RT Flashcards
Mitose, 2 parties
Mitose : division nucléaire
Cytocinese: division cytoplasmique
Etapes de la mitose
Pro-Meta-Ana-telo-cytocinese
Meiose
Phase S - Meiose I (reductionnelle) - Meiose II (equationnelle)
Le caryotype de fait en isolant les cellules en
Metaphase
Type d’ARN
t : transport = 16 %
r: ribo = 82 %
Convention de lecture des acides nucléiques
5’ - 3’
Phosphate en 5
OH en 3
Etapes de la réplication de l’ADN
1- Recherche de l’origine (1 seule chez pro, plusieurs chez Eu)
2-Initiation :Topoisomerase (empeche emmelement) , Helicase (deroule double helice et separe double brin), proteine SSB (embeche 2 brins de se reappatrier)
3-Replication, construit nouveau brin 5’-3’ (donc de 3’ a 5 du brin matrice)
Brin avance / retardé
retardé = fragments d’okazaki
Structure gène eucaryote
1 - Region codante Exon
2- Regions non codantes Introns
3-Regions regulatrices de l’expression d’un gène
Transcription d’un gène, definition
Mecanisme permettant la synthèse de l’ARNm, c’est donc la production d’une molécule d’ARN à partir de l’ADN d’un gène.
le promoteur est
Une sequence sur laquelle se fixe l’ARN polymérase
Etapes de la transcription de l’ARN
Dans le sens 5’-3’ (donc de 3’ a 5 ‘ de la matrice)
L’ARNm est donc identique au brin codant et complémentaire au brin matrice
Codons d’initiation et de terminaison (stop) de la synthese des proteines
Initiation : AUG
Stop : AUG
UAA
UAG
Spectro, concentration d’ADN a
260nm
Proteines 280nm
Absorbance pour dosage ADN spectro
Absorbance de 1 = 50ug/mL ADN double
Donc ex. solution diluée 1/40 , absorbance de 0.3
0.3x40x50=600ug/mL
Absorbance pour dosage ARN spectro
Absorbance de 1 = 40ug/mL ARN simple
Ratio 260/280
permet d’évaluer la propreté
Ratio petit = contaminé
Selon méthode Dnazol on veut entre 1.4 et 2.0
Methode Phenol/chloro on veut entre 1.8 et 2.0
SI >= à 2 = contaminé à l’ARN
Ajouter de la RNAse A à la solution
Etapes de la PCR
Denaturation (chaleur pour séparer)-Hybridation(Temperature 5degre au dessous du TM de l’amorphe ayant le Tm le plus bas)-Élongation(Taq synthetise brin de l’amorce, ad bout du brin)
PCR-RFLP
Met en évidence une portion d’un gene porteur d’une mutation d’une base. Mutations génétiques (CF, hémochromatose)
PCR temps réel
Temps réel
minimum 3 amorces
Quencher
Fluorescence
Utile pour determiner charge virale ou bacterienne
Suivi
Peut identifier mutation (COmme RFLP) mais plus rapidement.
RT-PCR (RT=Reverse transcription)
Permet de faire PCR a partir de l’ARNm, donc mesuré a partir de l’expression des gènes.
FISH
Fluo in situ hybridation
A l int de la cellule en metaphase
Sonde marquée d’un fluorochrome
Blot
Western: Transfert proteine
Southern: ADN
Northern: ARN
Eastern: lipid
