strumentazione, vetrino a fresco, vetrino a goccia pendente e colorazione policromatica Flashcards
le cappe sono di due tipi: quali? quali sono le differenze?
CAPPA BIOLOGICA: crea un ambiente sterile per proteggere l’operatore e sterilizzare il 10% dell’aria presente in laboratorio.
CAPPA CHIMICA: aspira e basta.
cosa significa sterile
privo di microrganismi
come si divide il laboratorio e da cosa sono costituite le sue zone
il laboratorio si divide in due zone:
-ZONA REFRIGERANTE presenta 2 frigoriferi con una temperatura tra gli 0 e i 4 gradi e due freezer alla temperatura di -20 gradi.
-ZONA DI TERMOSTATAZIONE dove sono presenti tutti gli strumenti per dare calore
cosa si intende per sterilizzazione
il processo chimico o fisico per eliminare i microrganismi
a cosa serve e come viene utilizzata la stufa
serve per la sterilizzazione a SECCO di vetreria e strumenti resistenti al calore, la sua temperatura va dai 50 ai 290 gradi.
CICLO DI STERILIZZAZIONE IN STUFA: scaldare gli strumenti a 180°C per 30 minuti o a 160°C per un’ora, ricoprendoli con la carta stagnola.
si può usare anche a 50/60 gradi per asciugare semplicemente gli strumenti.
a cosa serve la lampada germicida
serve a mantenere sterili gli strumenti e la vetreria dopo il passaggio in stufa
a cosa serve l’autoclave e come viene utilizzata
serve per la sterilizzazione a UMIDO degli strumenti non resistenti al calore.
STERILIZZAZIONE IN AUTOCLAVE: scaldare gli strumenti a 121°C per 15/20 minuti.
a cosa serve il termostato (o incubatore), come funziona e da cosa è costituito
serve a ispezionare la crescita dei microrganismi, le sue temperature vanno dagli 0 agli 80°C.
la temperatura deve rimanere sempre costante,
presenta un doppio sportello in vetro chiamato SPORTELLO DI ISPEZIONE
classifica i microrganismi in base alla loro temperatura di incubazione
-TERMOFILI 50/55°C
-MESOFILI 30/37°C
-PISCROFILI o CRIOFILI 20/25°C
quali sono gli altri 2 metodi per sterilizzare
-utilizzare il bunsen per sterilizzare gli strumenti resistenti al calore o lavorare vicino al bunsen (fino a 10cm dal bunsen l’aria è sterile)
-metodo delle membrane filtranti, che hanno piccolissimi fori e possono servire anche per il conteggio dei microrganismi
elenca gli strumenti spiegati nella prima lezione
-stufa
-autoclave
-lampada germicida
-incubatore
a cosa serve il microonde
a riscaldare
differenza tra bilancia analitica e bilancia tecnica
BILANCIA ANALITICA: più precisa con un massimo di 200/300g con una sensibilità di 0,001g
BILANCIA TECNICA: un massimo di 2000g e una sensibilità di 0,1g
a cosa serve il miscelatore-omogeinizzatore
serve ad omogeneizzare tutto il campione
a cosa serve la centrifuga
serve a separare la parte solida (pellet) dalla parte liquida
nella microcentrifuga si utilizzano le eppendorf
a cosa serve il bagnomaria
a mantenere un terreno di coltura liquido, viene utilizzato a 80/90°C
come avviene la preparazione di un vetrino a fresco
-una o due gocce di preparato sul vetrino e stendere con un’ansa
-lasciare asciugare all’aria o con l’aiuto del bunsen utilizzando le pinze di legno
-fissare il preparato tagliando la fiamma per 3/4 volte
-coprire il preparato con 2/3 gocce di blu di metilene
-lasciare agire per 50 secondi
-rimuovere l’eccesso di colorante con l’acqua e lasciare asciugare all’aria
-osservare
come viene preparato un vetrino a goccia pendente (o vetrino di Koch)
-formare un quadratino di glicerina intorno alla concavità del vetrino di Koch
-posizionare una goccia di preparato sul vetrino coprioggetto
-ribaltare il vetrino di Koch sul vetrino coprioggetto, così che il preparato si trovi all’interno della concavità
-osservare
in cosa si differenzia il vetrino di Koch
presenta una conca che permette di non schiacciare i microrganismi, così da poterli osservare ancora vivi e in movimento
come viene effettuata la colorazione policromatica di gram
-posizionare una o due gocce di preparato sul vetrino e stenderle con un’ansa
-asciugare o all’aria o al bunsen
-fissare il campione
-ricoprire il vetrino con il cristalvioletto (colorante blu-viola) e lasciare agire 1 minuto
-togliere l’eccesso senza lavare e ricoprire con il Lugol (un mordenzante che fissa il colorante) e lasciare agire 1 minuto
-lavare con acqua e versare a gocce l’alcool etilico (scioglie la parete dei gram-, perchè fatta di lipopolisaccaridi, decolorandoli) e lasciare agire per 30 secondi
-lavare con acqua e ricoprire con la safranina (colorante rosso) e lasciare agire per 30 secondi
-lavare il vetrino con acqua distillata e lasciare asciugare
-osservare con olio a immersione a 100x
