Técnicas Histológicas Flashcards
Coloración de rutina y su fundamento.
Coloración con hematoxilina y eosina.
Su fundamento tiene principios químicos, por atracción electrostática de cargas.
Los colorantes básicos o catiónicos (aceptan protones y quedan con carga +) reaccionan con los componentes ácidos o aniónicos (liberan protones y quedan con carga -) de las células. Y los colorantes ácidos reaccionan con los componentes básicos de las células.
Técnica histológica de rutina.
- Obtención de la muestra.
- Fijación en formalina
- Inclusión en parafina.
- Corte en micrótomo.
- Tinción con hematoxilina y eosina.
Metacromasia.
Es la propiedad de algunos componentes químicos de células o tejidos de cambiar el colorante empleado.
Se da con algunos colorantes catiónicos que aportan color azul; cambian de color al reaccionar con moléculas polianiónicas (GAGs, proteoglucanos, etc).
Ej. Los condroitín sulfatos de la MEC del cartílago. La gelatina de Wharton en el cordón umbilical. Gránulos con heparina de los leucocitos basófilos.
Coloración PAS.
Ácido peryódico + reactivo de Schiff.
Se somete el tejido a una oxidación con ácido peryódico que rompe los anillos de las hexosas y forma grupos aldehídos a partir de los hidroxilos. Se incuba con reactivo de Schiff que adquiere color magenta en presencia de los grupos aldehídos.
Visualiza glúcidos, glucógeno, glucoproteínas. Tiñe hidratos de carbono. Se pueden ver las membranas basales, inclusiones de glucógeno, mucinas.
Técnicas inmunocitoquímicas.
Permite localizar componentes químicos mediante el uso de anticuerpos específicos.
Fundamento: especificidad de la reacción entre el antígeno y el anticuerpo.
Técnica enzimática.
Técnica histoquímica que permite localizar enzimas en células y tejidos. Generalmente se usa fijación aldehídica.
Se incuba el tejido con un sustrato (reactivo de captura – colorante o metal pesado) de la enzima a demostrar, que origine un producto que precipite y tenga un color visible.
¿Cuándo se pierden los lípidos? ¿Cómo se pueden conservar y visualizar?
Se pierden en la aclaración con xilol o solventes orgánicos.
Para conservarlos se utilizan cortes por congelación de tejido fijado en formalina y colorantes que se disuelvan en grasa > Coloración con Sudán.
¿Para qué se utiliza el microscopio de contraste de fase?
Aumenta el contraste sin teñir = permite el examen de células y tejidos no teñidos. Útil para estudiar células vivas.
¿Para qué se utiliza el microscopio invertido?
Permite observar las células adheridas al fondo de las cápsulas de Petri en los cultivos celulares en tiempo real.
¿Para qué se utiliza el microscopio de fondo oscuro?
Detecta el relieve y la estructura superficial de células y microrganismos en preparados frescos sin colorear.
Se usa para el estudio de líquidos con partículas, sangre, raspados de tejidos, etc.
¿Para qué se utiliza el microscopio de luz polarizada?
Estudia la presencia de moléculas o estructuras birrefringentes como el colágeno y los microtúbulos.
¿Para qué se utiliza el microscopio de fluorescencia?
Permite observar sustancias auto-fluorescentes de los tejidos o colorantes (fluorocromos) que se unen a sitios específicos ligados a anticuerpos o sondas.
¿Qué diferencias hay entre la microscopía óptica y la electrónica?
La óptica emplea luz visible y se basa en la absorción de ella por parte del preparado ≠ el microscopio electrónico emplea un haz de electrones y se basa en la dispersión de ellos.
La óptica forma una imagen mayor, virtual e invertida ≠ la electrónica una mayor, real y derecha o invertida en blanco y negro.
La electrónica tiene mayor poder resolutivo ya que su haz tiene menor longitud de onda; puede estudiar la ultraestructura de las células; NO requiere tinción.
Características del microscopio óptico.
Tiene dos lentes: un ocular y un objetivo.
Su funcionamiento se basa en la absorción de luz visible por el preparado.
Posee un límite de resolución de 0.2 μm (micrones). Forma una imagen mayor, virtual e invertida.
Características del microscopio electrónico.
Tiene mayor resolución que el M.O por tener un haz con menor longitud de onda. Las muestras se visualizan digitalizadas en un dispositivo o computadora.
Emplea un haz de electrones y se basa en la dispersión de estos.
NO requiere tinción y forma una imagen mayor, real y derecha o invertida en blanco y negro.
