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Biochimie - M1 > Séquence 4 - Méthodes d'étude des cellules > Flashcards

Séquence 4 - Méthodes d'étude des cellules Flashcards

1
Q

Avec l’aide de quel appareil se fait l’étude des cellules ?

A

Microscopes plus ou moins performants

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Q

Par quel moyen se fait l’obtention d’un échantillon de tissus en provenance d’un organisme vivant ?

A

Biopsie

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3
Q

Quelle est la taille d’une cellule ?

A

Entre 10 et 100 um

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4
Q

Comment peut-on voir les organites cytoplasmiques ?

A

A la microscopie électronique

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Q

Quelles sont les méthodes d’étude des cellules ?

A

La microscopie optique
La microscopie électronique
Les méthodes d’étude de la composition cellulaire
La culture cellulaire
L’immuno-sérologie

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6
Q

Qu’est ce que la microscopie optique ?

A

Il s’agit d’études effectuées à l’aide d’un microscope, assemblage plus ou moins complexe de lentilles (généralement deux) et d’une source de lumière, permettant d’obtenir différents grossissements de l’image

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7
Q

La résolution de cet appareil peut atteindre combien de micromètre ?

A

0,2 micromètre

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8
Q

Pourquoi la méthode de la microscopie optique nécessite la coloration et la fixation ?

A

Sans la coloration et la fixation, la cellule resterait transparente et donc invisible

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9
Q

Pourquoi la méthode de la microscopie optique nécessite des coupes très fines ?

A

Pour observer les structures de manière indépendante en limitant les superpositions

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10
Q

Quelles sont les étapes de la méthode de la microscopie optique ?

A

Prélèvement de tissu ou de cellules (par biopsie ou pds)

Fixation des structures (permet de stabiliser les structures cellulaires)

Découpage (le tissu est découpé un fines lamelles à l’aide d’un microtome)

L’échantillon est soumis à des techniques de visualisation des structures (coloration)

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11
Q

Lors de la microscopie optique, comment peut se faire l’étape de la fixation des structures ?

A

Par déshydratation ou par congélation

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12
Q

Que permet la congélation ?

A

Des coupes très fines, sans inclusion préalable

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13
Q

Quelles sont les principales colorations utilisées ?

A

L’hématoxyline-éosine
Rouge carmin
Résorcine
Fuschine

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14
Q

Que permet la microscopie électronique contrairement à la microscopie optique ?

A

Elle permet une meilleure résolution (jusqu’à 0,5 angström (0,5x10-10m)) et un agrandissement plus poussé (plusieurs milliers de fois)

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15
Q

De quelles étapes la microscopie électronique a-t-elle besoin ?

A

Interaction potentielle des électrons avec la matière vivante, et notamment avec l’eau qu’elle contient

Préparation par déshydratation ou cryogénisation

Traitement permettant d’accentuer le contraste entre différentes structures

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16
Q

Quelles sont les deux techniques utilisées pour la microscopie électronique ?

A

Microscopie électronique à transmission

Microscopie à balayage

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17
Q

Comment fonctionne la microscopie électronique à transmission ?

A

Un faisceau d’électrons est transmis à travers un échantillon très fin à étudier

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18
Q

Comment fonctionne la microscopie à balayage ?

A

Utilise un faisceau d’électrons émis depuis un canon et qui fonctionne comme une “sonde” qui explore l’échantillon –> émet un rayonnement caractéristique qui est enregistré

19
Q

Quelles sont les différentes méthodes pour l’étude de la composition ?

A

Spectrométrie
Chromatographie
Histochimie (et son dérivé l’immunohistochimie)
Électrophorèse

20
Q

En quoi consiste la spectrométrie ?

A

La spectrométrie consiste à décomposer une donnée en ses constituants, comme décomposer un mélange de molécules en ses plus simples composantes selon leur masse et de préciser ainsi leurs caractéristiques chimiques

21
Q

Comment est effectuée l’analyse de la spectrométrie ? Que permet-elle de définir ?

A

Elle est effectuée en phase gazeuse

Elle permet notamment de définir la composition chimique des molécules

22
Q

Qu’est ce que la chromatographie ?

