tot lol Flashcards
in analiza ELISA, enzimele utilizate sunt:
POD (HRP)
PA (fosfataza alcalina)
GOD
ELISA:
substrat si produs pentru HRP:
OPD (orto phenilen diamina) - p portocaliu, 490 nm
TMB (tetrametil benzidina) - galben , 450 nm
ELISA:
substrat si produs pentru PA:
PNP (para nitrofenil fosfat) - galben, 405 nm
Metil umbeliferil fosfat - metil umbeliferona, 365 - 445 nm.
ce e PSA si metoda de obtinere
Prostate Specific Ag - cancer de prostata - metoda Sandwich
Hormonul sarcinii
hCG - gonadotropina corionica umana
NAD
nicotinamid adenin dinucleotid - coenzima dehidrogenari
PLP
piridoxal fosfat - coenzima (decarboxilari)
TPP
tiamin pirofosfat coenzima
FAD
flavin adenin dinucleotid - cofactor (merge cu GOD)
FMN
flavin mononucleotid - cofactor (cu AAO)
GOT, GPT
glutamat oxaloacetat transaminaza / transferaza (cu PLP)
glutamat piruvat transaminaza (cu PLP)
ALT - (GPT)
AST - (GOT)
sunt cu PLP
alanin aminotransferaza - glutamat piruvat aminotransferaza
aspartat aminotransferaza - glutamat oxaloacetat aminotransferaza
pridioxal fosfat
UI = unitatea de activitate enzimatica
cantitatea de E care catalizeaza transformarea unui micromol de S per minut in cond standard.
activitatea specifica
activitatea unui preparat enzimatic rap la 1 mg proteina (micromoli de S transf pe min per mg proteina) fie la 1 cm^3 extract sau de sol ce contine enzima
Kcat
nr de turnover = k2 exces de S
nr max de molec de S ce pot fi trans de o molec de E pe unit de timp
1 katal
mol/s = cantit de E care trans 1 mol de S per sec
Vo=
vo= Vomax * [S] / ( kM + [S] )
GCK
glucokinaza trans G6P in glicogen in ficat
Conditii analiza enzimatica
saturare cu S, S = 10 kM sau 100 kM exces co enzima - r de ord 0 in rap cu acestea cond initiale temp si pH optime viteza de r dep doar de activ enz
Det ADH
etanol + NAD = acetaldehida + NADH
NADH absoarbe la 340 nm
ACP
ALP
fosfataza acida - prostata
fosfataza alcalina - ficat, oase - rahitism, icter
GMT / GGT
gama glutamil transferaza
E din sange
se prefera ser, special daca e electroforeza
accepta plasma heparinizata
unii anticoag (fluorura, EDTA, citrat) inhibitori necesita activatori (Ca2+)
nu pb hemolizate, lipemia
max 4 h de la recoltare, stocare la rece mai mult timp
Det CK - creatin kinaza
creatin fosfat + ADP (inv CK) = creatina + ATP nu optic activi
ATP + glucoza (HK) = ADP + G6P analog
G6P + NADP (G6PDH) = 6 fosfogluconat + NADPH
NADPH la 340 nm
Det LDH
lactat dehidrogenaza
L-lactat + NAD (LDH) = piruvat + NADH mai putine erori
piruvat + NADH (LDH) = L-lactat + NAD mai speed
340 nm
Valori critice ALP
> ciroza, osteomalacie, rahitism
< tumori osoase, leziuni hepatice
Det ALP
- fenolftalein suflat la pH = 10
- fenil fosfat disodic HIDROLIZA da fenol
la 520 nm rezultatul cu 4AAP 4 amino antipirina
fenol cu gen fosfat = (ALP) = FENOL + FOSFAT
fenol + 4 AAP = chestie oribila la 520 nm
Det ACP
hidroliza alfa naftil fosfat (ACP) = alfa naftol + fosfat
alfa naftol cu cromogen = colorant azoic
comp cromofori Fast Blue B, Fast red TR
ac tartric inhiba PAP = det prin diferenta
flueriometric:
4 metil umbeliferon fosfat (MUP)
Fast Blue B
Fast Red TR
blue = brentamina (o dianisidina diazotata) red = 4 cloro 2 metilbenzen diazoniu
AST (GOT)
transfera amino de la aspartat la alfa ceto acetat
cu PLP
aspartat + alfa ceto glutarat (AST) = oxaloacetat + glutamat
oxaloacetat + NADH (MDH)= malat + NAD
MDH = malat dehidrogenaza
Det ALT (GPT)
1 ala + alfa CG (ALT) = piruvat + glutamat
piruvat + NADH (LDH) = lactat + NAD
2 ala + alfa CG (ALT) = piruvat + glutamat
piruvat + O2 + PO4 (piruvat oxidaza) = acetil fosfat + CO2 + H2O2
H2O2 + fluorofor (o-fenilen diamina) (HRP) = comp fluorescent + H2O
Det GGT
gama glutamiltranferaza
g glutamil de la peptide ca glutationul (GSH) catre alti AA
g glutamil p nitroanilina +gly-gly (GGT) = p nitroanilina + g glutamil - gly-gly
p nito anilina abs la 410 nm
Abs p nitroanilina
410 nm
Abs produs reacyie fenol si 4 AAP
520 nm
DET G6PDH
G6P + NADP () = 6 fosfogluconolactona + NADPH
si reactie cu diaphorase
resazurin + NADPH (diaphorase) = Resorufin + NADP
astia sunt cromoforii
Det amilaza
1 cu Iod scade semnalul ca urm a cons amidon
2 p nitrofenil maltoheptaozida = p nitro fenol care in pH > 7,5 e galben
anticorpii monoclonali inhiba AML salivara
3. AML legata de colorant - amyloze azure - hidroliza - compus ce abs la 595 nm
Absorbtie compus hidroliza amyloze azure
595 nm
BALB
dimercaptopropanol tertbutirat
DTNB , TNB , cine absoarbe la cat?
