la production d’Indole à partir de tryptophane.
Milieu « Eau peptonée sans Indole » (EPS)
Protocole et identification
Dans une culture liquide, ajouter quelques goutes de réactif de Kovacs :
• Si un anneau rouge apparait, cela caractérise la présence d’Indole et donc de tryptophanase -> Indole + .
• Sinon, absence de tryptophanase, -> Indole -
Milieu Urée - Indole
Objectif
Identification des bactéries possédant une uréase (possibilité de rechercher aussi une tryptophanase)
alcalinisation du milieu, celui-ci virera alors d’une
couleur orangé vers un rose fuchsia, la bactérie est dans ce cas Uréase + .
Milieu Urée - Indole
Protocole
Contient 20g d’urée et 3g de tryptophane/L ainsi qu’un indicateur coloré pour observer le changement de pH : du rouge de phénol.
gélose viande-foie
Type respiratoire, Mettre en culture à 37°C pendant 24h en prenant soin de laisser le bouchon légèrement dévissé pour favoriser la réoxygénation graduée de la gélose.
