Tecnología del ADN recombinante Flashcards
elementos que tiene YACS
Del plasmido:
- Origen
- resistencia a antibioticos
De levadura:
- CEN: Centromero = regulacion de la seegregación
- TEL: telomeros = estabiliodzar el cromosoma
- ARS: autonomously replicating sequence = origen de replicacion
- URA3: enzima que sintetiza uracilo
- TRP1: sintesis triptofano
componentes pBR322
- resistencia ampicilina
- resistencia a tetraciclina
- origen pMB1
- permite 15-20 copias
- 6 dianas
- tamaño = 4363
componentes pUC8
- resistencia a ampicilina
- origen pMB1 modificado: ahora 500-700 copias
- polilinker
- tamaño = 2750
- clonamos fragmentos mas largos
- lacZ
componentes plasmidos de clonacion
- Origen
- polilinker
- resistencia
componentes plas de expresion
- origen
- polylinker
- resistencia
- pramotor
- RBS
- terminador
componentes de plasmidos lanzadera
- origen bacteria
- origen levadura
- polylinker
- resistencia antibioticoa
- seleccion levaduras
- promotor
- RBS
tamaño del inserto segun el vector
- plasmidos: 6 -12
- bacteriofagos: 25
- cósmidos: 35
- cromosomas artificiales bacterianos: 300
- cromosomas artificiales levaduras: 200-2000
composicion cosmido
- origen replicacion plasmido
- resistencia a antibioticos
- sitios cos
- ADN adyacente a los COS
q endonucleasa se usa para separar los concatemeros de los cosmidos
Endonucleasa A que corta especificamente en COS
Composicion BACS
- OriS: origen de plasmido F
- repE: proteina helicasa que regula la replicación
- par A y B: proteinas que se aseguran que cada hija obtenga origen
- polylinker
- son de 7/8kb
- clonan de 100 a 300
- transmieten por electroporacion
- son recA(-): para que no haya recombinación
YACS
- Cen centromero: regulacion de la segregación
- ARS: Secuencia de replicación autónoma, origen
- TEL telomero: estabiliza el cromosoma
- Seleccion recombinante de levarudas: URA3 o TRP1
como se llama la secuencia codificadora de ADN que obtenemos en PCR mediante ARNm
CDS (coding sequence
con que ligasa se unen los oligos que se utilizan para hacer conectores sinteticos y pasar de romo a cohesivos
T4 ADN ligasa