A

La chromatographie est une méthode de séparation des constituants d’un mélange en phase liquide par exemple

23
Q

Quel est le principe de la chromatographie ?

A

Le principe consiste à utiliser 2 phases, une fixe et une mobile (liquide ou gazeuse)

24
Q

Il existe une méthode d’adaptation de la chromatographie, comment s’appelle-t-elle ?

A

La chromatographie d’exclusion

25
Q

En quoi consiste la chromatographie d’exclusion ?

A

Elle consiste à faire traverser une solution moléculaire par un milieu de billes poreuses.

Le passage des molécules se fait alors en fonction de leur taille (masse moléculaire) ainsi que de leur configuration spatiale

26
Q

Il existe une autre version de la chromatographie d’exclusion, comment s’appelle-t-elle ?

A

La chromatographie à échange d’ions

27
Q

Qu’utilise la chromatographie à échange d’ions ?

A

Elle utilise des résines chargée en anions ou cations

28
Q

En quoi consiste la chromatographie à échange d’ions ?

A

Les molécules de charge électrique opposée seront immédiatement fixées sur la résine alors que les molécules neutres ou de même charge resteront libres dans la phase mobile

29
Q

Dans la chromatographie à échange d’ions, que permet la résine chargée ?

A

Elle permet de retenir les ions complémentaires : une résine chargée positivement permet de retenir les anions

30
Q

Que permet de retenir une résine chargée négativement ?

A

Les cations

31
Q

Quel est le principe de l’histochimie ?

A

Le principe de l’histochimie est de mettre en évidence une famille de molécules (ou le produit d’une activité enzymatique) grâce à son affinité tinctoriale

32
Q

Que permet la méthode de l’histochimie ?

A

Elle permet notamment d’identifier les acides nucléiques par la coloration et par lyse enzymatique, basée sur l’utilisation d’enzymes spécifiques

33
Q

Sur quels enzymes spécifiques se base l’histochimie ?

A

DN-ase

RN-ase

34
Q

Qu’utilise l’immunohistochimie ?

A

L’immunohistochimie utilise des anticorps marqués pour visualiser un substrat (technique du Western Blot)

35
Q

Pour quoi est utilisé l’hybridation in situ ?

A

L’hybridation in situ est utilisée pour mettre en évidence les acides nucléiques en y introduisant des bases azotées marquées

36
Q

Que permet le fractionnement cellulaire ?

A

Le fractionnement cellulaire permet de détruire la membrane pour ensuite séparer les organites par centrifugation, selon leur poids

cf le cours pour la méthode de centrifugation

37
Q

L’étude des protéines et des acides aminés fait le plus souvent appel à quel méthode d’étude ?

A

L’électrophorèse

38
Q

Pour quoi est le plus souvent utilisé l’électrophorèse ?

A

Pour l’étude des protéines et des acides aminés

39
Q

Que permet la culture cellulaire ?

A

Cette méthode permet d’induire la multiplication des cellules en dehors de l’organisme d’origine et permet leur étude plus approfondie

40
Q

Comment peuvent-être les cellules cultivées ?

A

Mobiles (les cellules sanguines)

Adhérentes

Constituées en tissu

41
Q

Que permet l’immuno-sérologie ?

A

Elle permet de dépister les molécules présentes en surface des cellules.

Elle est notamment utile pour définir les caractères immunologiques des cellules qui caractérisent la compatibilité tissulaire entre deux individus

42
Q

Sur quoi est basée la méthode de l’immuno-sérologie ?

A

La méthode est basée sur le fait que toutes les cellules présentent des protéines et glycoprotéines de surface membranaire à fonction d’antigènes, et qui leur confèrent une spécificité immunitaire

43
Q

Lors de la méthode de l’immuno-sérologie, sous quel terme sont regroupées ces molécules ?

A

Complexe majeur d’histocompatibilité
–> CMH

44
Q

Lors de la méthode de l’immuno-sérologie, quelles sont les antigènes de surface les plus utilisés ?

A

Ceux des groupes sanguins
L’antigène D
Multitude d’antigènes connus comme système HLA (human leucocyte antigenes)

Biochimie - M1 (2 decks)

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