Técnica histológica

Question 1

Estudio morfológico de los tejidos requiere

Answer 1

Obtención de muestras (tec hist)
Preparación de laminillas (tec hist)
Observación al microscopio

Question 2

¿Qué es técnica histológica?

Answer 2

Es tomar muestras y llevarlo a preparación para poder verlo en el microscopio

Question 3

El estudio de rutina consta de

Answer 3

Tinción con hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formalina

Question 4

Ejemplos de estudios especializados

Answer 4

Histoquímica y citoquímica
Inmunocitoquímica y tec de hibridación
Radioautografía
Cultivo tisular y celular
Centrifugación diferencial
Técnicas especializadas de microscopía

Question 5

Fijación

Answer 5

Es el paso más importante
Para abolir metabolismo
Irreversible
Destruir MO patógneos
Impedir autolisis

Question 6

El propósito de la fijación es

Answer 6

Llevar al microscopio un preparado en donde los tejidos estén perfectamente conservados

Question 7

Metodologías de fijación

Answer 7

Físicas
    Calor (bacterología)
    Congelación
Químicas
     Formaldehído
     Alcohol etílico
     Alcohol pícrico

Question 8

Fijación de enlaces cruzados (química)

Answer 8

Es la acción mediante enlaces covalentes entre las proteínas de un tejido
Proteínas solubles se anclan al citoesqueleto
Endurece el tejido
Formaldehído y paraformaldehído: crean puentes de H entre residuos de lisina en proteínas, es reversible y no altera la estructura general del tejido
Glutaraldehído: Deforma las estructuras alfa-helice en las proteínas. No puede penetrar estructuras tan gruesas. Es irreversible. Amplio uso en ME

Question 9

Precipitantes (desnaturalizantes) quim

Answer 9

Reducen solubilidad sustancias de origen proteico, interrumpen las interacciones hidrofóbicas que dan estructura terciaria
El metanoy y etanol FIJAN MUESTRAS COLAGENADAS
Acetona: Técnica AMEX (Acetona.metilbenzonato-xileno)
Este tipo de fijadores raramente se usan solos, a menos que quieran estudiar ácidos nucleicos
Pueden usarse con ácido acético (Tx de Davison) para evitar endurecimiento y encogimiento que se hace con alcojol, metanol o acetona

Question 10

Agentes oxidantes (quim)

Answer 10

Pueden reaccionar con protes y otras biomoléculas formando uniones que estabilizan estructura tisular
Tetróxido de osmio: Fijador secundario ME
Dicromato de potasio: ácido crómico, permanganato de potasio
Son principalmente ocupados como fijadores secundarios porque solos pueden causar desnaturalización extensa. No penetran bien en secciones guesas del tejido

Question 11

Mercuriales (quim)

Answer 11

Mecanismo de acción desconocido
Aumenta brillo de tinción y permite excelente detalle de núcleos
Usado en tejido hematopoyetico y retículo endotelial

Question 12

Pícratos (quim)

Answer 12

Reacciona con histonas y otras proteínas básicas para formar picratos cristalinos con aa y precipitar proteínas
Preserva bien glucógeno y extrae lípidos
Puede causar basofilia en los tejidos

Question 13

HOPE (quim)

Answer 13

Hepes-glutamic acid buffered-mediated organic
solvent protection effect
Preservar antígenos en IHQ
Mantenimiento de DNA y RNA

Question 14

Afectan la fijación

Answer 14

pH: mantener 7.2-7.4 para ultraestructura
Osmolaridad: hipertónicas e hipotónicas
Tamaño de la muestra: <0.5cm
Vol: 15 veces el vol dela muestra
Temp: ambiente
Duración 1hr/1mm de tejido

Question 15

Inclusión

Answer 15

Prepara el tejido para el corte. Trata de endurecerlo y aclararlo lo más posible

Question 16

Técnicas de inclusión

Answer 16

Tren alcohol-xilol-parafina
Alcohol: deshidratación
Xilol: Aclarado (disminuye indice de refracción)
Parafina