5,5’, ditiobis 2 nitrobenzoic acid
5 tio 2 nitrobenzoic acid - la 412 nm galben
Det lipaza
BALB (lipaza) = HS-C-C(SH)-C-OH + 3 CH3-CH2-CH2-COOH
R-SH + DTNB = R-S-TNB + TNB
Det ChE
Colinesteraza
ATCh + apa (AChE) = TCh + CH3COOH
TCh + DTNB = TCh-TNB + TNB (412 nm)
Det glucozei
- Reducere in mediu alcalin a Cu2+ -> Cu2O
ac fosfomolibdneic + Cu2O = albastru de molibden - o-toluidina + glucoza (ac acetic glacial) = baza Schiff la 630 nm
- GOD + HRP
- HK + G6PDH
glucometre = cea cu GOD
2 H2O2 + fenol + 4 AAP (HRP) = chinon imina + 4 H2O rosie la 550 nm
metoda biuretului
CuSO4 KNaC4H4O6 mediu alcalin abs la 540 nm
metode det proteine
albumina:
1. precipitare cu saruri sau acizi
2. det cont triptofan indirecta
ac glicoxilic + globuline = compus cromogen (540 nm)
albumina = proteine totale - globuline
3. electroforeza (separare, colorare, det abs benzi, det procente fractii proteice)
4. met spectro cu coloranti anionici metilorange
5. din urina - bandolete cu albastru de bromfenol - se fac albastre (din galben) daca este pozitiv
det uree
cu monoxima da diazina si apa la 540 nm
R Nessler - 450 nm NH3 + K[HgI4] + 3 OH-
R Berthelot - 540 nm
glutamat + NAD + H20 (glutamat dehidrogenaza) = NH4 + ALFA CG + NADH
Det creatinina
creatinina + ac picric = compus colorat (520 nm)
BUN / creatinina
mare (mare / normal)
mare (mare / mare)
mic (mic / normal)
mare / normala = pre renala - insuf card, hipercatab
mare / mare = post renal - obstructie urinara
mic / normal = renal - dieta fara proteine, afectiuni hepatice
la cat abs ac uric
293 nm
Det ac uric
ac uric + O2 + apa (uricaza) = alantoina + CO2 + H2O2
293 nm
Det amoniac
glutamat + NAD + H20 (glutamat dehidrogenaza) = NH4 + ALFA CG + NADH
Det colesterol
- hidroliza KOH alcoolic
- extractia eter petrol
- R cu ac sulfuric si anh acetica - verde
enzimatic
colesterol ester + apa (colesterol esteraza) = col + ac grasi
col + O2 (col oxidaza) = 4 colesten 3 ona + H2O2
2 H2O2 + fenol + 4 AAP (HRP) = chinon imina + 4 H2O rosie 550 nm
La cat abs chinon imina
550 nm
Det tri (ne enzimatica pt ca enzimatica idk)
tri (KOH alcool) = glicerol + ac grasi
glicerol + ac periodic = formaldehida
formaldehida + ac cromotopic = coloratie albastra
Icter hemolitic
f mult urobilinogen, BU crescut, BC normal
scaun inchis, urina normala
Icter obstructiv
BU normal, BC mare, urina brun, urobilinogen scazut, scaun deschis, prezente saruri biliare si pigmenti biliari in urina
Icter hepatocelular
BU si BC mari, bilirub in urina, urobilinogen crescut, prezinta urme saruri biliare
Sensibilitate
variatia semnalului masurat corespunzator variatiei concentratiei analitului de masurat cu o unitate