Séquence 4 - Méthodes d'étude des cellules Flashcards
Avec l’aide de quel appareil se fait l’étude des cellules ?
Microscopes plus ou moins performants
Par quel moyen se fait l’obtention d’un échantillon de tissus en provenance d’un organisme vivant ?
Biopsie
Quelle est la taille d’une cellule ?
Entre 10 et 100 um
Comment peut-on voir les organites cytoplasmiques ?
A la microscopie électronique
Quelles sont les méthodes d’étude des cellules ?
La microscopie optique
La microscopie électronique
Les méthodes d’étude de la composition cellulaire
La culture cellulaire
L’immuno-sérologie
Qu’est ce que la microscopie optique ?
Il s’agit d’études effectuées à l’aide d’un microscope, assemblage plus ou moins complexe de lentilles (généralement deux) et d’une source de lumière, permettant d’obtenir différents grossissements de l’image
La résolution de cet appareil peut atteindre combien de micromètre ?
0,2 micromètre
Pourquoi la méthode de la microscopie optique nécessite la coloration et la fixation ?
Sans la coloration et la fixation, la cellule resterait transparente et donc invisible
Pourquoi la méthode de la microscopie optique nécessite des coupes très fines ?
Pour observer les structures de manière indépendante en limitant les superpositions
Quelles sont les étapes de la méthode de la microscopie optique ?
Prélèvement de tissu ou de cellules (par biopsie ou pds)
Fixation des structures (permet de stabiliser les structures cellulaires)
Découpage (le tissu est découpé un fines lamelles à l’aide d’un microtome)
L’échantillon est soumis à des techniques de visualisation des structures (coloration)
Lors de la microscopie optique, comment peut se faire l’étape de la fixation des structures ?
Par déshydratation ou par congélation
Que permet la congélation ?
Des coupes très fines, sans inclusion préalable
Quelles sont les principales colorations utilisées ?
L’hématoxyline-éosine
Rouge carmin
Résorcine
Fuschine
Que permet la microscopie électronique contrairement à la microscopie optique ?
Elle permet une meilleure résolution (jusqu’à 0,5 angström (0,5x10-10m)) et un agrandissement plus poussé (plusieurs milliers de fois)
De quelles étapes la microscopie électronique a-t-elle besoin ?
Interaction potentielle des électrons avec la matière vivante, et notamment avec l’eau qu’elle contient
Préparation par déshydratation ou cryogénisation
Traitement permettant d’accentuer le contraste entre différentes structures
Quelles sont les deux techniques utilisées pour la microscopie électronique ?
Microscopie électronique à transmission
Microscopie à balayage
Comment fonctionne la microscopie électronique à transmission ?
Un faisceau d’électrons est transmis à travers un échantillon très fin à étudier
Comment fonctionne la microscopie à balayage ?
Utilise un faisceau d’électrons émis depuis un canon et qui fonctionne comme une “sonde” qui explore l’échantillon –> émet un rayonnement caractéristique qui est enregistré
Quelles sont les différentes méthodes pour l’étude de la composition ?
Spectrométrie
Chromatographie
Histochimie (et son dérivé l’immunohistochimie)
Électrophorèse
En quoi consiste la spectrométrie ?
La spectrométrie consiste à décomposer une donnée en ses constituants, comme décomposer un mélange de molécules en ses plus simples composantes selon leur masse et de préciser ainsi leurs caractéristiques chimiques
Comment est effectuée l’analyse de la spectrométrie ? Que permet-elle de définir ?
Elle est effectuée en phase gazeuse
Elle permet notamment de définir la composition chimique des molécules
Qu’est ce que la chromatographie ?
La chromatographie est une méthode de séparation des constituants d’un mélange en phase liquide par exemple
Quel est le principe de la chromatographie ?
Le principe consiste à utiliser 2 phases, une fixe et une mobile (liquide ou gazeuse)
Il existe une méthode d’adaptation de la chromatographie, comment s’appelle-t-elle ?
La chromatographie d’exclusion
En quoi consiste la chromatographie d’exclusion ?
Elle consiste à faire traverser une solution moléculaire par un milieu de billes poreuses.
Le passage des molécules se fait alors en fonction de leur taille (masse moléculaire) ainsi que de leur configuration spatiale
Il existe une autre version de la chromatographie d’exclusion, comment s’appelle-t-elle ?
La chromatographie à échange d’ions
Qu’utilise la chromatographie à échange d’ions ?
Elle utilise des résines chargée en anions ou cations
En quoi consiste la chromatographie à échange d’ions ?
Les molécules de charge électrique opposée seront immédiatement fixées sur la résine alors que les molécules neutres ou de même charge resteront libres dans la phase mobile
Dans la chromatographie à échange d’ions, que permet la résine chargée ?
Elle permet de retenir les ions complémentaires : une résine chargée positivement permet de retenir les anions
Que permet de retenir une résine chargée négativement ?
Les cations
Quel est le principe de l’histochimie ?
Le principe de l’histochimie est de mettre en évidence une famille de molécules (ou le produit d’une activité enzymatique) grâce à son affinité tinctoriale
Que permet la méthode de l’histochimie ?
Elle permet notamment d’identifier les acides nucléiques par la coloration et par lyse enzymatique, basée sur l’utilisation d’enzymes spécifiques
Sur quels enzymes spécifiques se base l’histochimie ?
DN-ase
RN-ase
Qu’utilise l’immunohistochimie ?
L’immunohistochimie utilise des anticorps marqués pour visualiser un substrat (technique du Western Blot)
Pour quoi est utilisé l’hybridation in situ ?
L’hybridation in situ est utilisée pour mettre en évidence les acides nucléiques en y introduisant des bases azotées marquées
Que permet le fractionnement cellulaire ?
Le fractionnement cellulaire permet de détruire la membrane pour ensuite séparer les organites par centrifugation, selon leur poids
cf le cours pour la méthode de centrifugation
L’étude des protéines et des acides aminés fait le plus souvent appel à quel méthode d’étude ?
L’électrophorèse
Pour quoi est le plus souvent utilisé l’électrophorèse ?
Pour l’étude des protéines et des acides aminés
Que permet la culture cellulaire ?
Cette méthode permet d’induire la multiplication des cellules en dehors de l’organisme d’origine et permet leur étude plus approfondie
Comment peuvent-être les cellules cultivées ?
Mobiles (les cellules sanguines)
Adhérentes
Constituées en tissu
Que permet l’immuno-sérologie ?
Elle permet de dépister les molécules présentes en surface des cellules.
Elle est notamment utile pour définir les caractères immunologiques des cellules qui caractérisent la compatibilité tissulaire entre deux individus
Sur quoi est basée la méthode de l’immuno-sérologie ?
La méthode est basée sur le fait que toutes les cellules présentent des protéines et glycoprotéines de surface membranaire à fonction d’antigènes, et qui leur confèrent une spécificité immunitaire
Lors de la méthode de l’immuno-sérologie, sous quel terme sont regroupées ces molécules ?
Complexe majeur d’histocompatibilité
–> CMH
Lors de la méthode de l’immuno-sérologie, quelles sont les antigènes de surface les plus utilisés ?
Ceux des groupes sanguins
L’antigène D
Multitude d’antigènes connus comme système HLA (human leucocyte antigenes)