Bloques para cortes

Question 17

Corte

Answer 17

Laminillas de 5-15μ m

Question 18

Coloración

Answer 18

Proceso por el cual un cuerpo es teñido por una sustancia colorante sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado para preparar una solución de tinción

Question 19

Colorantes

Answer 19

Sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos.
Poseen 3 componentes
Esqueleto incoloro: anillo aromático de benceno
Cromóforo: color
Auxocrómo: unión a elementos de tejido

Question 20

Tinción

Answer 20

Colorantes se comportan como ácidos o bases y tienden a formar sales con los radicales ionizables presentes en los tejidos

Question 21

Clasificación de colorantes

Answer 21

Naturales
Sintéticos
Indiferentes (sudán III, rojo escarlata) no forman sales

Question 22

Colorantes

Answer 22

Básicos: reaccionan con los componentes aniónicos
Grupos fosfato de ácidos nucleicos, sulfato de glucosaminoglucanos
Ácidos: reaccionan con los componentes catiónicos
Proteínas citoplasmáticas

Question 23

Hematoxilina

Answer 23

Se extrae de Haematoxylum
campechianum
No es estrictamente colorante básico, es intermediario
No se une por enlace electrostático
Ideal cuando le siguen ticniones acuosas ácidas
Azul

Question 24

Eosina

Answer 24

Producida por reacción entre bromina y fluoreceina
Eosina Y (amarilla, mas usada)
Eosina B (azul)
Pinta rosa

Question 25

1. Desparafinado

Answer 25

Con xileno

Question 26

2. Hidratación

Answer 26

Etanol 100 (2x10)
Etanol 96
Etanol 80
H2O destilada

Question 27

3. Tinción

Answer 27

Destilada (10min) 
Eosina (30seg)
Destilada (2x10)
Grifo (15)
Hematoxilina (3min)

Question 28

4. Deshidratación

Answer 28

Etanol 80
Etanol 96
Etanol 100 (2x10)
Xileno (ya no es de esta fase) (2x10)

Question 29

5. Montado

Answer 29

Medio de montaje
Cubre objetos
Listo

Question 30

Tinción hematoxilina y eosina

Answer 30

Núcleo: morado
rRNA: morado
Citoplasma: Rosa
Colágeno: Rosa

Question 31

Tricrómico de Masson

Answer 31

Núcleos: café
Músculo: rojo
Colágena: azul
Citoplasma: rojo

Question 32

PAS

Answer 32

Carbs: Magenta
Glucógeno
Moco
Membrana basal subyacente a epitelios
Fibras reticulares

Question 33

Carmín de Best

Answer 33

Núcleos: azul

Colágena: rojo

Question 34

Feulgen

Answer 34

Ácidos nucléicos: magenta

Fondo: verde

Question 35

Azul de toluidina

Answer 35

Colorante general
Metacromasia
Núcleo: azul
Citoplasma: azul
Eritrocitos: azul
Colágena: azul
Gránulos mastocitos: púrpura

Question 36

Argentafines

Answer 36

Dependen de presencia en el tejido de grupos fenólicos (catecolamidas o indolamidas) que reducen las sales de plata (u ptros metales)

Question 37

Argilófilas

Answer 37

Se añade un agente reductor como la hidroquinona o formalina

Question 38

Argentafines y argilófilas

Answer 38

Las técnicas se usan en:
Células neuroendocrinas
Fibras de reticulina
Melanina

Question 39

Verhoeff (fibras elásticas)

Answer 39

Usa colorantes férricos, hematoxilina y yodo
Fibras elásticas: negro
Colágeno: rojo
Epitelio queratinizado y músculo: amarillo
Núcleos: azul o negro

Question 40

Reyes (fibras elásticas)

Answer 40

Fibras elásticas: morado-rosa

Colágeno: verde

Question 41

Orceína (fibras elásticas)

Answer 41

Núcleos: azul-violeta

Fibra elástica: rojo

Question 42

Fuscina resorcina

Answer 42

Fibras elásticas: azul negrezca
Núcleos: azul pálido
Colágena: rosa o rojo